Owing to its involvement in extracellular matrix-glial cell interactions, discoidin domain receptor 2 (DDR2) has emerged as a promising pharmacological target in various human diseases, including cancers and neurodegenerative disorders. Two allosteric inhibitors, WRG-28 and DDR2-IN-1, selectively target DDR2. Their therapeutic efficacy is likely to depend on blood-brain barrier (BBB) penetration; however, a lack of analytical methods has so far left their pharmacokinetic properties and BBB permeability profiles largely unexplored. In this study, a liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was developed and validated for the simultaneous quantification of WRG-28 and DDR2-IN-1 in plasma and brain tissue. The extraction procedure was simple and based on protein precipitation followed by lipid removal. This analytical method met the acceptance criteria of the European Medicines Agency guidelines. The calibration range was linear from 1 to 1000 ng/mL for both compounds. In addition, five prediction software tools were used to estimate pharmacokinetic parameters relevant to the BBB penetration of the two compounds. Finally, the method was applied in preclinical pharmacokinetic studies using elacridar, an efflux transporter inhibitor.

Therapeutic drug monitoring of protein kinase inhibitors is widely practiced worldwide. Based on the example of ripretinib dosage requested by a clinician, we detailed the process of method development, using a literature-based approach while ensuring the sustainability of the method to be as environmentally friendly as possible. Therefore, a UPLC-MS/MS method for ripretinib and its active metabolite was optimized and validated using the corresponding stable isotopic internal standards in human plasma. The procedure employed a mobile phase mixture of water with 1% acetic acid and 0.1% formic acid, and acetonitrile. Positive electrospray ionization was performed, coupling with multiple reaction monitoring of m/z 510.4 → 417.4 and 510.4 → 389.4 for ripretinib, and 496.3 → 403.3 and 496.3 → 375.3 for N-desmethyl-ripretinib. The method was successfully validated according to the current version of the ICH Guideline provided by the EMA. The greenness assessment score of this procedure was better than previously published approaches using the AGREE metric. The validated UPLC-MS/MS method successfully monitored ripretinib and its metabolite concentrations in clinical and preclinical models.

Methoxpropamine (MXPr) is an arylcyclohexylamine dissociative drug with structural similarities with 3-MeO-PCE, ketamine and deschloroketamine. MXPr was identified for the first time in Europe in October 2019 in Denmark and is considered a new psychoactive substance. We undertook the molecular identification and characterization of MXPr in urine, hair and powder samples. We used a combination of several analytical methods: liquid-state nuclear magnetic resonance (NMR), infra-red spectroscopy (IR) and liquid chromatography high-resolution mass spectrometry (LC-HRMS). The second objective was to explore the metabolism of MXPr in silico and in vitro. To detect characteristic metabolites that prove MXPr consumption by urine analysis, pooled human liver microsome (pHLM) assays were performed and evaluated using liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry (LC-QToF-MS). A software algorithm (Unifi®) was used to predict in silico biotransformations of MXPr. Three metabolites were identified in the in vitro studies including N-despropyl(nor)MXPr, O-desmethyl MXPr and dihydroMXPr. Most of these phase II metabolites were confirmed to be present in urine and hair samples collected from an MXPr consumer. This is the first report of the identification of MXPr in France with analytical findings. This study highlights the challenge of identifying new psychoactive substances (NPS) when they are missing from compound libraries and if a standard is not available. The use of various complementary analytical methods combined with HRMS offers a promising approach for the molecular characterization of NPS.

Methotrexate (MTX) is widely used as antineoplastic drug (AD) and as an immunosuppressive. As a result, many healthcare professionals are exposed to this drug which is classified as dangerous to handle due to its reproductive toxicity in humans. Since the 1990 s, cases of internal contamination of professionals handling this molecule have been reported in the literature and even recently MTX was detected in the urine of professionals. To date, there is no toxicological reference value for occupational exposure to MTX. Given the toxicity of this molecule, the internal contamination of professionals must be reduced and kept as low as possible according to the ALARA principle (as low as reasonably achievable). The aim of this work was to develop an UHPLC-MS/MS method in MRM (Multiple Reaction Monitoring) and MRM3 modes for routine application in MTX occupational biomonitoring. Good linearity (r greater than 0.997), precision (CV < 15 %), and accuracy (94.97-97.80% of the nominal value in MRM mode; 105.90-112.25% in MRM3 mode) were achieved. This method is reliable with high specificity and high sensitivity especially in MRM3 mode and has better LOD and LLOQ (1 ng/L and 2.5 ng/L) than published methods to date. The MRM3 mode increases the signal-to-noise ratio compared to the MRM mode.It was then applied routinely for the biological monitoring of healthcare professionals exposed to methotrexate. One hundred and seventeen urine samples from 93 healthcare professionals occupationally exposed to methotrexate were analyzed. Fifteen healthcare professionals (16.1 %) were found to be contaminated with methotrexate. Urine concentration levels ranged from 2.5 to 380 ng/L with a median value of 8.9 ng/L. Such efficient analytical tool is essential for the routine biological monitoring of healthcare professionals exposed to methotrexate. It also enables the traceability of occupational exposure to this molecule and the evaluation of the effectiveness of preventive measures such as individual and collective protective equipment.

Nirmatrelvir/ritonavir association has been authorized for conditional use in the treatment of COVID-19, especially in solid-organ transplant recipients who did not respond to vaccine and are still at high risk of severe disease. This combination remains at risk of drug interactions with immunosuppressants, so monitoring drug levels seems necessary. After a simple protein precipitation of plasma sample, analytes were analyzed using an ultrahigh performance liquid chromatography system coupled with tandem mass spectrometry in a positive ionization mode. Validation procedures were based on the guidelines on bioanalytical methods issued by the European Medicine Agency. The analysis time was 4 min per run. The calibration curves were linear over the range from 10 to 1000 ng/mL for ritonavir and 40 to 4000 ng/mL for nirmatrelvir, with coefficients of correlation above 0.99 for all analytes. Intra-/interday imprecisions were below 10%. The analytical method also meets criteria of matrix effect, carryover, dilution integrity, and stability. In the context of a SARS-CoV-2 infection in a renal transplant recipient, we present a case of tacrolimus overdose with serious adverse events despite discontinuation of nirmatrelvir and ritonavir. The patient had still effective concentrations of nirmatrelvir and tacrolimus 4 days after drug discontinuation. This method was successfully applied for therapeutic drug monitoring in clinical practice.

In routine hormonology, liquid chromatography mass spectrometry (LCMS) is now an established technique for androgen, urinary cortisol and metanephrine assay. It has the undeniable advantage of great analytical specificity, but with sensitivity that clearly depends on financial investment in a very high-end spectrometer. We describe the general principles of LCMS and the routine applications so far developed in hormonology. The purpose is to familiarise endocrinologists with the techniques under development and their pros and cons.

Anthracycline antineoplastic drugs (doxorubicin, epirubicin, daunorubicin) are "hazardous drugs for handling" by healthcare professionals. To monitor their occupational exposure, a highly sensitive ESI-UHPLC-MS/MS method for the assay of anthracyclines in urine was developed. The urine extraction consisted of SPE extraction method. A good linearity (r > 0.996), precision (CV < 14.4%), and accuracy (bias < 13.6%) were achieved for the three drugs. The lower limit of quantification (LOQ) was 10 ng/L. This LOQ value is equal to the LOQ of published methods except for epirubicin, for which the LOQ value is better by a factor of 10 (best published LOQ value: 100 ng/L). Applying this method in routine, more than 77 healthcare professionals occupationally exposed to anthracyclines were monitored and 77 urines were analyzed. Two healthcare professionals (2.6%) were found to be contaminated to doxorubicin and/or epirubicin. The measured concentrations ranged from 17.7 to 218 ng/L. Such an efficient analytical tool, combining both high specificity and sensitivity is essential for reliable highlight of contamination during biological monitoring of healthcare professionals widely exposed to these drugs. This anthracycline antineoplastic drugs exposure monitoring allows healthcare professionals for assessing effectiveness individual and collective protective measures and for ensuring traceability of occupational exposure to these drugs.

BACKGROUND:Cerebral Creatine deficiency syndromes (CCDS) include three hereditary diseases affecting the metabolism of creatine (Cr): arginine glycine amidinotransferase deficiency, guanidinoacetate methyltransferase deficiency and disorders of creatine transporter. These pathologies cause a brain creatine deficiency responsible of non-specific neurological impairments with mental retardation. LC-MS/MS measurements of guanidinoacetic acid (GAA) and creatine in urine and plasma are an important screening test to identify the deficit. Analysis of this polar and basic molecules not hold on standard column requires a derivatization step to butyl-esters. To overcome this long and fastidious derivatization, an ion pairing (IP) method was chosen in this study. METHOD:IP method was validated using Comité francais d'accréditation (COFRAC) recommendations. Then, urine GAA and creatine of 15 patients with a CDS deficiency suspected were tested y LC-MS/MS using IP technique, and performances were assessed with reference laboratory method (butylation method). Moreover, references values were suggested y the study of 100 urines samples of healthy patients. RESULTS:The method developed provided a good accuracy and precision with intra and inter-day coefficients of variation (CVs) <15%. The curve was linear for the biological and pathological concentrations. The comparison with the reference method did not reveal any significant difference for analytical performances but showed a simplification of the preparation of samples. CONCLUSION:The use of IP technique that we have developed demonstrated a good correlation with the butylation method. Moreover, this new method not only allows a simplification of the technique, but also decreases in run time.

Le diagnostic biologique d’hyperplasie congénitale des surrénales (HCS) repose sur l’augmentation, souvent après test au synacthène, de la concentration sérique de 17-hydroxyprogestérone (17OHP) pour les déficits en 21-hydroxylase et du 11-désoxycortisol (11DC) pour les déficits en 11-βhydroxylase. L’interprétation du résultat fait intervenir le 95e percentile des valeurs de référence obtenues dans une population contrôle. Ces valeurs sont historiquement établies par immunodosage. Nous proposons de les déterminer par spectrométrie de masse (LCMS). Les résultats des tests au synacthène de 102 femmes ont été repris rétrospectivement : pour 92 d’entre elles (21 [14 ;62]ans, médiane [5e ;95e] percentiles) les diagnostics de HCS et d’insuffisance surrénalienne ont été écartés. Pour 10 autres (31[17 ;46]ans) l’HCS est confirmée ou fortement suspectée. Les valeurs du cortisol sérique (irF) ont été obtenues par immunodosage, celles de la ms17OHP et ms11DC et des autres stéroïdes par LCMS. À T0 min et T60 min, les concentrations de ms11DC sont de 0,6 [0,2 ;3,4] & 2,2 [0,7 ;6,9] pour la population contrôle vs 1.0 [0,3 ;3,2] & 3,4 [0,8 ;8,6] nmol/L pour HCS (p > 0,05). Celles de ms17OHP sont de 1,9 [0,4 ;6,3] & 3,5 [1,7 ;9,9] vs 24,1 [14,1 ;38,3] & 95,1 [48,9 ;190,2] nmol/L (p < 0,01). Les concentrations de irF obtenues pour les 2 groupes sont significativement différentes. Celles de msTestostérone, msAndrostènedione et msDéhydroandrostérone ne le sont pas. Les concentrations post-synacthène de ms11DC trouvées dans notre population contrôle peuvent constituer des valeurs de référence pour le déficit en 11βhydroxylase. Le triple du 95e percentile (ici 21 nmol/L) peut être proposé comme seuil de positivité pour le screening d’une large population.

Several studies have shown that therapeutic drug monitoring of tyrosine kinase inhibitors (TKI) can improve their benefit in cancer. An analytical tool has been developed in order to quantify 17 tyrosine kinase inhibitors and 2 metabolites in human plasma (afatinib, axitinib, bosutinib, crizotinib, dabrafenib, dasatinib, erlotinib, gefitinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, ponatinib, regorafenib, regorafenib M2, regorafenib M5, ruxolitinib, sorafenib, sunitinib, vandetanib). Drugs were arranged in four groups, according to their plasma concentration range: 0.1-200ng/ml, 1-200ng/ml, 4-800ng/ml and 25-5000ng/ml. Solid phase extraction was used and separation was performed with HPLC using a gradient system on a solid core particle C18 column (5×2.1mm, 1.6μm). Ions were detected with a triple quadrupole mass spectrometry system. This assay allows rapid determination of 19 TKI in less than 5min per run. This high throughput routine method will be useful to adjust doses of oral anticancer drugs in order to improve treatments efficacy.

Introduction La contamination des travailleurs exposes aux medicaments anticancereux (MAC) est un sujet d’importance en sante au travail. En complement de la surveillance biologique de l’exposition professionnelle (SBEP), la metrologie de surface est un outil essentiel pour comprendre les modalites de contamination des travailleurs, identifier les sources de contamination environnementale, verifier l’efficacite de la decontamination des surfaces et assurer un suivi longitudinal de ces surfaces. L’objectif de ce travail est de developper un outil complet comprenant un kit de prelevement surfacique des MAC et une methode de dosage associee. Trois criteres principaux ont determine les choix : un usage ubiquitaire, adapte pour des environnements professionnels divers (services de soins, veterinaires…) ; une methode analytique validee pour ce kit, capable de detecter des traces de MAC ; une facilite de mise en œuvre du kit de prelevement quelle que soit la personne en charge du prelevement. Materiel et methode L’identification des MAC les plus utilises a ete menee par une analyse de la litterature et des donnees de consommation en milieu hospitalier, veterinaire et de soins a domicile. Le type de dispositif adsorbant, de solution d’impregnation de surface, et de melange de solvants pour la desorption des MAC du dispositif ont ete etudies pour un rendement maximum du kit de prelevement. Le dosage des MAC est realise par une methode de chromatographie liquide a ultra haute performance couplee a un spectrometre de masse en tandem (UHPLC-MS/MS). Resultats Quinze MAC ubiquitaires (cyclophosphamide, ifosfamide, doxorubicine, daunorubicine, epirubicine, 5-FU, dacarbazine, etoposide, pemetrexed, vincristine, cytarabine, methotrexate, paclitaxel, gemcitabine, mitomycine C) ont ete selectionnes au vu de leur frequence d’utilisation et leur representativite globale des diverses activites. La methode optimisee est adaptee a la recherche de traces, avec des limites de quantification tres basses (0,25 a 50 pg/cm 2  de surface), equivalentes voire inferieures a celles publiees (pour 13/15 MAC). Le kit de prelevement est simple d’utilisation, accompagne d’un support didactique (papier et video en ligne). Il a montre son efficacite au moment des prelevements surfaciques par l’absence de variation inter-individuelle ( n  = 5/personne ; p  = 0,85) quel que soit le preleveur et sa profession ( n  = 6). Conclusion Cet outil (kit de prelevement + methode analytique) valide et facile d’utilisation est tres didactique dans le cadre de la maitrise du risque chimique lie aux MAC. En complement de la SBEP, il permet une prevention ciblee. Utilise en routine au sein de notre equipe, il est disponible pour toute intervention de sante au travail.

Le phthalimide (PI) et le tétrahydrophthalimide (THPI) sont des biomarqueurs urinaires spécifiques de l’exposition à certains fongicides agricoles tels que le folpel pour le PI (viticulture) et le captane pour le THPI (arboriculture). Afin de documenter les valeurs usuelles mesurées en population générale, une méthode de dosage du PI et du THPI urinaires a été développée et appliquée à titre exploratoire sur des urines d’un groupe d’enfants résidant en zone viticole, potentiellement exposés au folpel présent dans leur environnement. De structure chimique similaire, le PI et le THPI sont extraits simultanément à partir d’échantillons urinaires à l‘aide d’une méthode solide-liquide (cartouche HLB 60 mg Oasis®, Waters) et analysés par 2D-UHPLC-MS/MS (Shimadzu UFLCXR–Sciex QTRAP® 5500 system) à l’aide d’une colonne de chargement (XBridge C8, 2,1 × 30 mm ; 5 μm, Waters®) et d’une colonne analytique (HSS-T3 2,1 × 50 mm ; 1,8 μm, Acquity, Waters®) maintenues à 50 °C. La phase mobile se compose d’un mélange eau/méthanol, évoluant selon un gradient de concentration avec un débit fixé à 0,5 mL/min. Les transitions MRM (Multiple Reaction Monitoring) des composés et des étalons internes sont les suivantes : [m/z 146,1 > 41,9 (PI) ; m/z 150,1 > 42,0 (PI-d4) ; m/z 150,02 > 96,0 et m/z 150,02 > 42,1 (THPI) ; m/z 156,2 > 95,8 (THPI-d6)]. Après validation, la méthode a été appliquée sur 312 urines d’enfants vivant dans une zone viticole afin de doser le PI, biomarqueur urinaire d’exposition au folpel. Les concentrations urinaires en PI sont rapportées en μg/L et également en μg/g de créatinine pour tenir compte de la diurèse de chaque enfant. La méthode développée pour ce dosage permet d’obtenir des limites de détection (LDD) et de quantification (LDQ) respectivement de 0,1 μg/L et 0,25 μg/L pour le PI et de 0,01 μg/L et 0,025 μg/L pour le THPI. L’intervalle de linéarité s’étend de 0,25 à 4 μg/L pour le PI et de 0,025 à 4 μg/L pour le THPI. Sur les 312 urines analysées d’enfants potentiellement exposés au folpel de manière environnementale, 88 contenaient du PI (soit 28,2 % des enfants) avec une concentration médiane de 0,26 μg/L (0,12–5,28 μg/L ; min–max), soit 0,21 μg/g de créatinine (0,05–4,72 μg/g ; min–max). La méthode de dosage présentée apporte une amélioration des performances analytiques en termes de sensibilité par rapport aux données de la littérature (LDQ du PI de 3,75 μg/L et du THPI 1,90 μg/L [1]), et en termes de spécificité avec une méthode en mode MRM et des étalons internes deutérés. Elle permet des applications en biométrologie des expositions environnementales, notamment pour des populations faiblement exposées mais également d’envisager la réalisation de biométrologie des expositions professionnelles. C’est la première étude rapportant des données de concentrations urinaires en PI en population générale résidant en zone viticole.

L’augmentation de l’incidence des cancers depuis ces dernières années, et donc du nombre de médicaments anticancéreux administrés, soulève la question de l’exposition professionnelle à ces molécules, d’autant qu’elles font partie de la liste « des médicaments dangereux à la manipulation » du fait de leur(s) potentiel(s) effet(s) mutagène et/ou cancérogène et/ou toxique pour la reproduction [1]. Afin d’évaluer les niveaux d’exposition à ces molécules chez les professionnels de santé, des outils analytiques performants permettant une Surveillance Biologique de l’Exposition Professionnelle (SBEP) doivent être développés. Les anthracyclines sont des médicaments anticancéreux largement prescrits dans le traitement de divers cancers. L’objectif de ce travail a été la mise au point d’une méthode de haute sensibilité par UHPLC-MS/MS pour la recherche et la quantification de ces molécules dans les urines de professionnels de santé potentiellement exposés. Une méthode de dosage a été développée et validée par UHPLC-MS/MS (Shimadzu UFLCXR – Sciex QTRAP® 5500 system) à l’aide d’une colonne analytique de type Phényl-hexyl (2,1 × 100 mm ; 1,7 μm, Acquity®, Waters) maintenue à 50 °C. La phase mobile se compose d’un mélange d’eau (0,01 % d’acide formique + acétonitrile) évoluant selon un gradient de concentration avec un débit à 0,4 mL/min. Cette méthode permet le dosage simultané de la doxorubicine, de l’épirubicine et de la daunorubicine dans les urines après une extraction solide-liquide (cartouche HLB 60 mg Oasis®, Waters). Après validation, cette méthode a été appliquée dans le cadre d’une SBEP sur des urines de professionnels exposés à des anthracyclines lors de la préparation et/ou de l’administration et/ou en contact avec des patients traités. Chaque participant a fourni un échantillon urinaire en fin de journée de travail. Tout prélèvement supérieur à la Limite de Quantification (LDQ) a été considéré comme positif. La méthode validée pour les 3 molécules présente une bonne linéarité (10 à 500 pg/mL, r > 0,99) avec une LDQ de 10 pg/mL. Dix-sept urines provenant de 17 personnels de santé exposés aux anthracyclines ont été recueillies. Au total, 1 échantillon sur 17 (soit 5,9 % des sujets) est contaminé en doxorubicine ; la concentration urinaire mesurée est de 218 pg/mL. L’utilisation d’outils analytiques aussi performants en termes de sensibilité et de spécificité est indispensable en Santé au Travail dans le cadre de la SBEP aux médicaments anticancéreux. Avec une LDQ de 10 pg/mL, inférieure à celles des méthodes publiées (100 pg/mL pour la doxorubicine et l’épirubicine et 30 pg/mL pour la daunorubicine [2]), cet outil permet d’améliorer la surveillance de l’exposition professionnelle et la prévention en Santé au Travail.

Introduction Les syndromes de deficit en creatine regroupent trois maladies hereditaires affectant le metabolisme de la creatine : le deficit en guanidinoacetate methyltransferase (GAMT), le deficit en arginine : glycine amidinotransferase (AGAT) et le deficit en transporteur membranaire de la creatine (CRTR). Ces pathologies se traduisent par un deficit cerebral en creatine ayant pour consequence une atteinte neurologique peu specifique avec retard mental. Le dosage du guanidinoacetate et de la creatine au niveau urinaire et plasmatique par LC-MS/MS permet de poser le diagnostic, et d’orienter vers l’un des trois deficits. A ce jour, l’analyse de ces molecules polaires et basiques s’avere delicate. En effet pour l’etude de ces molecules peu retenues sur colonne standard, la methode de reference requiert une etape de derivatisation par butanol/HCl 6 M rendant la technique longue et contraignante. Pour s’affranchir de cette etape, il a ete choisi d’utiliser la technique d’appariement d’ions. Le principe consiste en l’ajout, au niveau des deux phases mobiles, d’un ion de charge opposee a la molecules d’interet, de telle sorte qu’ils puissent ensemble former un complexe non charge. Le contre ion, ici l’acide perfluoropentanoique, possedant une chaine hydrophobe, va interagir via celle-ci avec la phase stationnaire organique permettant ainsi une plus forte retention du complexe. Materiels et methode Une gamme d’etalonnage a ete choisie pour couvrir les valeurs biologiques et pathologiques. Les points de gamme, les controles de qualite interne et les urines des patients sont diluees au 1/20 dans une solution aqueuse d’etalon interne. Apres agitation et centrifugation, ils sont analyses directement par LC-MS/MS (Alliance, Quattromicro Waters). L’utilisation de la technique d’appariement d’ions permet d’eliminer une etape de derivatisation par esterification lente et delicate. Pour valider la methode, il a ete choisi de suivre les recommandations du COFRAC (portee B) tout en les adaptant aux criteres specifiques des dosages realises par technique chromatographique. Resultas Les CV intra-jours representant la repetabilite et les CV inter-jours representant la reproductibilite sont tous inferieurs a 15 % meme pour la LOQ prouvant ainsi la fidelite de notre methode. La justesse, evaluee par les echantillons externes de qualite, s’est averee bonne avec des biais Conclusion Dans le dosage du guanidinoacetate et de la creatine par LC MS/MS, l’utilisation de l’appariement d’ions que nous avons developpe permet une simplification technique de la methode ainsi qu’un un gain de temps et apparait donc comme une optimisation de la methode actuelle.

L’augmentation de l’incidence des cancers depuis ces dernières années, et donc du nombre de médicaments anticancéreux administrés, soulève la question de l’exposition professionnelle à ces molécules inscrites sur la liste « des médicaments dangereux à la manipulation » adressée par le NIOSH en 2004 du fait de leur(s) potentiel(s) effet(s) mutagène et/ou cancérogène et/ou toxique pour la reproduction [1]. Afin d’évaluer les niveaux d’exposition chez les professionnels de santé, des outils analytiques performants permettant une surveillance biologique de l’exposition professionnelle (SBEP) doivent être développés. Le 5-fluorouracile (5FU), médicament anticancéreux largement prescrit dans le traitement des cancers du sein, digestifs et ovariens, est métabolisé et éliminé dans les urines principalement sous la forme d’-fluoro-β-alanine (FBAL), biomarqueur spécifique de l’exposition au 5FU. L’objectif de ce travail a été la mise au point d’une méthode de haute sensibilité par CL–SM/SM pour la recherche et la quantification de FBAL dans les urines de professionnels de santé exposés au 5FU. Le FBAL et son étalon interne FBAL-d4 sont dérivatisés en milieu alcalin par du 2,4-dinitrofluorobenzène, extraits à l’aide d’une méthode solide–liquide (cartouche HLB Oasis®, Waters), puis analysés par CL–SM/SM (Shimadzu UFLCXR–Sciex QTRAP® 5500 system) à l’aide d’une colonne analytique de type HSS T3 (2,1 × 50 mm ; 1,8 μm, Acquity, Waters®) à 50° C. La phase mobile se compose d’un mélange tampon d’acétate d’ammonium (5 mM)–méthanol, évoluant selon un gradient de concentration avec un débit fixé à 0,6 mL/min. Après validation, cette méthode a été appliquée dans le cadre d’une SBEP sur des urines de professionnels en contact avec du 5FU et/ou avec des patients traités. Chaque participant a fourni 1 à 2 prélèvements (début de poste et en fin de journée de travail). Tout prélèvement supérieur à la limite de quantification (LQ) a été considéré comme positif. La méthode validée présente une bonne linéarité (20 à 1000 pg/mL, r > 0,994) avec une LQ de 20 pg/mL. Trente sept urines provenant de 25 personnels de santé exposés au 5FU ont été recueillies. Au total, 4 personnes sur 25 (soit 16 % des sujets) sont contaminées. Sur les 37 urines analysées, 4 sont positives avec des niveaux de concentrations faibles, compris entre 44 et 301 pg/mL (médiane à 87 pg/mL). L’utilisation d’outil analytique aussi performant en termes de sensibilité et de spécificité est indispensable dans le cadre de la SBEP aux médicaments anticancéreux. En effet, avec une LQ de 20 pg/mL, inférieure à celles des méthodes publiées (40 et 1000 pg/mL [2], [3]), cet outil permet d’améliorer la surveillance de l’exposition.

Highly sensitive ESI-LC-MS/MS methods were developed for urinary biological monitoring of occupational exposure to cyclophosphamide (CP), ifosfamide (IF), and methotrexate (MTX), which are hazardous antineoplastic drugs frequently handled by healthcare professionals. Extraction methods consisted of liquid/liquid extraction for simultaneous urinary CP and IF assays, and of solid phase extraction for the urinary MTX assay. A good linearity (r2>0.997), precision (CV<14.6%), and accuracy (bias<9.9%) were achieved for all compounds. The limit of detection (LOD) was 10pg/ml and the lower limit of quantification (LOQ) was 20pg/ml for all three drugs. Applying these methods in routine, more than 116 healthcare professionals occupationally exposed to antineoplastic drugs were monitored and 635 urines were analysed. Eleven healthcare professionals (9.5%) were found to be contaminated to at least one of the three antineoplastic drugs. Among analysed urines, 22 samples were found positives. The measured concentrations ranged from 20.1 to 1850pg/ml and, for six samples, concentrations were at CP trace level, between the LOD and LOQ values (10-20pg/ml). Such efficient analytical tools combining high specificity with high sensitivity are essential for reliable detection and routine biological monitoring of healthcare professionals occupationally exposed to these widely used antineoplastic drugs. These methods allow to monitor the healthcare professionals exposure to antineoplastic drugs in the aim to assess the effectiveness of collective and individual protective measures.

Les syndromes de Cushing sévères bénéficient d’un traitement par métopirone et/ou kétoconazole avec un blocage de la stéroïdogenèse imposant une surveillance de l’apparition d’une insuffisance surrénalienne. Toutefois, ce blocage est responsable de l’apparition de stéroïdes, normalement peu abondants, responsables de réactions croisées dans les immunodosages de cortisol (sérique ou urinaire). Nous rapportons l’exemple d’un corticosurrénalome traités par métopirone + kétoconazole (& mitotane). L’évolution de l’excrétion urinaire de cortisol libre a été favorable : 566 ± 252 à 80 ± 40 μg/j (LC-MSMS, N < 60 μg/j) en ≈ 1,5 m de traitement. Durant la même période, les cortisolémies à 8 h 00 par immunodosage étaient élevées alors que celles évaluées par spectrométrie de masse étaient plus basse d’en moyenne 25 % : 1235 ± 158 nmol/L (Automate immunodosage, Dxi, Beckman-Coulter) vs 952 ± 100 nmol/L (LC-MSMS, Qtrap 5500, Absciex). Cette différence n’était pas due à une simple différence de calibration des dosages. En effet, la comparaison des deux techniques chez des sujets sans bloqueur de la stéroïdogenèse montrait une droite de régression (Passing-Bablock) sans aucun biais : [LC-MSMS] = 0,999*[DXI] + 11 à l’inverse de celle obtenue avec les dosages chez la patiente : [LC-MSMS] = 0,675*[DXI] + 126. Les cortisolémies totales restent cependant élevées en LC-MSMS sans doute en raison de l’augmentation de la CBG circulante due au mitotane ; la cortisolurie n’est pas affectée. Ces résultats sont nettement en faveur du suivi par spectrométrie de masse du cortisol lors de l’initiation d’un traitement par inhibiteurs de la stéroïdogenèse surrénalienne. Des valeurs spécifiques de cortisolémies ou des dosages de cortisolurie seraient souhaitables pour les patients sous mitotane. Sans mitotane, les valeurs normales pourraient être utilisées.