目的 对 2021 年能力验证计划肽酶-3 样本的均匀性和稳定性进行研究.方法 根据 CNAS-CL04 和 GB/T 14927.1-2008,对肽酶-3 样本进行均匀性和稳定性检验.考察 4 个温度(37℃,室温,4℃和-20℃)条件下和运输条件下的样本稳定性.结果 肽酶-3 样本,均匀性检验合格.在 37℃条件下可以稳定 6 h;在室温条件下可以稳定 7 d;在 4℃条件下,可以稳定 4 周;-20℃条件下,可以稳定 2 个月;在运输条件下,可以稳定 7 d.结论 肽酶-3 样本的均匀性和稳定性检验结果满足开展能力验证计划的要求.

Objective To analyze the status of proficiency testing samples in the field of laboratory animal testing, and to evaluate the role of the testing samples in the laboratory animal laboratory proficiency testing program.MethodsA retrospective study was conducted to compare the 30 proficiency testing plans and reports in the field of laboratory animal organized by National Institute for Food and Drug Control (NIFDC) from 2013 to 2022. The type, quantity, preparation method, homogeneity and stability of the proficiency testing samples, as well as the satisfaction of the participating units to the samples were analyzed. Then, the supply of new samples, the addition of quantitative projects, the improvement of stability research and the attention to customer needs were discussed.ResultsThe 30 proficiency testing programs included 10 items in the direction of bacteria, 10 items in the direction of virus and 10 items in the direction of genetics in the field of experimental animals. A total of 80 non-nucleic acid samples (including serums, feces, tracheal flushing fluid and proteins) and 4 nucleic acid samples were provided, all of which were qualitative samples. Compared with nucleic acid samples, non-nucleic acid samples always required large numbers of animals for sample preparation. The pass rate of homogeneity verification of the sample was 100%, but there is no quantitative study at present. Stability verification can be conducted for the short-term storage, transportation, freeze-thaw, different concentrations and terminal stability of different samples, but it lacks long-term stability verification.ConclusionIn the past ten years, the proficiency testing samples have basically met the basic requirements of the proficiency testing plan of laboratory animal testing area. However, the provision of nucleic acid samples should be reasonably increased; quantitative research samples and projects should be added; the influence of proficiency testing in the field of laboratory animal testing should be continuously expanded and maintain high-quality services.

目的 通过组织实施能力验证计划,帮助实验动物质量控制实验室发现问题,提高实验室质量控制水平.方法 依据CNAS-CL03能力验证提供者认可准则组织实施能力验证计划,样品通过均匀性和稳定性检验.参加单位在规定时限内提交检测结果和相关原始记录,将实验室结果与标准结果进行对比分析.结果 共有9家实验室参加本次能力验证计划,其中7家实验室提交了满意结果,本次能力验证计划的满意率为77.78％.结论 实验动物质量控制实验室在酯酶-1和转铁蛋白的整体检测水平较高,少数实验室存在提升空间.

目的 分析温度-时间、浓度、冻融、运输条件和不同品系来源对苹果酸酶-1(malic enzyme-1,ME-1)和异柠檬酸脱氢酶-1(isocitrate dehydorgenase-1,IDH-1)标准样品的影响.方法 制备C57BL/6、BALB/c和CBA三种近交系小鼠来源的标准样品,经均匀性测定后,随机抽样按照GB/T 14927.1—2008中的检测方法进行测试.温度-时间因素以4℃、室温(RT)和37℃这3个温度为观测纵坐标,1、2、3、7、14和21 d为观测纵坐标.在每个坐标交点,每品系分别随机抽取两管.浓度因素按照每品系一管进行原倍、1/2、1/4和1/8倍进行梯度测试.冻融因素,每品系3管,-20℃冻存2 h至室温融化3次为条件测试.所有实验均为相同的运输条件、干冰冷链及北京往返沈阳、西安、成都三地测试.结果 不同品系来源标准样品在温度-时间、浓度、冻融和运输条件下无显著差异.各标准样品21 d内在4℃及室温(RT)条件下,均能稳定存在,但37℃仅能稳定存在2 d.原倍稀释至1/8浓度、3次冻融和干冰运输三地往返后,样品检测结果显示稳定.结论 制备的ME-1和IDH-1标准样品具备均一性、稳定性和可比性,满足能力验证计划需求.

目的 应用微卫星技术在2013年和2020年对同一个KM小鼠种子群体进行遗传质量检测和分析.方法 2013年和2020年分别提取30只KM小鼠DNA,应用30个微卫星标记进行PCR扩增,基因测序后计算等位基因数、杂合度和多态信息含量等参数.结果 2013年该群体有95个等位基因,平均杂合度为0.4864,平均多态信息含量(PIC)为0.4418.2020年该群体有122个等位基因,平均杂合度分别为0.5150,平均多态信息含量(PIC)分别为0.4818.结论 KM小鼠种子群体具有良好的遗传稳定性和多样性,符合封闭群动物的群体遗传概貌特征.

目的 通过SD和Wistar大鼠群体遗传多样性分析,为其质量控制提供基础数据.方法 采用微卫星DNA标记技术,选取分布于21条染色体上的24个微卫星位点分别对12对SD大鼠和Wistar大鼠的DNA样本进行PCR扩增,所得扩增产物经二代测序分型,再利用PopGen32软件、Littleprogram0.6和GenePop分别进行等位基因、平均杂合度、多态信息含量及遗传平衡检验参数的计算.结果 SD和Wistar大鼠群体分别在24个微卫星位点检测到平均等位基因数3、2.95个,平均杂合度为0.4344、0.4261,平均多态信息含量分别为0.38、0.37,分别有10、9个位点偏离了Hardy-Weinberg遗传平衡,其中7、4个位点表现为杂合子缺失.结论 SD和Wistar大鼠封闭群遗传多样性略低于理想封闭群水平,需要在种群繁育中注重科学管理监测,避免近交.

目的 通过实验动物小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)检出能力验证,了解实验动物检测机构的检验能力,提高实验动物质量检测水平.方法 按照中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity,CNAS)批准的能力验证方案,低温冷冻干燥制备样品;稳定性和均匀性检验合格后,通过CNAS平台随机分组编号,发放给参加单位,并附作业指导书.要求在规定时限提交检验报告和原始记录,其结果与样品设置一致的判为满意结果,不一致或未按时提交的判为不满意结果.结果 共有24个实验室参加本项能力验证;其中获得满意结果的实验室为22个,占总参加机构的91.7％;得到不满意结果的实验室有2个,占8.3％.结论 实验动物质量检测机构对小肠结肠炎耶尔森菌的检测能力较高.

Objective To analyze the genetic quality of an outbred stock of Wistar rats in different periods by T/CALAS 21—2017 method, and to evaluate the applicability of the association standard. Methods Wistar rats selected from the same outbred stock in 2015 and 2019 were named as group A and group B, respectively. Twenty-five pairs of microsatellite primers were used to get genetic parameters for quality analysis of the outbred stock Wistar rats according to the association standard T/CALAS 21—2017. Polymorphism information content (PIC) was used to analyze the polymorphism of the loci. Results One hundred alleles in group A and 69 alleles in group B were obtained. The average heterozygosity of the two groups was 0.574 and 0.447, while the average PIC was 0.541 and 0.393, respectively. Conclusion The association standard T/CALAS 21—2017 has good applicability in the genetic quality analysis of outbred stock rats, and the genetic diversity of group A is better than that of group B.

目的测定R26-hSCARB2小鼠的血液生理生化指标,分析性别和周龄对上述指标的影响。方法分别取20只4周龄和8周龄的R26-hSCARB2小鼠,雌雄各半。取静脉血后,测定22项血液生理指标和12项血液生化指标,使用统计学方法分析各指标在性别和周龄间的差异。结果检测的22项生理指标和12项生化指标中,4周龄的R26-hSCARB2小鼠雌雄之间在淋巴细胞绝对值（LYM）、中性粒细胞百分率（NEUT%）及尿素（BUN）指标上具有显著差异（P ＜0.05）,白细胞计数（WBC）、总胆固醇（CHO）及甘油三酯（TG）指标上具有极显著差异（P ＜0.01）。8周龄的R26-hSCARB2小鼠雌雄之间在WBC、LYM、单核细胞百分率（MON%）、嗜碱性粒细胞百分率（BAS%）、总蛋白（TP）、磷（P）及CHO指标上具有极显著差异（P ＜0.01）;在血小板计数（PLT）、血小板分布宽度（PDW）、中性粒细胞绝对值（NEUT）、嗜酸性粒细胞百分率（EOS%）、白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（ALP）、葡萄糖（GLU）及TG指标上,具有显著差异（P ＜0.05）。不同周龄的R26-hSCARB2小鼠在WBC、红细胞分布宽度（RDW）、PLT、LYM、单核细胞绝对值（MON）、淋巴细胞百分率（LYM%）、MON%、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、TP、ALB、ALP、BUN、肌酐（CREA）、葡萄糖（GLU）、钙（Ca）、P、CHO及TG指标上具有极显著差异（P ＜0.01）,在血小板压积（PCT）、平均血小板体积（MPV）、NEUT及NEUT%指标上具有显著差异（P ＜0.05）。结论性别和周龄都会影响R26-hSCARB2小鼠的血液生理生化指标,但周龄对该小鼠的血液生理生化指标的影响更显著。本实验为R26-hSCARB2小鼠的研究应用提供了基础的数据。

目的 测定自培育hACE2-KI/NIFDC转基因小鼠的生物学特性指标.方法 分别测定4周龄和8周龄各10只雌性hACE2-KI/NIFDC小鼠的11项脏器系数、22项血液生理指标和13项血液生化指标,利用统计学方法分析组间差异.结果 4周龄组的5项脏器系数(脾、肺、胸腺、左肾、右肾,P<0.01)和3项血液生理指标(MCV、MCH、EOS,P<0.05)高于8周龄组,5项指标(MON％、ALP,P<0.05;心脏脏器系数、AST、P,P<0.01)低于8周龄组.结论 hACE2-KI/NIFDC小鼠生物学特性指标的测定为其应用研究提供了基础数据.

目的 对不同性别的4周龄、8周龄C57BL/6-Kdrem1 (hKDR)/NIFDC(以下简称hVEGFR2-KI)小鼠的血液参数进行测定,分析性别以及年龄对于该品系小鼠血液参数的影响.方法分别取20只4周龄、8周龄小鼠雌雄各半,采静脉血.用日本光电Mek7222血细胞分析仪测定hVEGFR2-KI小鼠的生理指标,奥林巴斯AU400全自动生化分析仪测定生化指标.结果在所测得的生理生化指标中,4周龄的hVEGFR2-KI小鼠雌雄之间于血红蛋白浓度(HGB)、总蛋白(TP)、总胆固醇(CHO)3项指标有显著差异(P＜0.05),在红细胞计数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)4项指标上有极显著差异(P＜0.01).8周龄的hVEGFR2-KI小鼠雌雄之间共有11项生理生化指标有极显著差异(P＜0.01),分别是RBC、HCT、HGB、血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)、中性粒细胞绝对值(NEUT)、单核细胞百分率(MON％)7项血液生理指标和CHO、碱性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)4项血液生化指标;有5项具有显著差异(P＜0.05)的指标,包括淋巴细胞百分率(LYM％)、中性粒细胞百分率(NEUT％)、TP、尿素(BUN)和磷(P).不同周龄hVEGFR2-KI小鼠之间的差异分布更广,其中具有极显著差异(P＜0.01)的有RBC、HCT、MCH、HGB、白细胞计数(WBC)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、淋巴细胞绝对值(LYM)、单核细胞百分率(MON％)、TP、CHO、白蛋白(ALB)、ALP、肌酐(CREA)、GLU、P共18项指标;具有显著差异的为PLT、LYM％、NEUT％、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、TG共5项指标.结论本次研究测定了不同性别的4周龄、8周龄的hVEGFR2-KI小鼠的生理生化指标,为hVEGFR2-KI小鼠的应用以及正常血液参数标准提供一定参考.

目的 应用微卫星DNA标记检测法评价虎皮猫群体的遗传结构.方法 应用37个微卫星位点对25只虎皮猫的DNA样本进行PCR扩增,利用软件POPGEN1.32,对扩增产物的测序结果进行统计分析,获得虎皮猫群体的遗传结构参数.结果该虎皮猫群体的平均观测等位基因数是4.702 7,平均有效等位基因数是2.690 7,平均有效杂合度是0.602 1,平均多态性信息含量是0.552 0.结论微卫星DNA标记检测法能够应用于虎皮猫群体的遗传质量检测,该虎皮猫群体的遗传结构符合封闭群实验动物的结构特征.

目的:为检验检测实验室环境设施变更时提供参考依据.方法:依据世界卫生组织《药品质量控制实验室质量管理规范》中关于药品质量控制实验室变更控制的相关要求和《检测和校准实验室能力认可准则》CNAS-CL01:2018中对于环境设施的管理规定,分析检验检测实验室在搬迁过程中如何有效管理实验室环境设施.结果:针对检验检测机构搬迁过程中存在的问题,提出了可行性建议,建立沟通联系机制,建立控制文件,做好日常管理,对于保障质量体系的正常运转起到了积极推动作用.结论:实验室是检验检测机构科研工作的重要场所,也是检测报告符合实验室质量管理体系的重要前提.如何实现实验室环境和设施的管理和维护,实验室基础设施改造的有效管理,资源的合理利用,环境设施监控和和记录的动态管理已经成为实验室能否有效培养人才,加强学科建设和对外服务的关键问题.

目的 对能力验证计划中的血清样本进行稳定性检验.方法 依据CNAS-CL04,对样本进行保藏稳定性检验,加速稳定性检验,运输稳定性检验以及最终稳定性验证.结果 该样本在-20℃和4℃条件下可以稳定保存50 d;该样本在37℃和室温(19.5℃～21.5℃)条件下可以稳定保存27 d;在运输条件下,样本可以稳定保存;样本通过最终稳定性验证.结论 该样本能够满足能力验证计划的要求,酯酶-1血清样本是开展能力验证计划的理想样本.

目的 通过实验小鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)抗体检测能力验证实施计划,了解我国实验动物检测机构的检验能力,促进实验动物质量检测水平的提高.方法 按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性等检验合格,作为能力验证样本.对血清样本采用随机编号形式发放给能力验证参加单位,并附作业指导书.本次能力验证为定性检测,检测方法采用ELISA方法.要求参加单位在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,满意结果为样品的检测结果与预检结果一致,不满意结果为样品检测结果与预检结果不一致或参加单位未反馈结果.结果 样本血清均匀性试验和稳定性试验结果显示,样本均符合能力验证样本均匀性和稳定性要求.本次能力验证共有19个省市的33个实验动物检测机构报名参加.33个检测机构均提交了满意结果,满意度为100％.结论 实施此次能力验证计划能够反映我国实验动物检测实验室的检测能力和水平,我国实验动物质量检测机构对实验小鼠细小病毒(MMV)抗体检测的能力较高.

目的 测定自主建立的转基因小鼠hTIM4-EGFP的血液生理生化指标.方法 分别测定12周龄各8只雌性和10只雄性的同窝阴性小鼠与转基因hTIM4-EGFP小鼠的22项血液生理指标和12项血液生化指标,利用统计学方法分析组间差异.结果 转基因组与野生组在10项生理指标(WBC、RBC、HGB、HCT、MCH、RDW、PLT、NEUT、LYM％、NEUT％)和4项生化指标(ALT、AST、TG、P)间存在差异;转基因组在MCV、MCH、MCHC、RDW、PLT、NEUT、NEUT％、ALP、CHO指标中存在雌雄差异.对照组在RBC、HCT、MCV、LYM、NEUT、LYM％、NEUT％、AST、ALT、P指标中存在雌雄差异.结论 人源化Tim4基因敲入的C57BL/6小鼠的部分血液生理生化指标与野生型存在差异,该测定为hTIM4-EGFP小鼠的研究应用提供了基础数据.

目的 应用微卫星标记比较两个实验小鼠群体的遗传结构组成.方法 应用36个微卫星标记分析两个实验小鼠群体的遗传结构组成.从两个群体中各提取38份基因组DNA,进行PCR扩增和基因测序,应用统计分析软件PopGen1.32和Littleprogram0.6计算两个群体的遗传结构参数.结果 A群的平均等位基因数为2.4839,平均杂合度为0.3376,平均多态性信息含量为0.2875.B群的平均等位基因数为3.4839,平均杂合度为0.4806,平均多态性信息含量为0.4088.结论 两个实验小鼠群体的遗传结构组成存在差异,长期封闭繁育导致群体遗传结构发生改变.建议对封闭群实验动物种群进行定期的遗传结构监测,确保实验动物的遗传质量.

实验动物的遗传质量直接影响生物医药研究结果的可信性,遗传质量控制手段的多样性直接决定实验动物的遗传质量水平.本标准制定的目的是为实验小鼠和实验大鼠的遗传质量控制提供DNA检测方法,弥补现行方法的局限性,填补我国在该领域的空白,推动我国实验动物遗传质量检测水平的提高.

目的 通过分析肽酶-3样本的稳定性,了解该样本的贮存条件和运输条件,进而采取适当措施保障能力验证样品的品质时刻符合实施能力验证活动的要求.方法 按照国家标准GB/T 14927.1-2008进行样本的制备,设定-20℃,4℃,室温和37℃为4个温度检验点,设定1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、14 d和28 d为9个时间检验点,进行稳定性检验.结果 肽酶-3样本在37℃仅能稳定保存1d,在4℃、室温和-20℃均可以稳定保存至28 d.结论 在该项目实施过程中,有必要严格控制肽酶-3样本的保存条件和运输条件.

目的 制备a、b两个型别的过氧化氢酶-2能力验证样品,并对其均匀性和稳定性进行测定评价.方法 均匀性测定均按照4％比例随机抽样,冻融稳定性以4次冻融为测定终点;时间-温度稳定性以4、20、37℃这3个温度为观测纵坐标,1、2、3、7、15、30 d为观测横坐标,在每个坐标交点,a型、b型分别随机抽取2瓶,测定不同条件下各型别样品的稳定性.结果 a型、b型样品在均匀性测定中,均表现为各型别的清晰条带;4次冻融后仍能稳定存在,且30 d内在4、20℃和37℃三种条件下均能稳定存在.结论 过氧化氢酶-2样品均匀性和稳定性良好,适于能力验证样品的制备发放需求.