为研究血根碱对中华鳖(Trionyx sinensis)肠道菌群多样性及丰度的影响,选取480只初始体重为(31.75±7.20)g的中华鳖,设置添加0的对照组(RS1)和添加50 (RS2)、100 (RS3)和150 mg/kg(RS4)的3个实验组.实验结束后,提取中华鳖中肠组织的总DNA,进行16S rRNA V3-4区基因组测序.结果 显示,实验组的总操作分类单元(Operational taxonomic units,OTUs)数量显著高于对照组,肠道菌群复杂度及丰富度较对照组有明显增加.肠道菌群结构组成分析发现,RS1与RS2结构较为接近,而RS1与RS3、RS4较远.在门分类水平上,变形菌门(Proteobacteria)和衣原体门(Chlamydiae)是优势菌群;在属分类水平上,螺杆菌属(Helicobacter)占绝对优势.通过比较发现,实验组中螺杆菌属丰度较对照组显著下降,而不动杆菌属(Acinetobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus)和双歧杆菌属(Bifidobacterium)丰度均有明显上升.研究表明,在饲料中添加适量的血根碱(100～150 mg/kg)能有效提高中华鳖肠道菌群多样性及丰富度,并能改善肠道菌群结构.

本研究采用MISA软件分析泥东风螺(Babylonia lutosa)转录组中微卫星信息.结果 显示,从转录组中共获得16324个SSR,共有181种重复基元;泥东风螺转录组中不同类型微卫星的重复基元具有不同的分布特征,其中,二核苷酸重复基元中AC/GT(70.58％)重复基元以重复6次出现频率占优;长度为12～20 bp的SSR占63.95％,长度为21～25 bp的SSR占9.14％,总体的平均长度为18.4 bp.随机选取其中50条序列设计引物,通过对福建野生泥东风螺群体(WP)DNA样本进行PCR扩增和分型,结果获得23个多态性位点,等位基因数目为2～7个不等,期望杂合度(Ne)为0.190～0.937,观察杂合度(N0)为0.065～0.936,多态性信息含量(PIC)为0.061～0.777,有4个位点显著偏离哈迪温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE) (P＜0.05).对野生群体和养殖群体(BP)遗传多样性分析显示,野生群体和养殖群体的平均Ne分别为0.491和0.544,平均No分别为0.477和0.564,平均PIC分别为0.541和0.407.Fis结果显示,野生群体和养殖群体分别有13个和9个位点杂合子过剩.群体间遗传分化指数(Fst)为0.001～0.655,平均值为0.053 (0.05＜Fst＜0.15),属于中等程度分化.群体间的基因流值(Mm)为0.132～543.787,平均为4.450.两群体间的遗传距离为0.892,表明群体间的遗传分化小.本研究结果表明,泥东风螺野生群体和养殖群体均具有较高的遗传多样性,具有很大的选育潜力,开发的泥东风螺SSR标记对泥东风螺的群体遗传结构、图谱构建、增殖放流效果评估和分子辅助育种等研究方面具有重要意义.

The mitochondrial genome of one potamidae species Neilupotamon papileonaceum was sequenced and annotated. The mitogenome is 16,273 bp in length, containing 37 typical genes. The A + T content of the whole mitogenome is 68.9%. Most of the PCGs started with ATG and stopped with TAT, except for ATP8 and ND6 stopped with TGA, COX1, COX2, ND5, ND4, and ND4L used incomplete T as stop codon. The phylogeny tree is monophyletic among 15 related species. The relationships of N. papileonaceum, Sinopotamon yaanense, and Longpotamon yangtsekiense were closer than others. This study further enriched mitogenome database of the tribe Typhlocybini.

由于中华鳖集约化养殖的不断发展,导致其养殖环境不断恶化、疾病频发,严重制约了中华鳖养殖产业的可持续发展.为了揭示中华鳖抗病分子机制,本研究利用Illumina HiSeqTM 2500高通量测序平台对感染嗜水气单胞菌的中华鳖脾脏组织进行转录组de novo测序,共获得48 884条Unigenes.将Unigene与COG、GO、KEGG、KOG、Pfam、Swissprot、eggNOG和NR数据库进行比对,共获得17 202条注释信息.生物信息学分析结果显示共有2 300条Unigenes表达差异显著,其中上调899条、下调1 401条.对差异基因进行KEGG通路富集分析,结果显示显著富集的前20个通路中有3条免疫相关通路(Intestinal immune network for IgA production pathway, Hematopoietic cell lineage pathway和Fc gamma R-mediated phagocytosis pathway).根据KEGG和GO注释信息,共筛选得到36个差异表达的免疫相关基因,按功能将其分为8类:Antigen processing and presentation、Innate immune molecules、T/B cell activation and proliferation、Toll-like receptor signaling pathway、Cell adhesion、immunity signaling molecule、Complement activation和Chemokines and chemokine receptors.最后,从免疫相关基因中随机挑选18个基因进行qRT-PCR验证,结果显示变化趋势与转录组测序分析结果基本一致,说明转录组数据结果真实可靠.

为研究GHITM基因在中华鳖(Trionyx sinensis)胚胎发育及生长中的作用,本研究通过RT-PCR和RACE方法获得了中华鳖GHITM全长cDNA序列;采用实时荧光定量PCR对GHITMmRNA组织表达及不同温度孵化胚胎发育过程中的表达特性进行分析.结果 显示,中华鳖GHITM cDNA序列长度为2650 bp,开放阅读框为1050 bp,5'非编码区为123bp,3'非编码区为1477bp,编码349个氨基酸,编码蛋白的等电点为10.01,分子量为37.12 kDa.GHITM编码氨基酸序列由胞外区、跨膜区和胞内区组成,7个跨膜域组成跨膜区.GHITM编码氨基酸序列的同源性分析显示,中华鳖与锦龟(Chrysemys picta bellii)和绿海龟(Chelonia mydas)同属一个分支,3种鳄鱼构成一个分支,7种鸟类形成一个分支.实时荧光定量检测显示,GHITM基因在肝脏、肌肉和脑垂体中的表达水平较高,显著高于心脏、性腺、肠、肾脏和脾脏组织(P＜0.05);50 g左右和500 g左右雄性个体肝脏中的GHITM基因表达量显著高于雌性个体(P＜0.05);低温胁迫孵化能显著抑制胚胎肝脏中GHITM基因的表达(P＜0.05).上述研究结果表明,GHITM基因与中华鳖生长和胚胎发育密切相关,其在中华鳖胚胎中的表达受孵化温度调节.本研究为探讨中华鳖胚胎发育和生长提供理论依据.

将480只中华鳖分为4组,每组3个重复,分别投喂对照(对照)或分别添加含50、100、150 mg/kg的血根碱制剂的试验饲料,试验期75 d,研究血根碱对中华鳖生长、体成分和血清指标的影响.结果表明:饲料中血根碱添加量为50、100 mg/kg的中华鳖的成活率显著高于添加量为150 mg/kg和对照的;添加量为50、100 mg/kg的中华鳖的饲料系数显著低于对照的;添加量为50 mg/kg的中华鳖的肌肉中鲜味氨基酸总量比对照的提高1.7 mg/g,但差异无统计学意义;随着饲料中血根碱的添加量增加,中华鳖体组成中粗蛋白的占比呈先增加后降低的趋势,添加量为50 mg/kg的中华鳖体组成中粗蛋白的占比显著高于添加量为150 mg/kg和对照的;随着饲料中血根碱的添加量增加,中华鳖血清中的葡萄糖含量呈先降低后升高的趋势,添加量为50、100 mg/kg的中华鳖血清中葡萄糖含量显著低于添加量为150 mg/kg和对照的;添加量为50 mg/kg的中华鳖血清中碱性磷酸酶活性显著高于对照的,谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于其他处理;添加量为50、100 mg/kg的中华鳖血清中谷草转氨酶活性显著低于对照的.可见,在本试验条件下,基础饲料中添加50～100 mg/kg血根碱较为适宜.

Genetic diversity is an important component of biodiversity and investigating and protecting the wild genetic diversity of species has always been an important research topic in conservation biology. Due to habitat destruction and over catching, wild Chinese soft-shell turtles (Pelodiscus spp.) have been severely damaged, resulting in the species being listed on the IUCN Red List of Threatened Species in 2000. However, only few studies with contradictory results on the genetic diversity of Pelodiscus turtles have been reported. To investigate the genetic diversity and population structure of Pelodiscus turtles, 123 specimens were collected from five localities in East Asia, and their genetic variation was analyzed on the basis of a 922-bp partial sequence of the mitochondrial cytb gene. Forty-nine polymorphic sites were detected, revealing 56 haplotypes. A pattern of high haplotype diversity (Hd = 0.994) and nucleotide diversity (pi = 0.01655) was found in the examined range. A maximum likelihood phylogenetic tree and median-joining network analyses indicated that the Pelodiscus turtles divided in four populations throughout East Asia, and the Pelodiscus turtles probably originate from the Yangtze River and was introduced to Yellow River, Taiwan, and Japan through Xijiang River. These results served a helpful resource for conservation of Pelodiscus turtles.

哺乳类到爬行动物的性别决定机制已有很多实验研究,并取得了长足的进展与一定成果.但许多动物的性别决定机制还尚不明确.关于龟鳖类的性别决定机制尚未清楚,看法不一.本文通过综述环境因素对龟鳖类性别决定和性别分化影响的最新资料及其分子机制的研究进展,以期为了解龟鳖类性别决定机制、调控性别、生产高效益的龟鳖提供参考.