目的 探究miR-206-3p在缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤中的作用及机制.方法 体外培养H9c2细胞,建立H/R损伤心肌细胞模型,将细胞分为对照组(Control),H/R模型组,H/R+miRNA 阴性对照组(H/R+miR-NC),H/R+miR-206-3p模拟物组(H/R+miR-206-3p mimics),H/R+miR-206-3p模拟物组+pcDNA 阴性对照组(H/R+miR-206-3p mimics+pcDNA3.1)和H/R+miR-206-3p模拟物组+PDCD4过表达组(H/R+miR-206-3p mimics+pcDNA3.1-PDCD4),实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-206-3p和PDCD4的相对表达水平,Western blot检测各组细胞中PDCD4蛋白表达,Targetscan和双荧光素酶实验分析PDCD4与miR-206-3p的靶向关系,MTT法检测各组细胞活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡.结果 与对照组相比,H/R组miR-206-3p表达降低,PDCD4表达升高(P＜0.05);与miR-NC组相比,miR-206-3p模拟物组中miR-206-3p表达升高,PDCD4表达降低(P＜0.05).Targetscan网站分析及双荧光素酶实验证实PDCD4为miR-206-3p的靶基因.相比miR-NC组,miR-206-3p模拟物组细胞活力升高,凋亡率下降;相比miR-206-3p mimics+pcDNA3.1组,PDCD4过表达组细胞活力下降,凋亡率升高.结论 过表达miR-206-3p可以靶向负调控PDCD4在缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用.
目的 探讨miR-99a-5p靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响.方法 CCK-8法检测miR-99a-5p对DU-145细胞增殖的影响;miR-99a-5p mimics转染前列腺癌DU-145细胞,通过实时定量PCR检测miR-99a-5p和mTOR mRNA表达,Western blot检测miR-99a-5p过表达后DU-145细胞mTOR蛋白的表达;通过生物信息学网站预测mTOR是否为miR-99a-5p潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证,CCK-8和肿瘤异种移植裸鼠模型验证miR-99a-5p通过靶向mTOR对前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长的影响.结果 转染miR-99a-5p mimics抑制DU-145细胞体外增殖活性,降低mTOR mRNA和蛋白的表达,miR-99a-5p结合mTOR mRNA3'UTR区域,且miR-99a-5p通过靶向mTOR抑制前列腺癌细胞增殖及肿瘤生长.结论 miR-99a-5p通过靶向调控mTOR抑制前列腺癌细胞的增殖及肿瘤生长.
目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制.方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平.体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组(转染miR-27a inhibitor)与阴性对照组(转染miR-27a inhibitor NC),采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达.结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞(P＜0.01).转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功.抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显著升高,FOXO1、TIMP-2、泛素连接酶FBW7的表达明显升高(P＜0.01).结论 下调miR-27a能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并诱导凋亡.
目的 探究远隔缺血后适应介导线粒体膜电位调控脑缺血/再灌注损伤大鼠炎性损伤的作用机制.方法 30只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及远隔缺血后适应组,每组10只,建立脑缺血/再灌注损伤大鼠模型,即刻进行3个循环远隔缺血后适应.采用Longa评分法评价各组大鼠神经功能障碍评分;HE染色观察各组大鼠脑组织病理学形态变化;TUNEL检测神经细胞凋亡指数;JC-1法测定线粒体膜电位;ELISA试剂盒测定大鼠缺血区脑组织IL-1 β、IL-18表达;Western blot检测缺血区脑组织中NLRP3、Caspase-1、ASC及GSDMD蛋白表达.结果 远隔缺血后适应干预后大鼠神经功能障碍评分明显降低,缺血侧脑组织损伤明显减轻,细胞凋亡指数明显降低,线粒体膜电位水平明显升高,缺血区脑组织IL-1β、IL-18水平、NLRP3、Caspase-1、ASC及GSDMD蛋白水平明显降低.结论 远隔缺血后适应改善大鼠脑缺血/再灌注炎性损伤可能与调控线粒体膜电位有关.
目的 探讨脐血间充质干细胞对同基因和异基因来源的T淋巴细胞亚群数量的影响.方法 取新生儿脐血,体外培养间充质干细胞和T淋巴细胞,间充质干细胞和同基因及异基因T淋巴细胞共培养,流式细胞仪分析其亚群细胞的数量变化.结果 与间充质干细胞共培养的T淋巴细胞中CD3+CD4+T淋巴细胞、CD3+CD8+T淋巴细胞及CD4+CD25+调节性T细胞的数量均增多,且异基因来源的CD3+CD4+T淋巴细胞的数量与同基因来源的CD3+CD4+T淋巴细胞的数量相比,数量增多更显著(P＜0.05).结论 脐血间充质干细胞可以促进同基因和异基因T淋巴细胞的增殖,为间充质干细胞应用于临床疾病的治疗提供了数据支持.
目的 探讨AIFM2对肝癌细胞索拉菲尼耐药的影响及对铁死亡的调控.方法 采用实时定量PCR检测30例肝细胞癌组织与相应癌旁组织和肝癌细胞系及正常肝细胞系中AIFM2 mRNA的表达水平;采用浓度梯度法培养索拉非尼耐药肝癌细胞,sh-AIFM2转染肝细胞癌细胞以抑制AIFM2表达,sh-Ctrl作为对照,实时定量PCR检测转染效率,Western blot法检测转染后AIFM2蛋白的表达;CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞的增殖能力;DCFH-DA染色法检测ROS表达,脂质过氧化试剂盒检测MDA的表达,微量还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测MDA表达,流式细胞术检测铁离子的表达.结果 AIFM2在肝细胞癌组织中相对癌旁高表达,AIFM2在肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞系;AIFM2基因敲低促进肝癌耐药细胞活性的下降,并促进肝癌耐药细胞发生铁死亡,其中ROS、MDA表达增加,GSH表达降低,而铁离子表达并没有发生明显改变.结论 AIFM2抑制铁死亡介导肝癌细胞索拉非尼耐药,联合应用AIFM2抑制剂和索拉非尼可能是治疗肝细胞癌耐药的有效途径.
目的 设计并构建靶向转移性大肠癌的核酸适配体分子信标(MAB),分析其生物活性并进行特异性成像研究,为转移性大肠癌的靶向成像提供新的方法.方法 根据分子信标的设计原则在转移性大肠癌特异性核酸适配体的基础上构建MAB,采用流式细胞术对MAB的特异性和亲和性进行分析,并对不同温度下(4℃、25℃和37℃)MAB与靶细胞的结合情况进行检测;采用激光共聚焦显微镜对MAB与靶细胞靶向成像进行观察.结果 构建的MAB与转移性大肠癌细胞的结合具有高亲和性和高特异性,解离常数为(22.70±2.46)nM,且不受温度的影响,激光共聚焦显微镜观察结果表明MAB不需洗涤过程便可一步法实现转移性大肠癌细胞的靶向成像.结论 成功构建出基于转移性大肠癌特异性核酸适配体的MAB,建立了一种快速、便捷的转移性大肠癌的靶向成像方法.
目的 构建Annexin A2原核表达载体并纯化其重组蛋白,用于进一步研究Annexin A2的生物学功能及其互作蛋白分析.方法 经基因重组技术构建Annexin A2原核表达载体,经测序鉴定、转化至E.coliBL21菌株后,诱导表达Annexin A2重组蛋白,并获得纯化的重组蛋白.结果 载体克隆序列及开放阅读框架正确,经IPTG诱导在62kDa处获得重组蛋白,纯化后得到大量GST-Annexin A2重组蛋白.结论 成功构建了pGEX-Annexin A2原核表达载体,表达并纯化出GST-Annexin A2融合蛋白.
目的 研究尪痹胶囊抗碘乙酸钠(MIA)所致大鼠膝关节炎软骨降解的作用.方法 48只SD大鼠,随机分为空白组、模型组、氨基葡萄糖阳性药组、尪痹胶囊低剂量组、尪痹胶囊中剂量组、尪痹胶囊高剂量组,使用向大鼠左侧膝关节腔缓慢注射MIA的方法来建立膝关节炎软骨降解模型.ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α、IL-1β表达水平;取大鼠右侧膝关节进行大鼠膝关节直径测定和关节评分并且进行Micro-CT扫描,获得骨结构参数结果;取右侧膝关节软骨组织,进行苏木素-伊红(HE)染色与番红-O-固绿染色.结果 与模型组相比,经低、中、高剂量尪痹胶囊治疗后,关节肿胀得到消退,软骨表面光泽度、缺损情况得到改善,骨体积分数的上升与骨小梁数量的下降得到抑制,IL-1β和TNF-α的浓度出现下降(P＜0.05).结论 尪痹胶囊能有效改善MIA所致大鼠膝关节炎软骨降解.
目的 探究右美托咪定复合羟考酮对高血压脑出血大鼠血脑屏障的保护作用及机制.方法 将50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、高血压脑出血组(HICH)、右美托咪定组(Dex)、羟考酮组(Oxy)和右美托咪定复合羟考酮组(Dex+Oxy),每组10只.参照Zea-Longa评分标准进行神经功能缺损评分,HE染色观察血肿周围脑组织病理形态变化;TUNEL方法检测血肿周围脑组织细胞凋亡水平;检测脑组织含水量、血肿直径并通过伊文思蓝渗透法检测BBB通透性;Western blot检测血肿周围脑组织紧密连接蛋白Occludin、Claudin-5和ZO-1及SIRT1和FoxO1蛋白表达.结果 右美托咪定复合羟考酮降低高血压脑出血大鼠神经功能评分;改善大鼠血肿周围脑组织病理损伤;降低脑组织细胞凋亡水平;降低脑含水量、血肿直径及BBB通透性;增加血肿周围脑组织Occludin、Claudin-5、ZO-1、SIRT1和FoxO1蛋白表达.结论 右美托咪定复合羟考酮保护高血压脑出血大鼠血脑屏障,改善神经功能,这可能与其激活SIRT1/FoxO1信号通路有关.
目的 探究地骨皮乙素(KuB)对大鼠创伤性脑损伤(TBI)继发氧化应激反应的影响.方法 30只健康雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham)、创伤性脑损伤组(TBI)和创伤性脑损伤+KuB组(KuB),采用控制性脑皮质撞击法(CCI)建立大鼠TBI模型.ELISA检测大鼠血清内炎症因子改变;HE染色观察组织病理学改变;Western blot检测氧化应激相关蛋白及Nrf2-Keap1-ARE信号通路相关蛋白表达;Real time PCR检测ARE的基因表达.结果 与Sham组相比,TBI组大鼠血清内炎症因子TNF-a和IL-6明显升高,IL-10明显降低,脑组织出现明显的炎症细胞浸润;氧化应激相关蛋白MDA5明显升高,抗氧化应激蛋白CAT和SOD-1明显降低,Nrf2-Keapl-ARE信号通路被抑制(P＜0.05).与TBI组相比,KuB处理显著降低血清内炎症因子TNF-a和IL-6的表达,升高IL-10的表达,减少脑组织炎症细胞浸润,降低脑组织内氧化应激相关蛋白MDA5的表达,升高抗氧化应激蛋白CAT和SOD-1的表达,恢复Nrf2-Keap1-ARE信号通路(P＜0.05).结论 KuB通过激活Nrf2-Keap1-ARE信号通路改善大鼠TBI的氧化应激反应.
目的 探讨姜黄素是否通过Akt/Raptor通路调控乳腺癌多柔比星的耐药性.方法 将MCF-7/ADR处理后的细胞分为对照组(Control)、姜黄素低剂量组(Curcumin-L)、姜黄素中剂量组(Curcumin-M)和姜黄素高剂量组(Curcumin-H).MTT法检测耐药细胞对多柔比星的敏感性;CCK-8法检测耐药细胞增殖能力;克隆形成实验检测耐药细胞集落形成能力;Transwell法检测耐药细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测耐药细胞凋亡能力;Western blot实验检测mTOR、Akt、p-mTOR、p-Akt和Raptor蛋白的表达.结果 低、中、高剂量的姜黄素均能够抑制MCF-7/ADR细胞存活率和IC50值,抑制MCF-7/ADR细胞集落形成能力,促进MCF-7/ADR细胞凋亡,其中高剂量的姜黄素对MCF-7/ADR作用最为明显.MCF-7/ADR细胞中mTOR、Akt和Raptor蛋白的表达明显高于MCF-7细胞,而且低、中、高剂量的姜黄素均能够抑制MCF-7/ADR细胞中mTOR、Akt和Raptor蛋白的表达,其中高剂量的姜黄素作用效果最为明显.结论 姜黄素能够抑制MCF-7/ADR细胞的增殖、侵袭和迁移,促进凋亡,逆转MCF-7/ADR的耐药性,可能与下调Akt和Raptor的表达相关.
目的 探索ARMC7在膀胱癌细胞中的表达情况及其对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 下载Human Protein Atlas数据库中膀胱尿路上皮癌的生存预后数据,并应用R软件中的survminer包选择ARMC7表达的最佳截止值进行生存分析;采用Western blot方法检测膀胱癌细胞系以及人正常膀胱上皮细胞SV-HUV-1中ARMC7的蛋白表达情况;构建稳定高表达ARMC7的J82和5637细胞系;采用CCK-8检测转染ARMC7对膀胱癌细胞J82和5637增殖能力的影响;采用划痕实验检测转染ARMC7对膀胱癌细胞J82和5637迁移能力的影响.结果 膀胱癌组织中ARMC7的低表达与膀胱癌患者的不良预后显著相关(P＜0.05);膀胱癌细胞系中ARMC7的蛋白表达显著低于人正常膀胱上皮细胞SV-HUV-1(P＜0.01),ARMC7高表达能够显著抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移能力(P＜0.01).结论 ARMC7能够抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移,且其表达水平与膀胱癌患者的预后显著相关.
目的 探究厄贝沙坦联合卡维地洛对心肌梗死后心衰大鼠心肌血管新生的作用及可能机制.方法 30只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)和厄贝沙坦联合卡维地洛组(irbesartan+carvedilol组),每组10只.全自动生化分析仪检测大鼠血清心肌酶;HE染色观察大鼠心肌病理学改变;TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡;免疫荧光检测大鼠心肌CD34表达,分析微血管密度;Western blot检测心肌组织VEGF、bFGF、β-catenin和PPARγ蛋白表达水平.结果 厄贝沙坦联合卡维地洛降低大鼠血清心肌酶水平、改善心肌病理损伤、降低心肌组织细胞凋亡水平、增加心肌微血管密度及VEGF和bFGF蛋白表达水平、降低心肌组织β-catenin与PPARγ蛋白表达水平.结论 厄贝沙坦联合卡维地洛改善心衰大鼠心肌梗死所致心肌损伤,其机制可能与调节β-catenin/PPARγ信号通路有关.
目的 探讨lncRNA MALAT1靶向miR-30a-5p对乳腺癌细胞增殖的影响.方法 CCK-8实验检测lncRNA MALAT1对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响.建立MCF7荷瘤小鼠模型检测lncRNA MALAT1对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响.通过生物信息学网站预测miR-30a-5p是否与lncRNA MALAT1结合,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证.Real time-qPCR检测lncRNA MALAT1过表达对miR-30a-5p表达的影响.CCK-8实验检测lncRNA MALAT1过表达载体和miR-30a-5pmimics共转染到MCF7细胞对细胞增殖的影响.结果 过表达lncRNA MALAT1促进MCF7细胞的体外增殖及MCF7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长.lncRNA MALAT1与miR-30a-5p结合,且过表达lncRNA MALAT1下调miR-30a-5p的表达.结论 lncRNA MALAT1通过下调miR-30a-5p表达促进乳腺癌细胞增殖.
目的 分析过表达miR-138-5p对胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭的影响及机制.方法 体外培养胃癌MKN-45细胞,分为空白对照组(未转染)、miR-138-5p阴性对照组(转染miR-NC无意义序列)和miR-138-5p激动剂组(转染miR-138-5p模拟物).实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-138-5p、KLF12的相对表达水平;Western blot检测各组细胞中KLF12蛋白表达;Targetscan和双荧光素酶实验分析KLF12与miR-138-5p的靶向关系;MTT法检测各组细胞增殖能力;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力.结果 miR-138-5p过表达使MKN-45 细胞中 KLF12 蛋白表达下降.Targetscan网站分析及双荧光素酶实验证实KLF12为miR-138-5p的靶基因.MTT及Transwell实验结果显示,过表达miR-138-5p使MKN-45细胞增殖能力和侵袭能力下降.结论 过表达miR-138-5p可以抑制胃癌MKN-45细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与其靶向调控KLF12的表达有关.
目的 探讨miR-361-5p对脑胶质瘤迁移和侵袭的影响.方法 应用miR-361-5pmimics转染人脑胶质瘤U251细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力;采用Transwell实验检测U251细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白表达.结果 与对照组和NC组相比,mimics组U251细胞的增殖能力显著降低(P＜0.01),mimics组迁移和侵袭的细胞个数明显减少(P＜0.05);与对照组和NC组相比,mimics组MMP-2、MMP-9以及VEGF表达明显减少(P＜0.05).结论 miR-361-5p能抑制胶质瘤U251细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且降低MMP-2、MMP-9以及VEGF蛋白表达,从而能够控制胶质瘤的生长和转移.
医学人才培养是医疗卫生健康事业的根基,优秀的肿瘤外科医生需要扎实的解剖学基础、较强的实践操作能力、灵活的临床思辨能力和良好的沟通协调能力.为满足肿瘤外科新术式、新技术等发展,需要进一步从临床实际出发,围绕解剖学的学习,培养学生的多学科综合临床思维.
目的 探究miR-124-5p对帕金森大鼠脑黑质区小胶质细胞极化的作用及机制.方法 Wistar雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、帕金森组(PD组)和agomiR-124-5p组(agomiR组),每组10只.阿朴吗啡转诱导实验和异常不自主评分评价大鼠神经行为学;免疫荧光检测大鼠脑黑质TH阳性多巴胺神经元数量及M1型和M2型小胶质细胞数量;ELISA检测大鼠脑黑质炎症因子水平;生物信息学数据库预测与miR-124-5p结合的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证;qRT-PCR和Western blot检测大鼠黑质区STAT1表达.结果 miR-124-5p改善帕金森大鼠神经行为学,增加大鼠脑黑质区神经元数量,降低M1型小胶质细胞分泌的炎症因子水平,增加M2型小胶质细胞分泌的炎症因子水平,驱动M2型小胶质细胞极化,miR-124-5p靶向结合STAT1,并降低帕金森大鼠脑黑质区STAT1表达.结论 miR-124-5p通过靶向抑制STAT1表达,驱动帕金森大鼠小胶质细胞向M2型极化,改善脑损伤.
