采集了新疆南疆地区骏枣缩果病的病样,通过对病样的分离培养、致病性测定、形态特征和培养性状观察,并结合18 S rDNA-ITS、EF-1α、β-tubulin、ATPase多基因序列进行了系统发育分析.结果表明:经分离培养和致病性验证,确定了新疆南疆骏枣缩果病的病原,采用18 S rDNA-ITS、EF-1α和ATPase无法有效区分链格孢菌Alternaria alternate和细极链格孢菌Alternaria tenuissima.通过β-tubulin基因序列、核苷酸一致性进行比较分析和形态学鉴定,将新疆南疆骏枣缩果病病原鉴定为链格孢菌Alternaria alternate(Fr.)Keissler.

决定香梨优斑螟性别的基因尚不清楚,推测香梨优斑螟Sex-lethal(EPSXL)基因是潜在的主要性别决定基因,拟研究其在雌、雄个体不同组织及发育时期的表达.利用生物信息学软件预测香梨优斑螟EPSXL基因的氨基酸序列、分析蛋白质特性和构建近缘物种进化树,并采用荧光定量PCR技术检测该基因在头、胸、腹、翅中的表达情况.发现EPSXL基因编码区长度为1005 bp,编码334个氨基酸,具有2个保守的RRM结构域.其蛋白为碱性亲水性蛋白质,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,有51个磷酸化位点和2个N-糖基化位点,不存在跨膜结构及信号肽.对比发现,EPSXL氨基酸序列与脐橙螟ATSXL的序列相似性最高.在雄性香梨优斑螟中EPSXL在成虫期和蛹期中mRNA表达量较高,在雌性中则在1龄和3龄幼虫期中表达量较高,在雄性腹部和胸部中的表达量极显著高于雌性相应组织.EPSXL蛋白具有2个保守的功能结构域,该基因mRNA表达在不同性别与组织间差异明显,能够为深入研究其功能提供理论依据.

从南疆地区枣树主要种植区采集典型的叶缘褐斑病的病叶,从病叶中分离获得病原菌,对其形态特征进行分析,并结合rDNA-ITS、EF-1α、β-tubulin多基因联合序列分析对其进行分子生物学鉴定.结果表明:采用组织分离法从病叶中分离纯化获得HTYT-1和HTYT-2这2种菌株,经过柯赫氏法则验证,明确HTYT-2菌株为枣树叶缘褐斑病的致病菌;经形态特征和多基因序列联合分析,确定该菌株为链格孢菌[Alternaria alternata(Fr.)Keissler].

本科实验教学是高校教学内容的重要组成部分,在培养学生的实践操作能力、创新思维和创新能力中发挥重要作用.本文分析了实验教学中存在的问题,并提出了通过提升实验教学地位、改革实验教学内容、建立科学的实验考核方式、加强实验教师队伍的培养和建设、改革实验室使用方式等改革实验教学方法,这些方法为全面提升本科实验教学质量提供新的思路.

对南疆核桃腐烂病的生物学特性和致病性迸行研究,了解其生物学特性和致病性,为核桃腐烂病的防治措施提供一定的参考依据.从采集到核桃腐烂病斑上分离获得分离株,将分离株和柳树以及胡杨腐烂病接种到核桃、胡杨和柳树枝条上,观察枝条发病情况;将分离株置于不同温度、pH、不同光照条件以及不同碳氮源培养基上,观察培养性状.结果表明:分离株菌落生长的最适温度为28℃;最适pH值为5～6;最适光照条件为全光照条件;最适氮源和碳源是牛肉膏和麦芽糖;核桃腐烂病与柳树和胡杨腐烂病存在交互侵染.在防治核桃腐烂病时,兼防柳树和胡杨等防风林上的腐烂病;核桃腐烂病菌具有高效的碳氮营养代谢途径.

为了研究百泰不同喷施浓度对棉花叶绿素、养分含量的影响,笔者采用不同浓度梯度的百泰于棉花初花期和花铃期进行喷施,并于喷药后测定全株及根、茎、叶中全氮、全磷、全钾含量和棉花功能叶叶绿素含量(SPAD值).结果表明:适当浓度(450～750 g/hm2)喷施对叶绿素积累及根、茎中全氮、全磷含量具有显著促进作用,但会降低棉花叶片中全氮含量;不论是棉花根系、茎秆还是叶片中,不同浓度间百泰喷施对全钾含量差异不显著;过量喷施(1050 g/hm2)与清水处理间对养分差异不显著.一定浓度的百泰在棉花生长中后期可以促进叶绿素的积累和氮、磷元素的吸收,达到以药促肥的效果.

以枣树和防护林腐烂病菌为研究对象,采用组织块分离法,柯赫氏法则验证后获得单菌落;将分离株置于不同营养条件和环境条件下,观察记录培养性状及差异;对标本制作徒手切片观察分生孢子器纵横切面,研究枣树和防护林腐烂病菌之间的生物学特性差异,以期为摸清枣树腐烂病菌来源奠定基础.结果表明:新疆阿克苏地区主要林木腐烂病菌株存在3个类群,即无气生菌丝羽毛状类群、少量轮纹状气生菌丝类群和少量放射状气生菌丝类群;最适分离株生长的温度为25～28℃,最适分离株生长的pH为4～5;光照条件对各分离株菌落生长有一定的促进作用;各分离株均可在大部分供试的碳源和氮源培养基上生长良好,说明分离株对营养的需求具有广泛性;分离株的分生孢子器纵横切面大小、耐高温性和对光照条件的适应性与寄主和地理来源有关;对酸碱的适应性与寄主来源有关,与地理来源无关.

通过盆栽试验的方法,研究不同浓度百锐噻虫嗪拌种处理对棉蚜的防效及对棉花生长安全性的影响.结果表明:不同浓度处理在出苗第三天对棉蚜的防效均达95％以上,随时间增长防效降低,且第三十天仍有防效,可见噻虫嗪有较强的速效性和持效性.拌种对棉花出苗有抑制作用.噻虫嗪1:150在棉花出苗和蚜虫防治方面效果最好,建议配比为1:150使用.

以瓜列当种子为试材,采用不同浓度的磷素溶液(1×10-4、3×10-4、5×10-4、7×10 4、9×10-4、1×10-5、3×10-5、5×10-5、7×10-5、9×10-5、1×10-6、3×10-6、5×10-6、7×10-6、9×10-6、1×10-7、3×10-7、5×10-7、7×10-7、9×10-7)对预培养的瓜列当种子进行处理,研究了磷素对瓜列当种子发芽率及瓜列当与加工番茄寄生的关系.结果表明:在磷素溶液为1×10-4、9×10-4、1×10-5、3×10-5、1×10-6浓度下瓜列当发芽率较高,对瓜列当发芽有促进作用,在磷素溶液为7×10-6、9×10-5、9×10-6、9×10-7浓度下瓜列当发芽率较低;在1×10-5和9×10-5级别浓度下瓜列当寄生率最低,且差异不显著,能较好的抑制瓜列当的寄生.因此,10-5浓度的磷在促进瓜列当诱杀发芽和减少寄生方面有很好的应用前景.

[目的]通过对病原菌形态学和培养形状观察,结合分子生物技术ITS和β-tubulin序列分析,明确新疆南疆柳树腐烂病菌种类和遗传分化.[方法]采集柳树腐烂病并获得病菌纯培养,对腐烂病菌分生孢子器进行纵横切片并观察记录形态数据,将病原菌置于不同营养条件和环境条件下观察记录其培养形状,采用ITS和β-tubulin序列分析方法结合,构建系统发育树.[结果]分子孢子器和分子孢子形态特征与金黄壳囊孢菌(C.chrysosperma Per.ex Fr.)一致;菌丝生长最适温度20～30℃,最适pH值为5～6,最适碳氮源分别是葡萄糖和蛋白胨;经β-tubulin序列分析,与壳囊孢属不同种类的序列相似度为96％以上;在室内离体接种条件下病原菌均能成功侵染其他5种树木.[结论]引起新疆南部塔河流域柳树腐烂病原菌为金黄壳囊孢菌(C.chrysosperma per.ex Fr),不同来源的病原菌存在一定的遗传分化,在室内可侵染杨树、胡杨、枣树、梨和苹果,并可在胡杨和杨树上产生分生孢子器.

通过不同灌水量及不同氮肥施用量处理下的田间小区试验,研究了水氮耦合对苜蓿叶片叶绿素含量的影响.结果表明:不同灌水量处理叶绿素含量大小依次为W3>W2≥W4>W1,不同氮肥用量处理苜蓿叶绿素含量大小依次为N2>N1>N4>N3,灌水量较大和施氮肥量为中下水平时有利于叶片叶绿素含量的积累.在不同灌水量和施氮量的处理中,以W3(200 m3/667 m2)N2(2.5 kg/667 m2)处理的苜蓿叶片叶绿素含量最高.

以2年生苜蓿为材料,采用2因素4水平田间试验方法,研究水氮耦合对2年生苜蓿株高、分枝数及茎叶比的影响.结果表明,在水氮耦合的各组合处理中,可有效促进苜蓿生长并提高株高的水氮组合处理是W3N3(灌水量200 m3/667 m2、氮肥用量5 kg/667 m2).N3处理(5 kg/667 m2)下苜蓿茎叶比最小,叶片质量比越高,分枝数最高.改良苜蓿茎叶比的最优水氮耦合组合处理是W3N2,而有效促进其分枝数的最优水氮耦合组合处理是W2N3(灌水量160 m3/667 m2、氮肥用量5 kg/667 m2).苜蓿生长中完全不施氮或大水大肥都是不科学的,应根据具体生长要求和目的选择适宜的灌水量和氮肥用量.

[目的]明确枣树腐烂病菌来源,为生产综合防治提供理论依据.[方法]将不同寄主来源腐烂病菌分别接种于30％枣树树皮培养基、果实、枝条和田间接种枝条,观察并计算发病率、病斑扩展速度及产孢情况.[结果]在30％枣树树皮培养基上,不同寄主来源腐烂病菌均能在7d内产孢,来源于柳树、苹果、沙枣、枣树腐烂病菌在30 d内先后产生橘黄色分生孢子角;来源于沙枣、枣树、胡杨及杨树腐烂病菌均能在枣果上产孢,来源于苹果和梨树腐烂病菌未在果实上形成产孢体;不同寄主来源腐烂病菌均能在枣树离体枝条上产孢并吐出分生孢子角,来源于桃树和沙枣树腐烂病菌在枝条上的侵染速度最快.田间枝条接种测定中来源于胡杨腐烂病菌病斑扩展速度最快,接种胡杨和梨树腐烂病菌的枝条在15 d内产生小黑点并吐出黄色分生孢子角.[结论]不同寄主来源腐烂病菌均能在30％枣树树皮培养基繁殖并能形成产孢体,并能产生分生孢子角;均能侵染枣树离体组织和田间健康枝条,但不同寄主来源腐烂病菌致病性存在明显差异.

本研究采用液氮研磨法和石英砂研磨法对链格孢属小孢子种总DNA进行提取,并通过超微量分光光度计检测DNA的纯度和浓度及通过琼脂糖凝胶电泳和PCR检测DNA的质量,以期筛选出适合链格孢属小孢子种总DNA提取的方法.结果表明,两种方法均可得到链格孢属小孢子种的DNA,并且两种方法提取基因组DNA的效果无明显的区别.其中,液氮研磨法需要较多的菌丝体、所需时间长、成本高、获取液氮不易,而石英砂研磨法简单快速、时间短、成本低、研磨充分,损失少、可以避免使用液氮等优点.因此,石英砂研磨法是链格孢属小孢子种用于病原种类研究所需总DNA提取的较为理想的方法.

以13个链格孢属小孢子种菌株为试材,采用正交实验设计的方法,研究Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物4个因素在4个水平上对链格孢属小孢子种的ISSR和RAPD反应体系的影响.结果表明:链格孢属小孢子种ISSR和RAPD的最佳反应体系为25 μL的ISSR-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50 μL,Mg2+浓度为2.50 mmol/L,dNTPs浓度为0.10 mmol/L,引物浓度为0.30 μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25 U;在RAPD-PCR反应体系中,10×PCR Buffer2.50μL,Mg2+浓度为2.00 mmol/L,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.60 μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25 U;在此基础上,对最佳反应体系的退火温度进行了筛选确定;在确定退火温度后,采用最佳反应体系,用ISSR引物UBC808和RAPD引物OPE07进行稳定性和通用性验证,结果表明该优化反应体系具有较好的稳定性和通用性.

2013年新疆南疆地区在骏枣着色期果实表面大量发生异常褐变,后期黑斑病发病率高,为探索褐变原因,对病果采样分离获得菌株LF.菌株LF经柯赫氏法则验证可引起类似症状,依据菌株LF形态学特征进行形态学鉴定;分离菌株提取DNA后分别PCR扩增ITS、EF-1α、β-tubulin和ATPase四个基因片段,分别对扩增的4个基因片段测序后登录Genebank进行Blast序列比对和分析,并构建了系统发育树.经形态学鉴定结合分子生物学鉴定,确定菌株LF为链格孢属链格孢Alternaria alternata(Fr.:Fr.) Keissler .