为了解近年玉溪市猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行及遗传进化情况,本研究采集了 2020-2022 年间玉溪市 4 个养猪场的临床腹泻样品 33 份,采用 RT-qPCR方法调查PEDV的流行情况,再用RT-PCR方法扩增PEDV阳性样品的M基因,分析病毒的遗传进化.流行病学调查结果显示,33 份腹泻样品中,RT-qPCR 检测PEDV 阳性率为 39.39％(13/33).PCR扩增 13 份阳性cDNA样品M基因,测序结果证实为PEDV M基因片段.基于M基因遗传进化分析结果显示,玉溪市猪群流行的PEDV均属于基因2 型,与其他代表毒株基因同源性为97.06％～99.56％,氨基酸同源性为96.48％a99.56％.结果表明,玉溪市PEDV以基因2 型为主,提示需要选择更有效的疫苗来控制PEDV的流行.

为了 了解云南省规模化蛋鸡场腹泻病鸡隐孢子虫的感染情况,试验采用卢戈氏碘液和改良抗酸染色镜检、巢式PCR扩增隐孢子虫18S rRNA基因、BLAST程序测序及遗传进化分析等方法对2020年12月份从云南省多个规模化蛋鸡场采集的71份腹泻蛋鸡的粪便样品进行研究.结果表明:经卢戈氏碘液染色后可见呈棕色近似香蕉形的子孢子,经改良抗酸染色后可见呈红色近似球形的卵囊和近似香蕉形的子孢子.巢氏PCR扩增得到大小为821 bp的目的片段,将获得的虫株命名为YX202106虫株.YX202106虫株与GenBank中已公布的火鸡隐孢子虫的同源性最高,为99.14％～99.51％,且在进化树上处于同一个分支,该虫株还与能引起人畜共患的五种主要隐孢子虫——人隐孢子虫、微小隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、猫隐孢子虫、犬隐孢子虫在进化树上构成一个大分支,具有重要的公共卫生学意义.说明云南地区蛋鸡群中存在火鸡隐孢子虫感染,应加强蛋鸡隐孢子虫病的防治.

为了对云南省玉溪市某散养土杂鸡场一例球虫病例进行虫种鉴定,本试验通过发病情况调查、病理剖检、虫卵检查、虫卵计数、特异性引物PCR扩增、18S rRNA基因序列测序等方法进行检测分析.结果显示:病鸡盲肠粗大肿胀,肠腔内有棕黑色黏液样内容物;虫卵大小在22.922～26.621 μm×17.433～19.631μm之间,每个孢子化卵囊含4个孢子囊,每个孢子囊含有2个子孢子,符合柔嫩艾美耳球虫特征;柔嫩艾美耳球虫特异性基因检测为阳性;该虫种18S rRNA基因序列与柔嫩艾美耳球虫序列的同源性最高为99.61％～99.92％,且在进化树上构成一个分支;虫卵计数卵囊数(OPG)为1.7×104.试验表明该鸡场鸡群感染了柔嫩艾美耳球虫,且为中度感染;用磺胺类药物加祛湿中药治疗,疗效显著.

猫膀胱结石已成为宠物医院的常见病之一.为了预防猫膀胱结石形成和防止复发,本试验收集8例猫膀胱结石病例,分析结石的化学成分.结果显示,8例猫膀胱结石病例中,磷酸铵镁结石占75.0％,草酸钙结石占12.5％,磷酸铵镁和草酸钙混合结石占12.5％;公猫比母猫易患膀胱结石,阉割术与膀胱结石的发病无关;采食干猫粮更易发生膀胱结石.通过分析表明猫膀胱结石是复发率较高的营养代谢性疾病,术后制定预防方案是护理重点,定期的尿沉渣镜检和观察猫的排尿情况是预防猫膀胱结石最有效的方法.

选择300日龄的产蛋鸡2万羽,按笼舍分成对照组和试验组,每组1万羽.对照组使用养殖场原用的预混料和玉米-豆粕型日粮饲喂,试验组饲喂某公司的小麦专用预混料和小麦-豆粕型饲粮,试验期60 d.试验期内记录并对比总耗料量、产蛋数、蛋重、测蛋壳厚度、蛋黄颜色等产蛋性能,计算饲料成本,研究小麦完全替代玉米对产蛋鸡生产性能的影响和降低成本的效应.试验结果显示:使用小麦专用预混料的情况下,不同比例小麦替代玉米对产蛋鸡的采食量、产蛋数、蛋重、蛋壳质量、蛋黄颜色等生产性能无明显影响,全小麦替代组比全玉米组降低成本256元/t.说明小麦完全替代玉米对产蛋鸡生产性能无明显影响,且饲料成本明显降低.

[目的]研究掌握云南省规模化猪场副猪嗜血杆菌的流行血清型及敏感药物,为该省副猪嗜血杆菌防控提供依据.[方法]应用TSA培养基从云南规模化养猪场疑似副猪嗜血杆菌病例样品中分离到2株细菌(DYJ20160901、CH20190501),观察细菌形态学、进行生化试验、观察卫星生长现象、进行特异性片段PCR扩增和药敏试验,以及对菌株进行mPCR分子血清定型和16SrRNA序列分析.[结果]2菌株培养特性、形态学特性及生化试验与副猪嗜血杆菌相似,且均扩增出了1090 bp的特异性片段;通过mPCR分子血清定型在5/12型泳道扩增出了450 bp的特异性片段,通过16S rRNA序列分析显示2菌株与Genbank中已公布的不同血清型HPS菌株同源性为97.3％～99.6％,分别与Genbank登录号FJ667952、AB078972的两株血清5型的菌株构成一个分支,同源性高达99.1％和99.6％.2菌株药敏试验高度敏感率达100％的药物:强力霉素、大观霉素、头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松钠,耐药率为100％的药物:林可霉素.[结论]DYJ20160901、CH20190501菌株均为副猪嗜血杆菌血清5型;二者都高度敏感的药物是强力霉素、大观霉素、头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松钠.

山羊胃肠道线虫病是由多种线虫引发的寄生虫病,该虫体多种多样并且随处可见,因此,发生混合感染的概率较大.病羊肠道消化吸收功能紊乱的现象发生也非常普遍,致使山羊不能正常生长,,甚至会导致病羊死亡.为了避免或减少上述事件的发生,文章对此病进行了分析与研究,阐述了相应的防控措施,以期能对养殖户有所帮助.

为了研究规模化猪场苍蝇体表携带细菌情况,本试验对规模化猪场采集的苍蝇进行了体表细菌分离纯化,同时,对分离细菌进行了显微镜检、16S rRNA测序分析、动物致病性试验.结果显示:4株分离菌ZY1、ZY2、ZY3、ZY4分别属于枯草芽孢杆菌、短杆菌、产硫球链菌、巨球菌,其中,枯草芽孢杆菌、短杆菌、产硫球链菌对小鼠无致病性,巨球菌对小鼠有较强致病性.该研究对猪场苍蝇控制和疾病预防提供了依据.

为了解玉溪地区鸽子弓形虫的感染情况,为鸽子弓形虫病的防控提供参考.本文运用IHA和巢式PCR两种检测方法,对采自玉溪地区的207份鸽子血液样品进行抗体和抗原的检测.结果显示,IHA检测的血清阳性率为6.28％,巢式PCR检测的阳性率为7.69％;从年龄分析,成年鸽(3.23％)和幼年鸽(6.28％)的血清阳性率之间无显著差异(=0.470>0.05).结果表明,该地鸽子存在弓形虫感染,但IHA检测结果仅能为弓形虫病血清学检测提供参考依据,并不能完全确定被检鸽子是否携带弓形虫病原体.将两种检测方法结合使用能更准确地掌握鸽子弓形虫的感染情况.

衣原体可引起多种禽类、哺乳动物和其他种类动物发病.为掌握云南省玉溪市鸽子感染衣原体病的情况,采用间接血凝试验(IHA)对采集于2个乡镇的169份鸽子血清进行衣原体抗体检测.结果显示,有20份鸽子血清衣原体IHA抗体阳性,其阳性率为11.8％(20/169).调查结果表明,云南玉溪地区鸽子存在衣原体感染.鹦鹉热亲衣原体病是重要的人畜共患传染病,需要进一步加强对该病的检疫并采取防控措施.

[目的]筛选适合武定鸡的饲料添加益生菌株.[方法]本试验通过从武定鸡肠道中分离出10株芽孢杆菌,经生化鉴定、耐酸、耐胆盐、肠道粘附、抑菌试验,选择优良的芽孢杆菌进行16S rDNA同源性分析,并选用1日龄武定雏鸡进行饲喂试验.[结果]BacC1为枯草芽孢杆菌,添加BacC1组的武定鸡的体重、免疫器官指数、肠道中乳酸菌含量均显著高于对照组(P＜0.05).而料肉比显著低于对照组(P＜o.05).[结论]在饮水中加入武定鸡分离的芽孢杆菌BacC1可以提高雏鸡的免疫能力和生产性能.研究结果为饲料添加菌株的筛选提供科学依据.

试验旨在研究大麻芋对仔猪致病性肠道大肠杆菌体外抑菌效果.通过采集腹泻仔猪肠道内容物进行体外细菌培养、生化鉴定,分离获得大肠杆菌.提取大麻芋制剂,通过对分离的大肠杆菌进行药敏实验.结果表明:大麻芋对仔猪致病性大肠杆菌具有一定的抑制作用.

[目的]从寄生虫角度明确猪场发生猪腹泻的主要病原体,为防控云南规模化猪场毕氏微孢子虫感染提供理论依据.[方法]通过巢式PCR对云南玉溪和保山地区4个猪场的129份猪粪样本进行猪毕氏微孢子虫检测,扩增微孢子虫的ITS序列,经测序分析和构建系统发育进化树确定其基因型.[结果]129份猪粪样中有30份感染毕氏微孢子虫,感染率为23.26％;其中,云南保山地区的猪毕氏微孢子虫感染率为56.82％(25/44),玉溪地区的感染率为5.88％(5/85),二者差异极显著(P<0.01,下同).按不同发育阶段划分,发现以仔猪的毕氏微孢子虫感染率最高(76.92％),成年猪的感染率相对较低(11.39％),感染率在不同发育阶段间差异极显著.经测序分析发现共有6个基因型,包括5个已知基因型[CHC5(n=3)、CHG19(n=7)、EbpD(n=9)、EbpA(n=2)和EbpC(n=4)],1个新的基因型YNZ1(n=5);从基于微孢子虫ITS序列同源性构建的系统发育进化树可知,检测出的6种基因型均属于Group 1,即具有人兽共患的可能性.[结论]云南猪场普遍存在毕氏微孢子虫感染,且均属于具有人兽共患可能性的基因型.因此,要重点加强猪场微孢子虫的防控工作,养殖过程中产生的粪便等养殖污染物必须经过堆肥发酵或消毒处理后才能作为农家肥使用或排入污水中.

贾第虫是一种重要的人兽共患肠道寄生虫,可感染人和多种家畜.为获悉云南省猪场的贾第虫感染情况,采用巢式PCR,对4个猪场的129份猪粪便样品进行贾第虫TPI基因序列扩增、测序,构建系统发育树.结果显示,有2个样本为贾第虫阳性,阳性率为1.55％ (2/129),均为人兽共患的集聚体B型.该结果说明:云南省猪场内存在贾第虫感染;虽然感染率不高,但存在散播风险.因此,需要加强猪场卫生防疫,做好猪粪便的无害化处理,避免因粪便污染造成疫病流行.

为了了解云南省玉溪市猪群感染猪捷申病的初步情况,试验采用商品化猪捷申病毒(PTV)抗原诊断试剂盒对玉溪市红塔区、通海县和元江县3个县区采集的455份猪血清样品(其中红塔区278份,通海县87份,元江县90份;散养户或规模化猪场317份,屠宰场138份,母猪205份,公猪250份)进行检测.结果表明:在455份血清样品中,375份为阳性,总阳性率为82.42％.其中红塔区猪捷申病阳性率为88.13％,通海县为65.52％,元江县为81.11％;散养户或规模化猪场阳性率为82.97％;屠宰场为81.16％;母猪阳性率为82.44％,公猪阳性率为77.20％.说明玉溪市猪群广泛存在PTV感染,该地区需要加强对猪捷申病的监测和防控.

iTRAQ技术即同位素相对标记与绝对定量技术,主要应用于蛋白质的鉴定与定量分析,结合串联质谱分析,已成为目前蛋白质组学研究的主要手段之一.因寄生虫在不同发育阶段表达虫体蛋白的差异和独特的生活史,其对宿主的选择性、致病性具有较大差异,将iTRAQ技术运用于寄生虫蛋白质组学研究,能有效找出不同阶段寄生虫表达的差异蛋白及感染后宿主表达的差异蛋白,并能对其进行高精度定量分析,这对进一步探索寄生虫生活史、研究与宿主的互作机制提供了技术支撑,同时对寄生虫病的快速诊断及治疗,寻找新的药物靶点等具有重要意义.文章简述了iTRAQ定量蛋白质组学技术及其在寄生虫病研究方面的应用进展.

猪捷申病是由猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)感染引起的猪的一种病毒性传染病.文章根据GenBank收录的PTV基因序列设计套式引物,建立检测PTV的套式RT-PCR诊断方法;从云南省某猪场疑似猪捷申病的病料中检测出PTV核酸阳性,产物经克隆测序,与GenBank收录的PTV毒株序列比对,结果表明该扩增序列与PTV同源性为99%~95%,首次在云南确诊了PTV感染存在.

建立山羊流产嗜性衣原体与Q热立克次氏体基因组DNA特异扩增检测方法,对云南省河谷地区可疑流产病料时行病原检测并最终证实病原的存在,在此基础上了解病原的进化.获得特异基因产物完成测序验证后递交GenBank,能过BLAST初步分析后调取相关基因,应用DNAstar5.0计算序列间的相似性,计算遗传距离,应用MEGA5.2软件进行比对并构建系统发育树,进行聚类分析.云南流产嗜性衣原体KR778870与有参考序列的衣原体毒株比较其核苷酸同源性均为100％,属同一基因型,与鹦鹉热衣原体同源率最高为94.9％;Q热立克次氏体云南毒株KR697576与纳米比亚毒株CP007555同源性为100％,其次美国毒株为CP00102同源率99.7％,台湾株EU000273为99.4％,同源率最低的毒株EU009657仅为42.6％.通过基因特异性PCR确定流产山羊中检测到流产嗜性衣原体及Q热立克次氏体,流产嗜性衣原体PMP基因无变异,Q热立克次氏体TransⅢ基因则有一定的变异.

本试验根据John Ellis和Dae S.Song等报道的4对引物建立同时检测猪圆环病毒(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(GAR)4种仔猪腹泻相关病毒的复合PCR方法,并对云南省玉溪市部分县(区)2014-2015年收集的47份腹泻粪便(肠内容物)进行检测,结果显示PCV2、PEDV、TGEV、GAR总阳性率分别为27.66％、55.32％、6.38％、14.89％.与单项PCR检测的符合率达到了100％,试验表明PEDV是导致该地群仔猪腹泻的主要致病园子;该复合PCR检测方法具有较高的敏感性和特异性,省时省力,完全可以应用于临床疾病的快速诊断.