目的 探讨曲札茋苷注射液对二氯化钴诱导PC12细胞氧化应激的保护作用及其机制.方法 取对数生长期PC12细胞随机分为5组:对照组、模型组、曲札茋苷低水平组、曲札茋苷高水平组、依达拉奉组;甲基三氯硅烷(Methyltrichlorosilane,MTS)法检测细胞活力:分光光度法检测超氧化物歧化酶(Superox-ide dismutase,SOD)活性、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)水平;荧光探针法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)荧光强度;Western Blot法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2-相关X(Bcl-2-Associ-ated X,Bax)蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,模型组细胞活力下降,SOD活性降低,LD H释放增加,活性氧水平增高,Caspase-3,Bax蛋白的表达水平上升,Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);与模型组比较,曲札茋苷组、依达拉奉组细胞活力上升,SOD活性升高,LD H释放较少,活性氧水平降低,Caspase-3,Bax蛋白的表达水平下降,Bcl-2蛋白表达水平上升(P<0.05).结论 曲札茋苷可明显升高氧糖剥夺/复糖复氧PC12细胞的存活率,其机制可能是通过调控相关凋亡蛋白的表达,从而抑制细胞的凋亡.

旨在研究细菌脂多糖(LPS)急性暴露对小鼠睾丸及其功能的影响.将健康雄性小鼠随机分为4组:对照组(Control)、1.25 mg·kg-1 LPS组、2.5 mg·kg-1 LPS组和5.0 mg·kg-1 LPS组,对照组腹腔注射200 μL生理盐水,其余3组注射等体积含不同剂量的LPS,作用12h.收集睾丸组织制作石蜡切片,染色后观察其病理变化,记录体重、睾丸和附睾指数,并测定精子品质相关指标,用RT-qPCR法检测炎症相关基因TNF-α、IL-6、GAS6和TGF-β1的转录,同时用ELISA检测血清中睾酮(T)的含量.结果表明,与对照组相比,LPS急性暴露时,以剂量依赖性方式降低小鼠体重(P＜0.05或P＜0.01),同时显著降低睾丸指数(P＜0.05或P＜0.01)、精子密度(P＜0.01)及精子活力(P＜0.05或P＜0.01),增加精子畸形率(P＜0.05或P＜0.01);使睾丸组织发生不同程度的病理学变化,表现在生精细胞凋亡,曲细精管管腔增大,精子数量减少等;导致血清中睾酮(T)的含量显著下降;另外,LPS还呈剂量依赖方式增加促炎因子TNF-α和IL-6及抑制抗炎因子GAS6和TGF-β1的转录.结果提示,细菌LPS急性暴露可通过破坏机体中炎症因子的平衡,使睾丸组织受到损伤从而导致生精障碍.

热休克蛋白27(Hsp27)是一种结构上高度保守的小热休克应激蛋白,具有多重生物学功能,在调节蛋白质稳态以维持细胞骨架有至关重要的作用.近年来,热休克蛋白(HSPs)在疾病预防和药物开发中取得较大突破,有研究发现在许多病毒感染宿主细胞后,细胞中Hsp27的表达会发生显著变化,表明Hsp27与病毒感染之间有密切关联,但Hsp27在病毒感染中的应用尚不成熟.论文主要介绍病毒感染宿主细胞后,Hsp27通过抑制细胞的自噬 、凋亡 、干扰素形成及维持病毒复制等发挥其在病毒感染中作用,此方面研究为以HSPs为靶点研发抗病毒药物提供了新思路.

研究猪伪狂犬病病毒（PRV）-YY株感染对宿主细胞增殖和热休克蛋白（HSP）27、70和90表达的影响。用Reed-Muench法测定PRV-YY滴度后,用不同病毒量感染PK-15细胞,采用iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖,并用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和免疫印迹试验（Western blot）分别检测感染后细胞中病毒核酸含量及三种HSPs mRNA和蛋白质表达的变化。结果表明,当用80 TCID 50 和100 TCID 50 的病毒量(滴度为10~6TCID 50 ·0.1 mL -1 )感染细胞时,在所监测的时间内细胞指数均显著低于对照组;当感染60 h时,除10 TCID 50 感染组外,其余各组的细胞指数均极显著低于对照组（P＜0.01）;用10 TCID 50 病毒感染细胞60 h时,细胞中病毒核酸含量达峰值;当病毒黏附结束即感染0 h时,HSP70和90 mRNA的转录升高（P＜0.01）,两者分别在感染6、12 h后表达降低（P＜0.01）,而HSP27在感染0 h升高（P＜0.05）,3 h时极显著高于对照组（P＜0.01）,但在感染48 h后其表达降低;PRV感染细胞后三种HSP蛋白的变化趋势基本与其mRNA水平的变化类似（部分时间点不同）。结果表明,一定滴度的PRV可显著抑制PK-15细胞的增殖,PRV感染可诱导PK-15细胞迅速发生应激反应,使HSP27、70和90表达快速升高,三种HSP的快速应答可能在保护细胞免受PRV-YY的感染损伤起着重要作用。

为评价市场供应的某品牌某批次猪萎缩性鼻炎疫苗的安全性,试验选取50头日龄和生长情况相近的怀孕母猪,随机分成两组,其中试验组在产前8～9周对其进行第一次免疫,对照组不做处理,分别测量对照组和试验组免疫前的体温以及免疫后6h、24h、48h的体温,同时记录免疫母猪局部和全身性的反应情况;试验组于产前4～5周进行第二次免疫,处理方法和测量指标同上,同时记录免疫后母猪繁殖性能指标.通过统计各时间点试验组和对照组怀孕母猪的体温变化情况,发现试验组和对照组母猪体温均处于正常范围,无明显差异;免疫后母猪采食量正常、无副反应,对怀孕母猪的应激较小、没有影响母猪的繁殖指标,提示该疫苗安全可靠.

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制.首先,用不同浓度(0、150、200、250、300 μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0 μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h.在整个培养过程中采用iCELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量.结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8h后,极显著降低细胞存活率(P＜0.01),因此确定150 μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度.2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P＞0.05);用2.5、5.0和10.0μmoL/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P＜0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P＞0.05).因此,选用5.0 μmol/L为RES的安全浓度.3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P＜0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P＜0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P＜0.01或P＜0.05).由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM3细胞的氧化损伤.