文章综述了Ccr4-Not复合物的组成、结构、功能以及与病毒和疾病相关的研究进展,为深入了解该复合物提供参考.

贵州省某养鸡场两栋鸡舍中的蛋鸡疑似发生了鸡传染性喉气管炎病毒感染,为确定该病病因,引物按已发表的TK基因引物序列进行合成,从发病鸡采集的病料中扩增出1 259 bp大小的片段;将阳性病料组织处理后接种LMH细胞,盲传3代后发现LMH细胞出现CPE现象,收集其病毒液对其进行PCR鉴定、生长曲线的测定以及动物回归试验,确定分离到一株ILTV毒株,并将其命名为GZNY202112株.为了进一步了解其遗传特征,根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒TK基因、gD基因设计了特异性引物,使用DNAstar软件绘制遗传进化树.TK以及gD遗传进化分析结果显示该毒株与澳大利亚原产疫苗株CSW-1、V1-99亲缘关系最近,GZNY202112株可能与ILT疫苗株有关.

根据马立克氏病病毒PP38基因的一段特异性保守序列设计引物,将MDV的PP38基因构建到19T载体上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,建立了针对马立克氏病病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行了评价.结果显示,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品在6.53×101～6.53×108 copies/μL范围内呈良好的线性关系,其线性相关系数R2=0.998 8,标准曲线方程为Y=-3.271X+39.297,熔解曲线呈现单峰,无非特异性扩增.且检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)和鸡传染性贫血病毒(CIAV)时结果均呈阴性,具有良好的特异性.对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20％.本研究建立的检测MDV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法可用于马立克氏病病毒的快速诊断,对马立克氏病的监测具有重要意义.

为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化特性.结果显示,猪源APOBEC3F基因编码区(CDS)长1 257 bp,编码418个氨基酸,与其他物种该基因的同源性在60%～70%.利用扩增的APOBEC3F基因构建真核表达载体pcDNA3.1(+)5′Flag-APOBEC3F经菌液PCR和测序鉴定正确后,转染Marc-145细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组APOBEC3F蛋白的表达.IFA结果显示,转染pcDNA3.1(+)5′Flag-APOBEC3F的Marc-145细胞质中出现特异性红色荧光;western blot结果显示,转染pcDNA3.1(+)5′Flag-APOBEC3F的细胞样品在44 ku处有特异性条带,表明猪源APOBEC3F在Marc-145细胞中获得了表达.在Marc-145细胞中转染不同剂量的pcDNA3.1(+)5′Flag-APOBEC3F或不同剂量的针对APOBEC3F的siRNA,过表达或抑制APOBEC3F表达后感染PRRSV,通过RT-qPCR检测PRRSV N基因mRNA的转录水平,采用western blot检测细胞中PRRSV N蛋白的表达水平,采用TCID50测定PRRSV滴度.结果显示,在Marc-145细胞中过表达的APOBEC3F可以显著抑制PRRSV N基因mRNA转录水平(P＜0.01)和N蛋白的表达水平,降低PRRSV滴度(P＜0.01、P＜0.001),表明APOBEC3F具有抑制PRRSV增殖的作用,且抑制效率与重组质粒的转染剂量呈正相关.在Marc-145细胞中抑制APOBEC3F的表达后,PRRSV N基因的mRNA转录水平(P＜0.01)、N蛋白的表达水平与PRRSV滴度(P＜0.05、P＜0.001)均显著升高,表明抑制APOBEC3F的表达具有促进PRRSV增殖的作用,且该促进效率与针对APOBEC3F的siRNA转染剂量呈正相关.本研究首次证明APOBEC3F对PRRSV在Marc-145细胞中的增殖有抑制作用,为研究APOBEC3F功能提供实验依据,也为研究抗PRRSV相关机制的研究提供参考.

为了确定贵州省某规模养殖场病鸡发病的原因,本试验对发病鸡进行了临床剖检,取其鸡冠、肝脏、心脏、脾脏和肾脏等病料组织进行了细菌分离培养,并进行了鸡痘病毒(FWPV)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的PCR检测.结果显示:实验室剖检可见病鸡存在鸡冠痘状结痂、肝脏肿瘤结节、心包积液、脾脏肿大等症状;细菌分离培养无菌落形成;基于ALV-J gp85、FAdV-4 penton、FWPV TK基因片段的PCR检测均呈阳性;随后的ALV-J gp85、FAdV-4 penton、FWPV TK基因克隆及序列分析进一步揭示了 3种病毒的遗传进化状况.因此,送检病鸡确诊为ALV-J、FAdV-4、FWPV混合感染,依据确诊结果向有关养殖场提出了合理的防治措施建议.

研究旨在了解贵州省某养殖场内肉鸡禽白血病的感染情况,对该场疑似感染禽白血病病毒(ALV)的20只发病鸡进行病理剖检、PCR检测,并对阳性条带进行测序比对,构建系统进化树.结果显示:发病鸡肝脏肿大、有白色肿瘤结节;肾脏肿大、有肿瘤样结节,质黑如颗粒状;脾脏肿大;气管出血.PCR检测结果显示,20只发病鸡中有12只鸡存在ALV感染;对阳性样品进行ALV分型鉴定可知,阳性样品在422bp处出现特异性扩增条带,阳性率为60％(12/20).测序结果显示,所得序列与J亚群参考株J-AHaq02的相似性最高(99.8％).研究表明,12只禽白血病患病鸡均为J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染,所得序列与ALV-J聚于一支.

[目的]明确引起贵州某规模化(20万羽)养殖场三黄鸡群发病的病因及科学用药,最大限度减轻经济损失,同时为规模化养殖场防控禽白血病和净化鸡群提供参考依据.[方法]无菌采集送检病鸡的心脏、肝脏和脾脏等组织进行细菌分离培养、生化试验、荚膜分型、毒力基因和耐药基因等分子生物学检测,同时对采集病料进行禽白血病病毒(ALV)PCR检测及gp85基因克隆测序分析.[结果]成功分离获得1株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),命名为Pm-GZXF2021;Pm-GZXF2021为荚膜A型Pm,具有黏附素(ptfA、hsf-1、hsf-2、pfhA、fimA和tadD)、超氧化物歧化酶(sodA)、外膜蛋白(ompA、ompH、plpB和oma87)和铁摄取(exbB、exbD、tonB、Fur、hgbB和hgbA)相关的毒力基因,同时携带有喹诺酮类的gyrB耐药基因和内酰胺类的tem耐药基因;药敏试验结果表明,Pm-GZXF2021对米诺环素、丁胺卡那、哌拉西林、庆大霉素、多西环素、氧氟沙星、新霉素、头孢拉定、麦迪霉素及头孢哌酮等药物敏感,而对头孢他啶、苯唑西林、羧苄西林及头孢曲松等药物已产生耐药性;健康昆明小鼠在接种Pm-GZXF2021纯培养菌液(1.7×108 CFU/mL)后12 h内全部死亡,剖检可见昆明小鼠小肠均出现胶冻样浸润,肝脏肿大且伴有白色坏死灶.从病鸡的组织样品检测出ALV,命名为ALV-GZXF2021;由基于gp85基因核苷酸序列相似性构建的ALV系统发育进化树可知,ALV-GZXF2021与5株ALV-K参考毒株处于同一分支,与A、B、D、E、J亚群处于不同分支,即ALV-GZXF2021属于K亚群.[结论]贵州某规模化养殖场三黄鸡群发病是由Pm与K亚群外源性ALV混合感染所致.因此,养殖场应采取相应的防控措施,一般包括加强饲养管理,做好生物安全措施及疫苗接种等,尤其是建立无禽白血病的种鸡群.

2020年11月贵州毕节某猪场一头经产母猪突然发病死亡,为鉴定导致其发病死亡的致病菌,试验无菌采取病死猪病变肺组织,通过细菌分离培养、染色镜检、生化试验、16S rRNAPCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验、血清型鉴定、毒素基因鉴定、耐药基因检测及毒力试验.结果显示,从病变肺中分离到1株病原菌,分离菌的菌落形态、菌体形态、生化特征和16SrRNA基因序列均与胸膜肺炎放线杆菌相符,将其命名为APP GZBJ2020;药敏试验显示,APP GZBJ2020株对头孢曲松、头孢哌酮、青霉素等9种药物敏感,对头孢氨苄和米诺环素中度敏感,对庆大霉素、红霉素、新霉素等9种药物耐药;血清型鉴定结果显示其为血清5型胸膜肺炎放线杆菌;毒素鉴定结果显示APPGZBJ2020株含有ApxⅠ、ApxⅡ及ApxⅣ三种毒素基因;耐药基因检测结果显示,APP GZBJ2020株携带有tem、gyrB、parC和parE四种耐药基因;动物毒力试验结果显示,APPGZBJ2020株对小鼠有致病性.试验成功从病死经产母猪病变肺中分离到1株血清5型胸膜肺炎放线杆菌,试验结果可为该猪场治疗发病猪提供一定帮助,并为了解胸膜肺炎放线杆菌在贵州省的流行血清型提供数据支持.

为了解贵阳市某养殖场J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV) gp85基因的变异情况及粪肠球菌(Enterococcus aecalis,EF)毒力基因的携带情况,本研究对该养殖场ALV与粪肠球菌混合感染的病例展开了病原学调查分析,采集病料进行病毒核酸检测、gp85基因克隆测序分析、核苷酸序列相似性分析、细菌分离鉴定、毒力基因检测等.结果 显示,成功克隆出ALV gp85基因并分离鉴定出1株粪肠球菌,分别命名为GZM52021株和GZEF2021株.ALV核酸检测仅在约422 bp处出现特异性扩增条带,说明存在ALV-J感染;成功克隆ALV gp85基因,且GZM52021株与J亚群参考毒株gp85基因(GenBank登录号为KM655820、KF796654、JN378888和Z46390)的相似性较高,在97.9％～98.2％之间;gp85基因核苷酸序列遗传进化树构建结果与相似性结果一致.GZEF2021株在LB固体平板上长出圆形凸起、不透明的乳白色菌落,在鲜血琼脂平板上有明显的溶血现象,革兰氏染色镜检为球形或卵圆形阳性链状球菌;16S rRNA测序结果显示,GZEF2021株与粪肠球菌(GenBank登录号为KJ626240、MT611693、KY399248、MH919370、MN379663和KU937389)的相似性均在99％以上;药敏试验结果显示,GZEF2021株对头孢哌酮、青霉素、哌拉西林和羧苄西林4种药物敏感,对复方新诺明、头孢拉定、头孢唑啉3种药物中度敏感,对新霉素、丁胺卡那、多西环素和米诺环素4种药物耐药;毒力基因检测显示,GZEF2021株携带有ace、gelE、asa1、EF3314和efaA 5个毒力基因,说明从鸡中分离出的粪肠球菌可能具有一定的致病性.该病死鸡存在J亚群ALV与粪肠球菌共同感染的情况,本试验结果可为了解J亚群ALV和粪肠球菌在贵州的流行趋势及其混合感染的诊治提供一定的参考资料.

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、传染性、病毒性疾病.临床以体温升高、眼鼻分泌物增多、肺炎等为特征.本文从小反刍兽疫的病原学特征、流行病学、临床症状、剖解病理变化、预防措施等方面进行论述,以期为临床上防控该病提供一定的理论依据.

为了解从贵阳市某养殖场矮脚黄鸡病料中分离的马立克氏病病毒(MDV)的遗传变异情况及meq基因的分子特征,试验对临床病料进行MDV meq基因PCR检测、克隆及序列分析.结果:从检测样品中扩增出1020 bp MDV meq基因片段(命名为MDV GZ 2019 meq),将该片段克隆至pMD19-T载体,经测序为1020 bp序列.同源性分析结果显示:该病毒株与国内特超强毒MDV分离株GXY2株的核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性最高,分别为99.8％、99.4％;推导氨基酸序列比对结果显示存在5个突变位点,分别为第63位(R→G)、第80位(D→Y)、第139位(T→A)、第176位(P→R)、第217位(P→A).除第63位突变位点外,其余4个突变位点均与GXY2株一致.结论:本次分离的MDV贵州株与国内特超强毒MDV分离株GXY2株同源性最高,推测其为MDV强毒株.

目的:探讨药物诱导联合腹主动脉流出道缩窄构建兔腹主动脉瘤(AAA)模型的可行性与有效性.方法:将24只雌性新西兰大白兔随机均分为4组,其中两组分别采用含CaCl2(0.75 mol/L)或胰蛋白酶(0.04 g/mL)溶液的棉条包裹浸润血管30 min诱导AAA,另两组分别在CaCl2或胰蛋白酶浸润的基础上行腹主动脉流出道缩窄术(缩窄50％～60％)造模.术后使用兽用彩超诊断仪监测受累血管管径变化,术后2周,收集损伤段腹主动脉制作组织切片行HE与EVG染色.用计算机模拟评估流出道缩窄对AAA形成的影响.结果:术后2周,超声检查显示,两个单纯药物浸润组受累血管扩张不明显,均未达到AAA形成标准,两个药物联合缩窄组受累血管明显扩张,其中CaCl2+缩窄组成瘤率66.67％(4/6),血管平均扩张1.61倍;胰蛋白酶+缩窄组成瘤率83.33％ (5/6),血管平均扩张1.89倍.与正常腹主动脉比较,CaCl2浸润的血管内膜厚度明显增加(均P＜0.05),而胰蛋白酶浸润后的血管内膜厚度变化不明显(均P＞0.05);各组中膜厚度均明显增加,弹力纤维面积百分比均明显降低,其中CaCl2+缩窄组的变化最为明显(均P＜0.05).计算机数值模拟结果显示,流出道缩窄后血管壁应力增大,成瘤率增加.结论:药物损伤联合腹主动脉流出道缩窄能成功构建兔AAA模型,缩短造模时间,且胰蛋白酶浸润损伤联合腹主动脉流出道缩窄造模方法优于CaCl2联合腹主动脉流出道缩窄造模方法.