为构建16S rRNA甲基化酶RmtB重组菌并测定其稳定性,应用分子克隆技术构建16S rRNA甲基化酶RmtB重组菌,采用菌落PCR、双酶切、药敏试验及序列分析等方法鉴定重组质粒,测定重组菌的生长曲线及传代后的最低抑菌浓度(MICs)以确定重组菌的稳定性.结果表明,构建了16S rRNA甲基化酶RmtB重组菌pRmtB1、pRmtB2、pRmtB4.重组菌对阿米卡星、庆大霉素高度耐药.在没有抗生素选择压力下传代3次后,3株重组菌的生长曲线基本相似,但只有pRmtB1维持了对庆大霉素和阿米卡星的高度耐药性.由此可知,重组菌pRmtB1较稳定,可作为16S rRNA甲基化酶耐药抑制剂筛选模型.

为分析中药与庆大霉素联合对16S rRNA甲基化酶RmB耐药重组菌的作用,采用棋盘稀释法测定庆大霉素与黄连、五倍子、连翘、黄芩、乌梅的联合抑菌指数(frictional inhibitory concentration index,FICI).试验结果表明,黄连、五倍子、连翘、黄芩、乌梅与庆大霉素的联合抑菌指数(FICI)分别为0.75、0.25、1.50、2.00、0.75.提示中药五倍子与庆大霉素联合有协同作用,黄连、乌梅与庆大霉素联合有相加作用,连翘、黄芩与庆大霉素联合呈现无关作用.

为了探讨一种比较适合规模化猪场的蓝耳病合理免疫程序,本文用不同疫苗和不同免疫方式对仔猪进行免疫接种,然后采集血清,检测其蓝耳病抗体水平.