目的 研究肾衰泄浊汤及其拆方对单侧输尿管梗阻大鼠模型(UUO)大鼠VEGF/VEGFR信号通路的影响.方法 144只健康雌性SD大鼠建立UUO模型,再随机分为假手术组、补虚方组、袪邪方组、肾衰泄浊汤组、贝那普利组及模型组,每组24只,各组大鼠于第7、14、21天处死.取肾脏组织行HE、Masson染色,并在光镜、电镜下观察,评分;采用Western blot检测各组大鼠肾组织中 α-SMA、VEGFA、VEGFR2蛋白表达水平.结果 同时期各组比较,模型组BUN、SCr较其他组升高明显(P<0.05);治疗组BUN、SCr较其他组明显下降(P<0.05);其中肾衰泄浊汤组疗效最明显(P<0.05).HE、Masson染色结果:除假手术组外,术后7 d各组均可观察到炎症和坏死病变,术后14、21 d可观察到炎症和纤维化,模型组纤维化程度最重.Western blot结果:假手术组 α-SMA、VEGFA、VEGFR2少量表达,模型组中 α-SMA、VEGFA、VEGFR2的表达随时间增长逐渐增多(P<0.05).同时期各治疗组α-SMA、VEGFA、VEGFR2蛋白的表达较模型组均有所减少,而补虚方、祛邪方组VEGFA蛋白表达较之稍有提升(P<0.05).肾衰泄浊汤组第21天蛋白减少较其他治疗组更明显(P<0.05).结论 肾衰泄浊汤及其拆方可能通过抑制VEGF信号通路,减少α-SMA、VEGFA、VEGFR2表达,干预UUO大鼠周细胞-肌成纤维细胞转分化过程,达到抗肾间质纤维化的作用.

目的 研究肾衰泄浊汤及其拆方对大鼠肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化(pericytes-myofi-broblasts transition,PMT)相关蛋白表达的影响.方法 取1个月龄健康雌性SD大鼠96只,随机平分为肾衰泄浊汤组、补虚方组、袪邪方组、贝那普利组、假手术组、模型组,每组16只,建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型.随机取各组大鼠8只于术后7、14 d处死,取大鼠肾脏组织行HE、Masson染色,检测大鼠肾组织血小板衍生因子受体-β(PDGFR-β)、硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达.结果 第7、14天时模型组、肾衰泄浊汤组、祛邪方组、补虚方组PDGFR-β、NG2、α-SMA表达高于假手术组(P<0.05);各治疗组PDGFR-β、NG2、α-SMA表达较模型组减少相对明显(P<0.05),肾衰泄浊汤组优于补虚方组、祛邪方组及贝那普利组.结论 肾衰泄浊汤及其拆方可能是通过干预UUO大鼠PMT过程,抑制PDGFR-β、NG2、α-SMA表达,减轻肾间质纤维化,延缓慢性肾脏病的发展.

目的:探讨在尿毒症毒素微环境下巨噬细胞外泌体分泌微小RNA-22(miR-22)对心肌细胞自噬的影响.方法:收集硫酸吲哚酚(IS)刺激后的巨噬细胞源性外泌体,并将其与H9c2细胞共培养,RT-qPCR检测巨噬细胞及其分泌的外泌体中miR-22的表达水平,CCK-8法检测H9c2细胞的活力,Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD63及自噬相关蛋白LC3和P62的表达.结果:在IS刺激下,巨噬细胞中外泌体表面标志蛋白CD63的水平显著高于对照组(P<0.05),同时IS组巨噬细胞及其分泌的外泌体中miR-22的水平较对照组显著上调(P<0.01).随着共培养体系中巨噬细胞外泌体浓度的增大,H9c2细胞的活力逐渐降低(P<0.05),并且巨噬细胞外泌体的刺激降低了H9c2细胞P62的表达,并促进了LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化,这种变化呈剂量依赖性(P<0.05).在巨噬细胞外泌体刺激下,miR-22模拟物转染的H9c2细胞与相应阴性对照miRNA转染的细胞相比,具有更高的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率(P<0.05)及更低的P62蛋白表达量(P<0.05);而转染miR-22抑制物则产生了相反的结果.结论:IS刺激的巨噬细胞可通过外泌体途径上调心肌细胞miR-22表达,促进心肌细胞的自噬反应.

结合有关文献研究,认为肾纤维化的中医病机可归属于虚、湿、瘀、毒,这与微炎症状态下周细胞转分化形成的细胞外基质沉积致肾纤维化类似.周细胞广泛分布于微血管内皮细胞和基底膜之间,受到内生毒邪的影响,可出现如微血管覆盖率下降、收缩功能异常等表现,这些表现在血管相关疾病和纤维化疾病的发生和发展中起到重要作用.中医治疗肾纤维化的基本原则是扶正以补虚,调节脏腑阴阳以助通络.肾纤维化微型癥积的形成与浊毒、瘀血、湿邪密切相关,常以祛邪通络为法治疗.中药提取的有效成分对周细胞具有保护作用,并在一定程度上可以抑制周细胞-肌成纤维细胞转分化过程.但中药对RF过程中周细胞的作用机制仍不是十分清楚,需要进一步深入研究.

目的 观察缺氧环境下肾小管上皮细胞(RTEC)外泌体中自噬相关的微小核糖核酸(miRNA)表达量的变化.方法 体外培养RTEC,常氧及缺氧分别处理RTEC,采用Exo-Quick-TC提取外泌体,采用透射电镜、蛋白浓度定量鉴定并比较外泌体的特性,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测RTEC外泌体中自噬相关miRNA-30b、miRNA-30c、miR-NA-214、miRNA-183、miRNA-200a表达量.结果 缺氧状态下肾小管细胞分泌的外泌体外观无明显变化,缺氧48 h外泌体/细胞蛋白比值明显上升,明显高于常氧组,随着缺氧时间延长外泌体自噬相关miRNA表达逐渐上升,缺氧组各时间段自噬相关miRNA-30b、miRNA-30c、miRNA-214、miRNA-183、miRNA-200a含量均高于常氧组,且随着缺氧时间延长含量逐渐上升.结论 缺氧可改变肾小管细胞分泌外泌体的生物学功能,表现为自噬相关miRNA表达上调,这可能是慢性肾脏病患者重要脏器出现自噬行为的原因之一.

目的 通过观察中药复方肾衰方及其拆方对周细胞中PDGF/PDGFR-β信号通路的表达影响,阐述肾衰方抗肾间质纤维化的机理.方法 将108只SD雌性大鼠随机分为:假手术组、模型组(UUO模型)、肾衰方组、祛邪方组、补虚方组、贝那普利组,每组18只,各组大鼠分别于术后第7、14、21天给药2h后各处死6只.检测大鼠肾功能;取肾脏组织行HE、Masson染色,并测定大鼠术侧肾脏肾小管损伤程度评分及肾小管间质纤维化指数;Western blot、RT-PCR法测定肾脏组织中α-SMA、PDGF、PDGFR-β的表达情况.结果 同时期模型组与假手术组相比,模型组大鼠血尿素氮、血清肌酐均比模型组升高(P＜0.05);同时期各治疗组与模型组相比,各治疗组大鼠血尿素氮、血清肌酐均较模型组下降,且以肾衰方组下降更明显(P＜0.05).通过HE、Masson染色,从不同时间段观察各组大鼠肾脏病理组织的变化,发现术后7d多以炎症和坏死病变为主,术后14d多以纤维化和炎症病变为主,21d纤维化程度更加明显,模型组病理表现最为明显.经Western blot法测定发现,各治疗组的α-SMA、PDGF、PDGFR-β蛋白阳性表达均低于同时期模型组,以肾衰方组降低更明显(P均＜0.05);RT-PCR法检测结果显示,模型组及各治疗组大鼠α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达量均高于假手术组(P均＜0.05),各治疗组α-SMA、PDGF、PDGFR-βmRNA表达较同时期的模型组降低明显(P均＜0.05),以肾衰方组降低更明显.结论 中药复方肾衰方可通过调节周细胞上PDGF/PDGFR-β信号通路的传导,同时下调α-SMA蛋白的表达,达到抗肾间质纤维化的作用.