Цель работы - измерение уровня экспрессии проапоптозных сигнальных белков Bad, Bax, Bak, Bim, Bid, 14-3-3, а также каспазы-2 и каспазы-9, в клетках кожи и подкожно-жировой ткани, выделенных из операционного материала при операции по коррекции контуров лица. методика. Из операционного материала в самом начале операции (контрольные образцы), а также после её завершения (опытные образцы), были выделены образцы кожи и подкожной клетчатки, из который были изолированы жизнеспособные клетки. Эти клетки обрабатывали антителами к сигнальным молекулам апоптоза и затем анализировали на проточном цитометре FACSCalibur по программе SimulSet. результаты. По сравнению с контрольными образцами, не подвергавшимися ишемии, клетки кожи, выделенные по завершению операции, подвергались действию ишемии / реперфузии, то есть в них оказались активированы сигналы апоптоза, ассоциированного с митохондриями, на что указывает повышение экспрессии проапоптозных белков и их фосфорилированных форм. Уровень экспрессии этих белков был проанализирован с позиций возраста пациенток. Было установлено, что в возрастной группе старше 50 лет все показатели статистически значимо превышали норму, а также соответствующие показатели пациенток более молодого возраста. Заключение. Полученные данные указывают на активацию сигнальных путей апоптоза, ассоциированного с митохондриями, в клетках кожи и подкожно-жировой ткани, выделенных из операционного материала при коррекции контуров лица, а также на усугубление процесса апоптоза по мере старения организма пациента. The aim of this work was to measure the expression of proapoptotic signaling proteins, Bad, Bax, Bak, Bim, Bid, and 14-3-3, as well as caspase-2 and caspase-9, in skin cells and subcutaneous adipose tissue isolated from tissues collected during face lifting surgery. methods. Skin and subcutaneous tissue samples were isolated at the very beginning of the operation and after its completion; then viable cells were isolated from the samples. The cells were stained with antibodies to apoptosis signaling molecules and analyzed with a FACSCalibur flow cytometer using SimulSet software. Statistical analysis was performed with BIOSTAT software. results. Skin cells isolated at the end of the operation were more severely damaged compared with control samples (cells isolated at the very beginning of the operation and not subjected to ischemia). In the cells obtained after the surgery, effects of ischemia/reperfusion were observed. The cells isolated after the face lifting surgery contained activated apoptotic signals associated with mitochondria, as indicated by increased expression of proapoptotic proteins and their phosphorylated forms. The proapoptotic protein expression was analyzed based on the patients’ age. It was found that in the group older than 50 years, all indexes significantly exceeded both the normal range and respective values in younger female patients.conclusion. The study results showed activation of proapoptotic signaling pathways associated with mitochondria in skin cells and subcutaneous adipose tissue isolated during face lifting surgery along with aggravation of apoptosis as the patient ages.
Цель. Изучение клеток иммунной системы полости рта у пациентов до проведения операции лифтинга лица, а также сопоставление этих данных с показателями, выявленными при осложнениях в послеоперационном периоде. Методика. Исследованы клетки иммунной системы полости рта 100 женщин (23-68 лет), которым перед операцией лифтинга лица проведено стоматологическое обследование и необходимое лечение при наличии кариеса дентина, клиновидного дефекта эмали зуба, хронического периодонтита или пульпита. Выделенные путем смывов десенной борозды клетки окрашивали моноклональными антителами и анализировали на проточном цитометре. Определяли уровень спонтанного и индуцированного апоптоза. Оценивали уровень фагоцитоза и генерацию супероксидного аниона нейтрофилами. Результаты. Показано, что хронические воспалительные заболевания зубов оказывают негативное влияние на состояние иммунных клеток ротовой полости, сопровождаются повышением генерации супероксидного аниона нейтрофилами, повышением уровня спонтанного и церамид-индуцированного апоптоза клеток десенной борозды. Заключение. Наличие хронической патологии зубов, даже после санации, оказывает негативное влияние на течение послеоперационного периода при проведении операции лифтинга лица, в частности, способствует увеличению времени заживления операционной раны, инфицированию раны с появлением очагов некроза в области операционного шва. The object. The study of the cells of the immune system of the oral cavity in patients before the operation of face lifting, as well as a comparison of these indicators with complications in the postoperative period. Methods. The immune cells from the oral cavity were studied in 100 women (23-68 years), who underwent a dental examination and necessary treatment if they had the dentin caries, wedge-shaped defect of tooth enamel, chronic periodontitis or pulpitis before the facial lifting operation. The immune cells have been isolated by a lavage of gingival sulcus around the damaged tooth. Results. It has been shown that chronic dental diseases made a negative contribution to the oral cavity immune cells. It has been accompanied by the elevated levels of superoxide originating from neutrophils as well as the increased levels of spontaneous and ceramide-induced apoptosis of immune cells isolated from the gingival sulcus. Conclusion. The presence of chronic pathology of teeth even in the case of the preoperative dental sanation has a negative impact on the postoperative period after face lifting, in particular, contributes to the lengthening of the surgical wound healing time, wound infection as well as the partial necrosis of suture.
В период ишемии оперируемого органа или ткани, вызванной прекращением доступа питательных веществ с кровью, активируется аутофагия, что позволяет клеткам сохранить жизнеспособность. Цель работы - определение экспрессии белков аутофагии Beclin-1, LC3-II, p62, ATG5в клетках кожи и подкожно-жировой клетчатки (ПЖК), выделенных из операционного материала при проведении лифтинга лица. Пациентки - женщины в возрасте 21-64 лет (n = 84). Материалы и методы. Из образцов кожи и ПЖК лица, иссеченных во время операции лифтинга, путем обработки коллагеназой получали суспензию клеток. Измерение уровня флуоресценции белков аутофагии в клетках проводили методом проточной цитометрии. Данные анализировали по алгоритму ANOVA - в зависимости от возраста пациенток. Результаты. Уровень экспрессии исследуемых маркеров аутофагии снижался с возрастом, достоверные различия (p < 0,05) получены для пациенток в возрасте старше 50 лет по сравнению с лицами моложе 30 лет. Выводы. Показано, что процессы аутофагии в клетках кожи и ПЖК активируются при лифтинге лица, но активность аутофагии достоверно снижается после 50 лет по сравнению с молодым возрастом. Также установлено сопряжение активности аутофагии с гипоксией и с изменением мембранного потенциала митохондрий в клетках ПЖК. Autophagy is known to be activated during organ or tissue ischemia induced by blood deprivation during surgery to keep the cells viable. Aim. To evaluate the expression of autophagy proteins, Beclin-1, LC3-II, p62, and Atg5 in cells isolated from the skin and subcutaneous fat excised from the face lifting surgical material. Patients. Women aged 21-64 (n = 84) were recruited. Methods. Cells were obtained from face lifting surgical materials using the collagenase treatment. The autophagy protein expression was analyzed using the flow cytometry. Statistics was performed using ANOVA based on the age of patients. Results. Expression of the studied autophagy markers was found to decrease with age; significant differences (p < 0.05) were obtained for patients older than 50 compared with those under 30. Conclusions. We demonstrated that autophagy was activated in cells from skin and subcutaneous fat during the face lifting. The autophagy protein expression was significantly reduced at ages older than 50 compared to the age under 30. The autophagy coupling with both hypoxia and changes in the mitochondrial membrane potential was also shown.