Представлены результаты разработки методики количественного определения стабилизаторов углеводной природы: сорбитола, маннитола, глюкозы, трегалозы, сахарозы, лактозы и мальтозы в биологических лекарственных препаратах. Для анализа использовали метод ионообменной хроматографии с импульсным амперометрическим детектированием и применением в качестве подвижной фазы раствора гидроксида натрия. Разработанная методика специфична и линейна в диапазоне от 1 до 50 мкг/мл. Коэффициент детерминации калибровочной кривой для сорбитола и сахарозы – 0,9994, для маннитола – 0,9997, для трегалозы – 0,9992, для глюкозы – 0,9998, для лактозы и мальтозы – 0,9999. Предел количественного определения составил 0,05 мкг/мл для сорбитола, маннитола, трегалозы, лактозы и сахарозы, 0,1 мкг/мл – для глюкозы и 1,0 мкг/мл – для мальтозы. Относительное стандартное отклонение концентрации сорбитола – 1,9 %, манитола – 1,5 %, трегалозы – 0,6 %, глюкозы – 0,3 %, лактозы – 1,8 %, сахарозы – 1,4 % и мальтозы – 1,7 %. Процент извлечения при определении правильности для всех испытуемых лекарственных препаратов находится в пределах (100 ± 5) %.

Разработана методика количественного определения алюминия в иммунобиологических препаратах методом атомно-абсорбционной спектроскопии с электротермической атомизацией. Подобраны условия пробоподготовки геля гидроксида алюминия (5 М гидроксид натрия, с нагревом на кипящей водяной бане в течение 5 мин с последующей нейтрализацией концентрированной азотной кислотой). Методика валидирована, аналитическая область установлена в диапазоне 10 – 50 мкг/л Al3+, подтверждены правильность и внутрилабораторная прецизионность. Полученные результаты позволяют рассматривать данную методику в качестве альтернативной для количественного определения алюминия в иммунобиологических лекарственных препаратах.

Specific antiviral activity is one of the key indicators characterising pharmaceutical quality and pharmacological efficacy of interferon alpha products (IFN-α). Specific activity is determined using a bioassay measuring antiviral activity in cell culture. The aim of the study was to select the most appropriate conditions for in vitro determination of IFN-α product specific activity. Materials and methods: Vero, MDBK, Hep-2, and A-549 homologous and heterologous cell cultures, as well as vesicular stomatitis Indiana virus (VSV) and murine encephalomyocarditis (EMC) virus at a dose of 100 TCD50 /0.1 mL were used for determination of specific antiviral activity. The international reference standard of recombinant interferon alpha-2b activity (Interferon alpha 2b, human, rDNA, E. coli -derived, 2nd WHO International Standard, 1999, NIBSC Code No. 95/566) and human recombinant interferon alpha 2b in the form of solution (batch No. 040214, Pharmapark LLC, Russia) were used as IFN-α samples. Results: the analysis of the obtained data helped to determine: the combinations of cell lines and the indicator virus most sensitive to IFN-α; the optimal concentration of fetal serum in the medium, and the optimal time parameters; the preferred method of reporting test results. Conclusions: the following test conditions were found to be optimal: the MDBK/VSV and Hep-2/EMC combinations proved to be the most sensitive to IFN-α; the optimal period of interferon and cell culture incubation—24 hours; the optimal concentration of fetal bovine serum in the culture medium used for diluting interferon products—2–5%. The instrumental procedure is preferred for reporting the results of interferon antiviral activity determination, because it is up-to-date, reliable, accurate and time-efficient.

Authenticity evaluation of proteins obtained with recombinant DNA technology is an important step in confirming efficacy and safety of the drugs based on them. One of the main ways to assess the authenticity is to compare molecular structure of the test and standard samples using the peptide mapping method with chromatographic separation of the products obtained by enzymatic degradation. Proper selection of a standard reference sample is essential in order to achieve reliable results. A standard sample of Interferon (CRS, Chemical Reference Substances) recommended by the European Agency for the Quality of Medicines for interferon alpha-2b substances containing N-terminal methionine is inappropriate, since the Interferon CRS sample doesn’t contain methionine. We present the results of development of qualification procedure for methionine form of Interferon alfa-2b industrial standard sample (ISS). The range of use for this ISS is authenticity confirmation for the methionine form of interferon alpha-2b substance using peptide mapping method with reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase HPLC). The quality assessment was performed for all the parameters specified by the manufacturer of this candidate substance at the initial stage of qualification procedure, due to changed application area, and changed package size. Further, 30 peptide cards of the ISS candidate substance were obtained after pre-trypsinolysis of the protein followed by validated HPLC method with proven repeatability. It was shown that the hydrolysis conditions, i.e., the choice of trypsin preparations, may significantly affect the peptide map profile. Therefore, a reference to specific manufacturer and the catalog number of the product should be provided in description of application conditions for the ISS proposed. A set of eight reference peaks (peaks of comparison) has been justified, as based on evaluation of peptide maps and results of high-resolution mass spectrometry. The peak with maximally stable yield and intensity was selected as the main peak with an established absolute retention time. Two peaks with relative retention times were chosen as essential peaks for evaluation, i.e., the 1st peak containing N-terminal methionine, and the 2nd peak of highest molecular weight with an established amino acid sequence covering 11% of the studied interferon molecule. We have also qualified ISS parameters expressed as absolute (minimum for one reference peak), and relative (for the remaining reference peaks) retention time periods. Authenticity of the ISS candidate was further confirmed by the peptide mapping method, as compared with interferon CRS reference standard. Their peak patterns proved to be near-similar, except of a peak with eluted peptide containing N-terminal methionine as revealed by high-resolution mass spectrometry

Разработана методика количественного определения фенола в биологических лекарственных препаратах методом газожидкостной хроматографии. Оптимальные условия хроматографирования были подобраны для колонки DB-WAX (размер 30 м  0,25 мм  0,25 мкм) фирмы Agilent Technologies; температура инжектора 250 °C; деление потока 40:1; объем пробы 0,5 мкл; газ-носитель гелий; режим — постоянное давление; скорость потока 1,4 мл/мин; температурный профиль печи: начальная температура 160 °C, выдержка 3 мин, градиент 40 °C/мин до температуры 200 °C выдержка 0,6 мин, градиент 40 °C до температуры 220 °C; время анализа 7,133 мин; температура детектора 250 °C. Методика валидирована, аналитическая область методики установлена в диапазоне концентраций от 1 до 5 мг/мл фенола; подтверждены правильность и специфичность методики, оценена прецизионность. Полученные результаты позволяют рассматривать данную методику в качестве альтернативной для количественного определения фенола в биологических лекарственных препаратах.

Проведена оценка взаимозаменяемости коагулометрических методик определения активности рекомбинантного фактора свертывания крови rFVIIa. На основании однофакторного дисперсионного анализа и сравнения метрологических характеристик методик сделан вывод о сопоставимости результатов, получаемых при воспроизведении методики Европейской фармакопеи и методики АО «Генериум», а также их взаимозаменяемости. Показана возможность использования одной методики для подтверждения соответствия препарата нормам, установленным с применением другой методики. Для внедрения в отечественную фармакопейную практику выбрана методика фирмы, требующая меньших экономических затрат.

Представлены данные об актуальных направлениях разработки рекомбинантных факторов свертывания крови (РФСК). Показано, что основными направлениями создания новых модификаций РФСК, отличных по структуре и составу от эндогенных факторов свертывания крови с сохранением свойств активности, являются направления, позволяющие получить менее иммуногенные препараты со сниженной способностью индукции нейтрализующих антител (ингибиторов) и пролонгации терапевтического эффекта в результате повышения порога инактивации.

Представлены материалы по аттестации и изучению стабильности впервые разработанного отечественного стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности, применяемого для оценки стабильности и приемлемости результатов испытания. По результатам проведенных исследований аттестованные значения антикомплементарной активности отрицательного контроля стандартного образца находятся в интервале от 37,9 до 45,1 %, положительного контроля — в интервале от 73,6 до 82,8 % (с доверительной вероятностью 0,95). На основании материалов по изучению стабильности обоснован срок годности 1,5 года. Внедрение аттестованного стандартного образца в фармацевтический анализ лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения при проведении экспертизы и контроля качества в рамках государственных заданий, а также с целью подтверждения соответствия требованиям нормативной документации позволит обеспечить достоверность определения антикомплементарных свойств.

Проведены исследования по определению антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека в различных формах выпуска. Определены оптимальные условия получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности. Впервые разработан отечественный стандартный образец иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности, который планируется внедрить в практику для проведения оценки качества препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения по показателю «Антикомплементарная активность». Внедрение стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности позволит повысить достоверность оценки производственных серий препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения.

Presents information on 1st series of branch standard sample to characterization the quality of the candidate of branch standard sample tested for performance evaluation: specific activity of authenticity, a description of sterility, presence of mycoplasma, loss on drying, pH, filling accuracy, the residual oxygen content in the vials. Attested feature of the new series of the standard sample is a specific activity, because the purpose of the of branch reference standard activity live Rubella vaccine is the suitability of the results of determining the specific activity of the Rubella virus in vaccines. Indicator specific activity of the candidate in the of branch reference standard was assessed by interlaboratory studies compared to current 1st standard sample of the enterprise and 1st International Reference Reagent For Rubella (Live) NIBSC-91/688. Certified value of the index is set «Specific activity of branch reference standard activity for rubella (4,63±0,50) lgCCE 50 /0,5 ml. Shelf-life stated by using test accelerated the degradation is not less than at minus 20°C.