该研究对6株贝莱斯芽孢杆菌分离株进行测序鉴定、药敏试验与抑菌试验.结果表明:所分离的6株菌16S rDNA序列与贝莱斯芽孢杆菌处于同一遗传进化树分支,对选定的7种抗菌药物均敏感.应用指示菌进行抑菌试验,6株菌及其代谢产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑菌作用,抑菌作用从强到弱依次是:贝莱斯芽孢杆菌菌液、上清液和菌液滤液.

为了探讨复合植物提取物对断奶仔猪生长性能、腹泻率及血清指标的影响,试验选用30头、30日龄的断奶仔猪,随机分为2组,每组3个重复,每个重复5头.对照组饲喂基础日粮,试验组日粮中添加0.2％复合植物提取物,试验期为28 d.结果表明:与对照组相比,试验组平均日采食量和平均日增重有所提高(P＞0.05),腹泻率显著下降(P＜0.05),试验组极显著提高了总超氧化物歧化酶含量(P＜0.01),丙二醛含量有所降低(P＞0.05),血清D-乳酸、脂多糖、总蛋白、球蛋白和白蛋白含量差异均不显著(P＞0.05).表明该复合植物提取物可改善断奶仔猪的生产性能,降低腹泻率,此外,还可提高机体清除自由基的能力和机体免疫力.

在细菌分离鉴定的研究过程中,发现了 1株具有抑菌活性的芽胞杆菌,命名为B901.经16SrRNA测序以及同源性比较,鉴定其为高山芽胞杆菌(Bacillus altitudinis).对该菌进行生物学特性分析、抑菌试验和安全性试验.结果表明:B901菌株对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑菌活性,B901抑菌产物产生较快,培养菌液pH值维持在5.6左右时抑菌活性维持在较高水平;提取的胞外多糖粗产物对6种指示菌均有较为明显的抑菌作用;B901对所选择的7种常用的代表性药物均在敏感水平以上,表明高山芽胞杆菌B901不具有对常用抗菌药的抗药性;用B901饲喂BALB/c小鼠,试验期间小鼠食欲明显提高,粪便正常,无死亡、发病情况,表明服高山芽胞杆菌B901对小鼠无致病性.研究表明,高山芽胞杆菌B901株可作为益生素候选优良菌株,在绿色饲用添加剂领域中具有良好的开发潜力.

文章旨在从15种植物精油和6种有机酸中筛选出对金黄葡萄球菌和乙型溶血性链球菌抑菌效果最好的精油和酸,通过正交试验筛选出最佳复合精油,并研究其与有机酸复合的协同作用.结果表明,肉桂醛、牛至油和甲酸对金黄葡萄球菌和溶血性链球菌的抑菌效果最好,其中肉桂醛和牛至油对金黄葡萄球菌和溶血性链球菌的最小抑菌浓度分别为0.3125和0.625?mg/mL;肉桂醛与牛至油最佳组合为2:1,其对金黄葡萄球菌和溶血性链球菌最小抑菌浓度分别为0.078125和0.3125?mg/mL;复合精油与甲酸复合提高了整体抑菌效果.

本实验室从不同来源分离鉴定16株枯草芽孢杆菌,应用滤纸片方法进行抑菌强度的试验比较.试验分析结果表明:枯草芽孢杆菌菌株抑菌强度不同,从16株中比较筛选出4株抑菌性较强的枯草芽孢杆菌.芽孢杆菌的抑菌作用强度主要取决于产生抗菌肽的性质和产生量.本试验比较筛选出的4株枯草芽孢杆菌所产生的抗菌肽的性质,如何优化培养条件、培养基筛选或OSMAC策略,提高抗菌肽的产生量等有待于进一步研究.

研究从不同环境中分离鉴定12种共21株芽孢杆菌,应用滤纸片法进行芽孢杆菌抑菌性的比较试验.结果 表明:枯草芽孢杆菌07菌株、枯草芽孢杆菌16菌株、贝莱斯芽孢杆菌02菌株和韦氏芽孢杆菌A菌株对经黄色葡萄球菌抑菌强度达到"++++",对大肠杆菌的抑菌强度达到"++"以上.芽孢杆菌sp.菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌强度达到"+++".研究表明,芽孢杆菌同一菌种的不同菌株抑菌强度不同;不同菌种之间的抑菌强度差别明显,且对大肠杆菌的抑菌强度尤为突出.

广东省某规模猪场保育猪突然发生散发性死亡,为了探究其死亡原因,通过流行病学调查、猪群临床表现和病猪病理变化作出初步诊断后,对可疑病毒进行实验室检测,同时进行细菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、血清型鉴定和药敏试验.结果 显示,未检测到相关病毒,另外分离到一株革兰阴性短杆菌,在麦康凯培养基和普通琼脂培养基上均不生长,在V因子血平板呈现白色半透明细小露珠状菌落,具反光特性,不溶血;16S rRNA基因序列分析表明,分离菌株与副猪嗜血杆菌处于同一分支,同源性＞99％,综合血清型鉴定结果,判定分离菌为血清5型副猪嗜血杆菌;药敏结果显示该菌对头孢拉定、氨苄西林等12种抗生素敏感.本试验从病猪中分离到1株血清5型HPS,并根据药敏试验结果进行治疗,取得了良好的治疗效果.

为探讨microRNA-124-3p(miR-124-3P)对Th17细胞体外分化的影响,本研究通过密度梯度离心获取小鼠脾脏单淋巴细胞悬液,运用免疫磁珠法分选幼稚T细胞,然后用腺病毒表达载体转染幼稚T细胞,介导miR-124-3P过表达和抑制表达,并设空白对照组,加入Th17细胞分化相关细胞因子,诱导幼稚T细胞向Th17细胞方向极化,运用流式细胞术检测极化后的Th17细胞占比,并用ELISA方法检测细胞培养上清中白细胞介素-17A (IL-17A)浓度.结果 表明免疫磁珠法纯化幼稚T细胞纯度＞90％;miR-124-3P过表达腺病毒载体转染幼稚T细胞,可显著提高miR-124-3P的表达量(P＜0.05);流式细胞术和ELISA检测结果均表明,相比较空白对照组,过表达miR-124-3p可显著抑制Th17细胞体外分化,而抑制miR-124-3P表达可显著促进Th17细胞体外分化.研究表明,miR-124-3p对Th17细胞体外分化具有重要调控作用.

为确诊广东省江门市某规模化猪场保育仔猪发生脑膜炎死亡的病因,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、溶血性观察、生化鉴定、小鼠毒力试验和药敏试验、16S rRNA及M蛋白(SzP)基因序列分析进行鉴定.结果:从发病猪脑顶叶分离到1株致病菌,命名为SEZ20180618,分离菌在鲜血平板上生长出微隆起、圆滑湿润的小菌落,呈β溶血,革兰染色阳性、呈链状排列的球菌;16S rRNA基因序列分析显示,分离菌与马链球菌兽疫亚种处于同一分支,同源性在97％以上;SzP氨基酸序列与马链球菌兽疫亚种CT株、Cxy012株、SH00166株等参考菌株的相应序列同源性为100％.分离菌株SEZ20180618对BALB/c小鼠具有较强的毒力,对BALB/c小鼠的半数致死量为1.54× 106 CFU;分离菌对阿莫西林、青霉素、庆大霉素等14种临床常用抗菌药物均敏感,对阿米卡星和复方新诺明2种药物中度敏感.

试验旨在研究短小芽孢杆菌B102的分离鉴定、抑菌活性剂及安全性.在细菌分离培养过程中,发现1种具有抑菌活性的革兰氏阳性芽孢杆菌,命名为B102菌株.在此基础上,提取B102菌体基因组DNA,进行16S rRNA PCR扩增、测序,进行序列同源性比较,建立遗传发育树.应用常规的牛津杯法、平皿药敏试纸片扩散法、小鼠饲喂试验等测定B102的生长曲线、pH值、抑菌谱及B102菌株对常规药物的抗药性和安全性等.结果 表明,B102菌株为短小芽孢杆菌B102(Bacillus punmilus B102),对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑菌活性,且具有耐酸性生长的特性;B102抑菌产物产生较快,培养菌液pH值约5.6时,抑菌活性维持在较高的水平;胞外多糖提取物对6种指示菌均有较明显的抑菌作用;B102对一些常用抗菌药不具有抗药性;口服菌液对小白鼠无致病性,安全性高.研究表明,试验分离鉴定的短小芽孢杆菌B102具有优良的抗菌特性和生长特性,对常规药物无耐药性且安全可靠.

为研究microRNA-124-3p (miR-124-3p)对H1N1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)感染小鼠所致肺损伤的调控作用,本试验构建miR-124-3p腺病毒表达载体,通过小鼠尾部静脉注射法构建miR-124-3p差异表达小鼠模型,试验分3组:过表达组、抑制组和对照组.48 h后,各组小鼠鼻腔接种H1N1亚型SIV,每只105 EID50(50 μL).连续观察14 d,计算小鼠平均体重变化率、观察病理切片并测定相关炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6mRNA相对表达量.结果 显示,已成功将pre-miR序列及其sponge序列插入腺病毒的穿梭质粒,并将其共转染293A细胞.实时荧光定量PCR检测证实,与对照组相比,过表达组和抑制组小鼠黑色素瘤细胞miR-124-3p表达水平分别极显著升高(P＜0.01)和显著降低(P＜0.05),表明成功构建腺病毒表达载体.过表达组、抑制组和对照组小鼠体重变化率分别为-5.5％、-12.4％和-8.6％.抑制组和对照组均可见肺泡壁增厚,其间有多量淋巴细胞浸润,部分肺泡内出现纤维蛋白渗出,且抑制组病理变化更为严重,肺泡中还有大量的红细胞浸润;而过表达组仅有少量的淋巴细胞浸润,肺脏组织较正常.与对照组相比,过表达组检测的炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6mRNA表达水平均显著降低(P＜0.05);抑制组炎症相关炎症因子mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05).本试验结果表明,miR-124-3p对H1N1亚型SIV感染小鼠所致的肺脏炎症因子的表达具有抑制作用,同时能减轻肺脏病理损伤.

为了解广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株ORF5基因遗传变异情况,采用RT-PCR对2018年采自广东部分地区疑似患有PRRS的猪肺组织样品进行PRRSV ORF5基因扩增以及克隆测序,并进行生物信息学分析.结果表明,成功扩增出18株PRRSV流行毒株的ORF5基因片段.ORF5基因序列分析表明,18株PRRSV流行毒株ORF5基因核苷酸同源性为83.7％～99.8％,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性为62.1％～99.8％.基于ORF5基因的遗传进化树分析表明,18株PRRSV流行株均为美洲型毒株.其中,10株与以JXA1为代表的高致病性毒株亲缘较近,2株与新型高致病性毒株FZ16A相似;1株与以NT1为代表的疫苗返强毒株亲缘较近,1株与以R98为代表的疫苗毒株亲缘性较近,4株与广东新报道的GM2和QYYZ毒株亲缘性较近.DNA推导氨基酸序列分析表明,18株流行株的氨基酸序列与国内已报道的代表株相比发生不同程度的变异,GP5抗原表位上存在着差异.研究结果揭示了广东地区PRRSV有新型强毒株、重组毒株以及疫苗返强毒株的流行,提示养殖者谨慎、合理使用疫苗,防止疫苗毒株返强和毒株重组,为该地区防控PRRS提供参考.

本研究从广东省某猪场采集37份疑似猪流感症状的猪鼻拭子样品,接种于9日龄SPF鸡胚并收集尿囊液,通过血凝试验、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定,分离得到一株猪流感病毒,经RT-PCR分别扩增8个基因片段,进行基因测序及序列分析,与GenBank收录的参考毒株比对并构建进化树.结果 显示,分离毒株为H1N1亚型猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/2/2018(H1N1).遗传进化分析显示,分离株8个片段的核酸序列与A/s wine/ Guangdong/ L3/2009(H1N1)对应序列的同源性均达99％以上,与经典型H1N1亚型猪流感病毒处于同一分支.分离毒株HA的裂解位点为PSIQSR↓ GL,符合低致病性流感病毒分子特征.HA基因受体位点为190D、225G和226Q,表明本毒株既可以结合SAα-2,6-Gal型人类流感病毒SA受体,也有结合SAα-2,3-Gal型禽类流感病毒SA受体的可能,在28、40、104、304、498、557位氨基酸处有6个潜在糖基化位点;NA蛋白在50、58、63、68、98、146、235位氨基酸处有6个潜在糖基化位点,NA蛋白氨基酸序列活性中心位点为119E、199D、223I、275H、293R、295N,氨基酸分析位点未出现突变,表明本分离株对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性较高,但在M2蛋白中,31位氨基酸由敏感型的(S)突变为抗药的(N),提示可能对金刚烷胺类药物产生耐药性.开展猪流感病毒分离鉴定与遗传进化分析将为广东地区的猪流感流行和变异情况提供重要信息.

为了分析H1N1猪流感病毒(SIV)介导小鼠mmu-miRNA-206-3p(mmu-miR-206-3p)下调及其对纤连蛋白1(FN1)表达过程的影响,试验选用10只6周龄雌性SPF级Balb/c小鼠建立感染H1N1SIV小鼠模型,并将小鼠分为对照组和攻毒组,对照组用无病毒的尿囊液滴鼻,攻毒组用病毒尿囊液滴鼻,观察并记录小鼠的表现,利用RT-qPCR、Western-blot方法检测mmu-miR-206-3p、FN1和纤连蛋白1基因(Fn1)的变化.结果表明:感染H1N1 SIV 48 h后,对照组小鼠无异常表现,攻毒组小鼠精神萎靡,扎堆,食欲减退,被毛逆立.与对照组相比,12h后攻毒组mmu-miR-206-3p相对表达量下降,FN1相对表达量升高,Fn1相对表达量变化不显著.说明H1N1SIV可抑制mmu-miR-206-3p表达,减少mmu-miR-206-3p对Fn1翻译的抑制,进而导致FN1的相对表达量升高.

为筛选2型猪链球菌疫苗的候选菌株,试验采用PCR技术对59株猪链球菌2型(SS2)广东分离株的菌毛相关基因进行扩增,从中筛选出含有多种菌毛毒力因子、毒力强、免疫原性最佳的毒株.结果表明:从分离菌株中筛选到2株包含srtBCD基因簇的猪链球菌2型,可用于研制免疫原性较好的疫苗.

为了解9型猪链球菌广东分离株毒力因子基因型、基因变异和进化情况,本试验采集发病猪脑脊液、关节液、脾脏、肝脏、淋巴结进行细菌分离培养和生化鉴定,采用PCR方法鉴定其血清型及部分毒力基因,对cps9D、gdh、gapdh与or f2基因进行序列测定和分析,并构建系统发育树.结果显示,分离菌镜检为革兰氏阳性链状球菌,在鲜血琼脂平板中呈β溶血,可发酵大多数糖类,能成功扩增cps9D基因,含重要的保守基因gdh及毒力基因gapdh和off2,表明分离菌株为9型猪链球菌.分离菌株cps9D、gdh、gapdh、orf2基因核苷酸序列与GenBank上国内外参考菌株的同源性分别为95.9％～100.0％、98.6％～99.8％、98.7％～99.6％和95.5％～99.9％,说明分离菌株与国内外其他9型猪链球菌毒株核苷酸同源性都较高,且与国内外的流行毒株基本一致,未发生太大的变异.系统发育树表明,分离株与国内外来源不同的猪链球菌分离株同源性高,亲缘关系密切.

为了研究广东省某猪场猪瘟(CSF)、猪伪狂犬(PR)、猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)、猪圆环病毒病(PCVDs)、猪O型口蹄疫(FMDO)和猪细小病毒病(PPI)的免疫情况和感染状态,试验采用酶联免疫吸附测定试剂盒分别对2,3,4月龄猪随机采集的40份血清进行6种猪病毒性疾病抗体检测.结果表明:该猪场的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)野毒、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪O型口蹄疫病毒(FMDVO)、猪细小病毒(PPV)抗体总阳性率分别是57.5％、2.5％、0、82.5％、10.0％、7.5％;在2,3,4月龄时,对6种病毒性疾病血清抗体水平的检测结果与总体阳性率情况一致.说明该猪场猪只未受PRV野毒感染,猪群整体的PCV-2疫苗免疫良好,CSFV、PRRSV、FMDVO和PPV抗体水平低下,受野毒感染压力较大,应注意饲养管理,加强免疫,降低患病风险.

虚拟仿真实验教学是高等教育信息化和实验教学示范中心建设的重要组成,是教育信息化结合学科特点与教学内容深度融合的产物.地方院校应用型学科虚拟仿真实验中心建设要坚持"立足地方、服务地方"的办学宗旨,以全面提高学生创新精神和综合实践能力为目的,体现"以学生为中心"的实验教学改革理念,通过多元化组建虚拟仿真实验教学管理团队、优化整合实验教学资源开发虚拟仿真实验、校企合作协同创新等方式,分层次、分阶段有规划的推进中心建设工作.动物医学虚拟仿真实验教学中心的建设将有效提高实验教学质量,促进实践教学培养模式改革和创新人才的培养,为实验教学示范中心的建设提供有效补充和延伸.

Two dominant bacterial strains,designated as T4SH and G6C,were isolated from the diseased Nile tilapia cultured in two different aquaculture farms of Foshan city,Guangdong Province.They were identified to be Streptococcus agalactiae based on the morphology observation,16S rRNA gene sequence analysis and biochemical tests.The two strains were gram-positive and β-hemolytic.The two tested swains shared the same biochemical characteristics,and the similarities of their 16S rRNA gene sequences were above 99％ with those of S.agalactiae published in NCBI.Antibiotic sensitivity showed that the two strains were sensitive to penicillins,cephalosporins,forest amines,macrocyclic lipids,tetracyclines,chloramphenicol,and aminoglycosides,and resist to aminoglycosides.However,there were differences in sensitivity for sulfonamides and quinolones.Based on these results obtained,it is concluded that S.agalactiae may be the major pathogen causing the disease in tilapia in the two aquaculture farms.

In 2012,a strain of swine influenza virus( SIV) was isolated from a pig farm in Guangdong province,and identified as H1N1 subtype SIV using hemagglutination( HA) assay and hemagglutination inhibition( HI) assay. This viral strain was named as A / swine / GD / 2 /12( H1N1). Eight gene fragments were amplified with reverse transcription-polymerase chain reaction( RT- PCR) and sequenced. Phy- logenetic analysis showed that the virus might be a rearrangement virus( human / avian / swine). The analysis of HA receptor sites showed that this virus could recognize both α2,6 Gal and α2,3 Gal SAs. NS and PB2 protein loci analysis showed that these strains had the characteris- tics of low pathogenicity. The pathogenicity experiments in mice further confirmed that the viral strain could cause mice to produce less exer- cises,poor appetite and weight loss,but did not cause coughing and death.