自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫应答进而导致自体组织损害的一类疾病,其确切的病因和致病机制至今未阐明.近年来研究发现,共刺激分子肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,TNFRSF4,又称 OX40)以及肿瘤坏死因子配体超家族成员 4(tumor necrosis factor ligand superfamily member 4,TN-FSF4,又称OX40L)对T细胞的增殖以及功能发挥有重要意义,可作为T细胞介导疾病的治疗靶点,是领域研究的热点.文章介绍了 OX40/OX40L和T细胞亚群滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cell,Tfh)的生物学特性,以及OX40/OX40L信号对Tfh分化和生物学功能的促进作用,进一步讨论OX40/OX40L信号通过作用于Tfh促进自身免疫性疾病发生发展的机制,以及该分子作为潜在治疗靶点的应用价值.
多能性相关基因2(developmental pluripotency-associated gene 2,DPPA2)在多能性细胞和某些癌组织中特异表达,并有望成为一些恶性肿瘤的特异性免疫治疗靶点.课题组拟研究DPPA2沉默对胃癌细胞SGC-7901生物学行为的影响,为胃癌的治疗提供实验依据.构建DPPA2沉默pGenesil-2/DPPA2重组载体并导入SGC-7901细胞,MTT实验、划痕实验、FACS等研究DPPA2沉默对肿瘤细胞生物学行为的影响,并建立小鼠肾被膜下移植侵袭模型研究肿瘤细胞的在体侵袭能力.结果显示,沉默DPPA2 后,DPPA2、NANOG同源盒(NANOG homeobox,NANOG)和八聚体结合转录因子4(octamer binding transcription factor 4,OCT4)mRNA 及蛋白表达量在 SGC-7901 细胞中显著降低(均 P＜0.01);SGC-7901细胞的增殖、迁移能力减弱,DPPA2沉默后肿瘤细胞停滞于G0/G1期,且能够促进SGC-7901细胞的凋亡;小鼠肾被膜下移植侵袭模型表明,DPPA2沉默可抑制肿瘤细胞对正常组织的局部浸润,减少肿瘤细胞对肾皮质的侵袭.结果显示,DPPA2沉默后胃癌细胞SGC-7901的生物学行为明显被抑制,表明DPPA2在促进胃癌发生、发展过程中发挥着重要的作用,沉默DPPA2可抑制NANOG、OCT4的表达,抑制肿瘤细胞对正常组织的局部浸润,达到影响胃癌细胞生物学行为的目的.
为了探讨 CXC 趋化因子配体 8(CXC motif chemokine ligand 8,CXCL8)/CXC 趋化因子受体 1(CXC chemokine recep-tor 1,CXCR1)对体外人食管癌细胞ECA109增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,并观察其与叉头框家族S1(forkhead box S1,FOXS1)蛋白的关系,将人食管癌细胞ECA109转染后分为对照组、CXCL8组、CXCL8+Con-siRNA组和CXCL8+CXCR1-siRNA组.CXCL8终浓度为10 μg/mL.采用MTT试验检测细胞增殖情况,克隆试验检测克隆形成情况,流式细胞仪进行细胞凋亡测试,侵袭与迁移能力由Transwell试验和划痕试验测定,Western blotting检测细胞中CXCR1、FOXS1蛋白表达水平.结果显示,与对照组比较,CXCL8能够显著促进ECA109细胞增殖、克隆、侵袭和迁移(P＜0.05),而干扰CXCR1后这些作用被阻断(P＜0.05).CXCL8组、CXCL8+Con-siRNA组细胞凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),CXCL8+CXCR1-siRNA组细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).与对照组比较,CXCL8能够上调食管癌细胞CXCR1和FOXS1蛋白表达(P＜0.05),而干扰CXCR1后CXCR1和FOXS1蛋白表达均出现显著下降(P＜0.05).该研究提示,CXCL8/CXCR1可促进食管癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用可能与驱动FOXS1蛋白有关.
固有免疫细胞具有类似于适应性免疫细胞的免疫记忆性特征,称之为受训免疫或训练免疫(trained immunity).越来越多的研究表明,受训免疫有助于机体抑制甚至清除外来致病性病原体感染,包括结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis).传统结核疫苗设计策略主要是诱导结核特异性的适应性免疫反应,以卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)为代表的受训免疫概念的提出为结核疫苗的设计和研发提供了新的策略.文章总结了受训免疫在M.tuberculosis感染过程中的作用以及靶向诱导受训免疫作为新型抗结核疫苗研发策略的可能性及挑战.
内皮-间质转化(endothelial to mesenchymal transition,EndMT)是内皮细胞在多种刺激因素作用下向间质细胞转化的过程,近年来研究发现EndMT在心血管疾病、器官纤维化和癌症等疾病的发生发展中扮演重要角色.炎症介质是EndMT的关键诱导因子,文章从以下2个方面对EndMT与炎症介质的关系展开综述:(1)EndMT的主要特点概述;(2)炎性因子、炎症通路和炎症细胞等调控EndMT的机制及其在疾病发生发展中的作用.目前EndMT已成为学术界研究的重点和热点,该综述旨在进一步探讨炎症介质在EndMT中的作用及为针对EndMT的靶向药物开发提供参考.
肺癌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的物理性质主要包括固体压力、流体压力(interstitial flow pessure,IFP)和刚度,文章主要介绍三者对肺癌发生发展和肿瘤免疫微环境的影响.目前,已有大量研究表明与固体压力密切相关的成纤维细胞通过多条信号通路对肺癌的发生和肺癌免疫微环境造成重要影响.IFP能够通过小凹蛋白1和ERK1/2信号通路对肺癌的浸润侵袭造成影响并且可能通过TGF-β介导乳腺癌的免疫耐受,从而对乳腺癌肺转移产生影响.有多个基因和分子如Ras相关结构域家族蛋白1亚型A、整合素α11β1等介导肺癌ECM刚度的增加,这与肺癌细胞侵袭能力呈正相关关系;此外,基质刚度的变化还会影响肺癌细胞表面免疫检查点分子如PD-L1的表达,提示刚度可能对肺癌进展和免疫微环境产生影响.而针对固体压力,IFP和刚度的研究可能对肺癌发展的机制,肺癌的免疫治疗和免疫治疗耐药做出进一步解释.
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以侵蚀性关节炎为主要特征的自身免疫性疾病,发病机制复杂,免疫细胞、滑膜细胞和破骨细胞均参与其发生、发展.Notch信号通路是一条存在于所有多细胞生物中高度保守的细胞内信号转导通路,在RA患者细胞中存在异常激活,与RA的发生发展密切相关.该文主要分析Notch信号通路在免疫细胞、滑膜细胞及破骨细胞增殖、分化、生存及效应过程中的作用,介绍Notch信号通路介导RA的可能途径,有利于从Notch信号通路角度认识RA的发病机制,为该病的临床治疗提供新的思路.
研究从大规模单细胞转录组测序数据出发,获得结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中肠道内分泌细胞(enteroendocrine cell,EEC)的单细胞转录组图谱;对此转录组测序数据作差异表达、功能以及拟时序分析,结果提示肿瘤微环境中EEC发育与激素合成/分泌相关功能不全有关;结合肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和肿瘤药敏多组学数据库(Genomics of Drug Sensitivity in Cancer,GDSC)中CRC的bulk转录组测序数据、随访信息和药物测试数据,筛选出对CRC患者生存具有积极影响的生物学标志物——胰高血糖素(glucagon,GCG)基因;利用肿瘤细胞系药物测试数据探究了GCG基因在CRC治疗中的潜在应用价值.该研究为CRC的治疗提供了新的思路.
为研究miR-9-5p靶向沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator factor 2-related enzyme 1,SIRT1)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡的影响及相关机制,对小鼠的原代软骨细胞进行分离、培养并构建OA细胞模型(加入IL-1β)和OA小鼠模型,检测miR-9-5p的表达、Caspase-3活性、细胞活性及凋亡.确定miR-9-5p和SIRT1存在靶向关系后检测SIRT1活性和上述指标.用番红O-固绿对OA小鼠组织进行染色并分析,在OA小鼠模型中再次验证miR-9-5p通过抑制SIRT1对软骨细胞凋亡的影响.结果显示,miR-9-5p mRNA在OA组织及IL-1β处理的软骨细胞中表达显著升高(P＜0.001),miR-9-5p可抑制OA软骨细胞活性(P＜0.001)并促进其凋亡(P＜0.01).miR-9-5p靶向作用于SIRT1,并通过抑制SIRT1抑制OA软骨细胞活性(P＜0.001),促进其凋亡(P＜0.05).在OA动物模型的验证中得到相同的结果.该研究提示,miR-9-5p可通过靶向SIRT1抑制OA软骨细胞活性,促进OA软骨细胞凋亡,参与OA的发生和发展.
免疫系统包括固有免疫和适应性免疫,固有免疫是生物体在长期的种系发育和进化过程中逐渐形成的一系列防卫机制.固有免疫细胞通过PRR识别内源性和外源性危险信号分子,PRR包括TLR、NOD样受体(NOD-like receptor,NLR)和C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CLR)等,其中NLR中的NLRP3炎症小体作为炎症反应的核心,与包括血液系统肿瘤在内的许多恶性肿瘤的发生与发展联系密切.该文就NLRP3炎症小体与淋巴瘤、白血病、骨髓增生异常综合征和多发性骨髓瘤的关系的最新研究进展作一综述.
为研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,HU-MSC)移植对局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)小鼠肾脏损伤的修复作用,并探索在该修复过程中TGF-β1/Smad信号通路的表达情况,将8周龄雄性BALB/c小鼠随机分为FSGS组、FSGS+HU-MSC组和对照组,FSGS组和FSGS+HU-MSC组在试验第1天以10.5 mg/kg体质量的剂量一次性给与尾静脉注射阿霉素;FSGS+HU-MSC组在试验第33、40、47、54、61天给与尾静脉注射HU-MSC悬液(2×106个细胞),FSGS组在相同时间给与尾静脉注射等量的生理盐水;对照组为正常小鼠,不给与任何干预措施.于第7、14、28、54、68天分别测定小鼠体质量和尿白蛋白;于第28、68天处死小鼠,眼眶取血并检测其血清肌酐、尿素氮水平,取肾脏标本并观察其肾脏病理表现,采用免疫组化法检测TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达水平.结果显示,FSGS+HU-MSC组、FSGS组与对照组比较,小鼠体质量显著减少(P＜0.001),尿白蛋白、血肌酐、尿素氮水平均显著升高(P＜0.01);而FSGS+HU-MSC组较FSGS组体质量显著增加(P＜0.01),尿白蛋白、血肌酐、尿素氮水平均显著降低(P＜0.01).FSGS+HU-MSC组与FSGS组比较,肾脏病理损伤程度明显减轻.免疫组化结果显示,FSGS+HU-MSC组和FSGS组较对照组TGF-β1、Smad3表达水平显著升高(P＜0.001),Smad7表达水平显著降低(P＜0.001);而FSGS+HU-MSC与FSGS组比较,TGF-β1和Smad3表达水平显著降低(P＜0.001),Smad7表达水平显著升高(P＜0.001).该研究提示,HU-MSC对阿霉素诱导的FSGS有修复作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路有关.
为探讨长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)淋巴增强因子 1 反义 RNA 1(lymphatic enhancer factor 1 antisense RNA 1,LEF1-AS1)靶向miR-212-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡和炎性因子分泌的影响,采用qRT-PCR分析骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者软骨细胞中LEF1-AS1和miR-212-5p的表达.用10 ng/mL的IL-1β处理人正常软骨细胞建立体外OA细胞模型.运用FACS分析软骨细胞凋亡率;ELISA检测培养上清液中IL-6、TNF-α、IFN-γ水平;qRT-PCR检测LEF1-AS1和miR-212-5p表达水平.同时,将LEF1-AS1小干扰RNA、miR-212-5p模拟物转染软骨细胞,并检测抑制LEF1-AS1或过表达miR-212-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎性因子分泌的影响.qRT-PCR和双荧光素酶报告基因试验分析LEF1-AS1与miR-212-5p的靶向关系.结果显示,IL-1β处理显著增加软骨细胞的凋亡率(P＜0.05),增加IL-6、TNF-α 和 IFN-γ 的分泌量(P＜0.05),上调 LEF1-AS1 表达(P=0.000),下调miR-212-5p表达(P=0.000).抑制LEF1-AS1表达或过表达miR-212-5p可降低IL-1β诱导的软骨细胞的凋亡率(P＜0.05),抑制IL-6、TNF-α和IFN-γ的分泌量(P＜0.05).miR-212-5p是LEF1-AS1的靶基因.抑制miR-212-5p表达能够减弱抑制LEF1-AS1对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎性因子分泌的影响(P＜0.05).该研究提示,抑制lncRNA LEF1-AS1可通过上调miR-212-5p减少IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎性因子分泌.
滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)是辅助B细胞的主要CD4+T细胞亚群,其特点是表达转录因子B细胞淋巴瘤 6(B-cell lymphoma 6,Bcl-6)以及趋化因子受体 5(C-X-C chemokine receptor type 5,CXCR5)、诱导性共刺激分子(inducible co-stimulator,ICOS)、PD-1等表面分子和产生细胞因子IL-21.Tfh的分化是一个多步骤、多因素参与的过程.原发性干燥综合征(primary Sj?gren's syndrome,pSS)是一种以外分泌腺局灶性淋巴细胞浸润为特点的全身性自身免疫性疾病.越来越多的研究表明,Tfh参与pSS的发病过程,是pSS的潜在生物标志物,一些治疗pSS的药物可影响Tfh从而缓解病情.该文对近年来Tfh在pSS中的研究进展进行综述.
通过研究炎症小体激活与干燥综合征(Sj?gren's syndrome,SS)小鼠组织病理学改变和唾液流量等变化的关系,阐述炎症小体参与SS的作用机制.选用非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠作为SS模型,美国癌症研究所(Institute of Cancer Research,ICR)小鼠作为对照;检测和比较SS和对照小鼠唾液流量、颌下腺和肺脏组织病理学表现及炎症小体表达水平;分别注射LPS激活或者注射BAY_11-7082抑制NOD小鼠炎症小体通路,检测处理后小鼠唾液流量、颌下腺和肺脏组织病理学表现以及炎症小体通路分子表达变化.结果显示,与ICR小鼠相比,NOD小鼠唾液流量减少(P＜0.05),颌下腺有淋巴细胞浸润,肺部存在慢性病变,炎症小体通路活化;LPS注射进一步激活SS小鼠体内炎症小体后,唾液流量降低(P＜0.001),颌下腺和肺部炎性淋巴细胞浸润增多,血清中IL-1β和IL-18表达增加(均P＜0.05);BAY_11-7082抑制SS小鼠体内炎症小体通路后,唾液流量增加(P＜0.05),颌下腺和肺部炎性淋巴细胞浸润减少,血清IL-1β和IL-18表达显著降低(均P＜0.05).由此,SS小鼠炎症小体通路活化,激活炎症小体会加重小鼠的SS样症状,抑制炎症小体活化则减轻小鼠SS样症状.以上结果提示,炎症小体活化参与SS发病,靶向抑制是SS治疗的潜在方向.
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性非特异性炎性疾病,同时也是一种自身免疫性疾病,巨噬细胞作为固有免疫细胞在其中发挥至关重要的作用.Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)是Hippo信号通路的关键蛋白.之前有研究显示,YAP在肠上皮细胞中具有促进细胞增殖修复并减轻IBD的功能.但最近研究显示,巨噬细胞中YAP可通过促进M1型极化加重IBD,而YAP缺乏可导致M2型极化并减轻IBD.近年,关于巨噬细胞中YAP的研究层出不穷,但YAP在巨噬细胞中调控极化的机制尚不完全清楚.最近的研究发现,巨噬细胞中YAP可协同NF-κBp65激活NOD样受体家族含 pyrin 结构域蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)炎症小体,参与 M1 型巨噬细胞极化的促炎反应.该文对巨噬细胞中YAP协同NF-κBp65激活NLRP3炎症小体,促进M1型极化,加重IBD的研究进展以及巨噬细胞中YAP靶点的治疗前景予以综述.
肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一种以运动神经元(motor neuron,MN)变性为特征的、致死性的神经退行性疾病.神经炎症和免疫失衡被认为能够促进ALS的发生和发展.该文就近年来ALS免疫机制的研究进展作一综述.
为探讨IL-1β促进胶质母细胞瘤增殖的作用机制,采用ELISA和CCK8法检测IL-1β对IL-6产生和胶质母细胞瘤增殖的影响;Western blotting检测PI3K/AKT1/STAT3蛋白的活化及其在IL-1β诱导的IL-6产生和胶质母细胞瘤增殖中的作用;采用荧光素酶报告基因实验检测STAT3激活对IL-6基因启动子活性的影响.结果显示,IL-1β不仅能促进胶质母细胞瘤的增殖,而且能促进肿瘤细胞IL-6的产生.此外,IL-6中和抗体能显著抑制IL-1β诱导的胶质母细胞瘤增殖(P＜0.01).机制研究表明,IL-1β刺激可提高胶质母细胞瘤细胞AKT1和STAT3的磷酸化水平,抑制PI3K、AKT1和STAT3的表达也能降低IL-1β诱导的IL-6生成和胶质母细胞瘤增殖.PI3K/AKT1激活的STAT3能与IL-6启动子结合,诱导IL-6的基因转录.该研究提示,IL-1β通过PI3K/AKT1/STAT3信号通路激活介导IL-6分泌促进胶质母细胞瘤增殖.
为探讨野菊花的主要成分蒙花苷对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)诱导的炎症反应的作用,建立EV71体外感染试验模型.在用EV71感染Vero细胞前,用终浓度分别为3、10和30 μmol/L蒙花苷提前预处理各组细胞,应用MTT法检测细胞活力,应用ELISA检测细胞上清液中炎性因子IL-6、IL-1β、IL-8的分泌情况,应用qRT-PCR检测炎性因子IL-6、IL-1β、IL-8 mRNA的相对表达水平,评价蒙花苷的抗炎作用.应用Western blotting检测NF-κB p65的核转位,评价蒙花苷对NF-κB通路的影响.结果显示,与EV71组比较,10和30 μmol/L蒙花苷分别将IL-6的分泌水平降低了7.15和10.4pg/mL;IL-1β的分泌水平降低了3.00和5.15 pg/mL.30 μmol/L蒙花苷将IL-8的分泌水平降低了15.5 pg/mL.30 μmol/L蒙花苷能够显著降低EV71诱导的IL-6、IL-1β以及IL-8 mRNA的表达水平,分别降低了35.2倍、18.8倍和29.23倍.蒙花苷能够显著降低EV71诱导的NF-κBp65的核转位.该研究提示,蒙花苷可能是通过抑制NF-κB的激活发挥抗炎作用,此发现对临床药物研发有着重要的意义.
IL-22是IL-10细胞因子家族的成员之一,在炎症调节、屏障防御、稳态维持和组织修复中发挥着重要的作用.据悉,IL-22不仅可以改善多种因素诱发的肝纤维化,还对病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝炎和非酒精性脂肪性肝病等多种良性肝脏疾病具有保护和治疗作用,但在原发性肝癌中却可以促进肝癌细胞的增殖和存活.现将最近国内外有关IL-22在肝脏疾病中的研究进展作一综述.
为探究抗正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3)单抗对心肌缺血再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)小鼠炎症反应的影响,将30只小鼠随机分为3组(每组10只):假手术组、MI/R模型组和MI/R+PTX3单抗处理组.H-E染色检测小鼠心肌组织病理学改变;原位末端转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)技术检测小鼠心肌细胞凋亡情况;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测小鼠心肌组织中IL-17A和PTX3表达;ELISA检测小鼠外周血和心肌组织中过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)、TNF-a、IL-6 和 IL-1β 浓度;Western blotting 检测小鼠心肌组织中 IL-17A、IL-1β 和 PTX3 的表达;qRT-PCR 分析小鼠心肌组织中 IL-17A、巨噬细胞炎性蛋白 2(macrophage inflammatory protein 2,MIP-2)、IL-6、IL-1β和PTX3 mRNA的表达;FACS检测小鼠心肌组织中IL-17A水平.结果显示,与MI/R模型组相比,MI/R+PTX3单抗处理组小鼠心功能减弱,血清和心肌组织中MPO和cTNT释放增加,心肌细胞凋亡增加,TNF-α、IL-1β、IL-6水平增加,心肌组织中IL-17A、MIP-2、IL-6和IL-1βmRNA表达水平上调,PTX3 mRNA表达水平下调.另外,PTX3单抗上调心肌组织中IL-17A和IL-1β表达,下调PTX3表达.由此,PTX3单抗促进MI/R损伤小鼠心肌细胞凋亡和炎症反应程度,其潜在机制与激活IL-1β/IL-17A轴有关.
