The toxicity and side effects of chemotherapeutic drugs remain a crucial obstacle to the clinical treatment of hepatocellular carcinoma (HCC). Identifying combination therapy from Chinese herbs to enhance the sensitivity of tumors to chemotherapeutic drugs is of particular interest. Astragalus polysaccharide (APS), one of the natural active components in Astragalus membranaceus, has been reported to exhibit anti-tumor properties in diverse cancer cell lines. The aim of this study was to determine the effect of APS on Doxorubicin (Dox)-induced apoptosis in HCC and the underlying mechanism. The results showed that APS dose-dependently promoted Dox-induced apoptosis and enhanced endoplasmic reticulum (ER) stress. Additionally, APS decreased the mRNA level and protein stability of O-GlcNAc transferase (OGT), and increased the O-GlcNAcase (OGA) expression. Furthermore, OGT lentiviral transfection or PugNAc (OGA inhibitor) treatment reversed the ER stress and apoptosis induced by the combination of Dox and APS. A xenograft tumor mouse model confirmed that the combination of APS and Dox showed an advantage in inhibiting tumor growth in vivo. These findings suggested that APS promoted Dox-induced apoptosis in HCC cells through reducing the O-GlcNAcylation, which led to the exacerbation of ER stress and activation of apoptotic pathways.

目的 研究雪上一枝蒿多糖组分XP-10 在原发性肝癌肺转移的抑制效应及其作用机理,为雪上一枝蒿多糖肿瘤免疫疗法及南药植物资源合理开发提供科学依据.方法 构建H22 肝癌肺转移小鼠动物模型,随机分为病理模型组、XP-10 低剂量给药组(250 mg/kg)和XP-10 高剂量给药组(500 mg/kg),药物干预后,计数肝癌肺内转移灶数目;MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞的活力;流式细胞术检测脾淋巴细胞Th1(CD4+IFN-γ+)、Th17(CD4+IL-17A+)和Treg细胞(CD4+Foxp3+)表达水平.结果 XP-10 药物干预显著抑制肺转移灶数目(P＜0.01),提高荷瘤小鼠淋巴细胞的活力(P＜0.01);XP-10 低剂量(250 mg/kg)药物干预显著下调荷瘤小鼠CD4+Foxp3+调节性T细胞比例(P＜0.05),XP-10 药物干预对肝癌肺转移荷瘤小鼠淋巴细胞Th17 细胞比例和Th1 细胞无显著影响(P＞0.05).结论 雪上一枝蒿多糖组分XP-10 能够显著抑制原发性肝癌的肺转移,其抑制效应部分通过下调与机体免疫反应负性调节机制相关的Treg细胞,并促进T淋巴细胞增殖、增强抗肿瘤免疫的机制而实现.为中药雪上一枝蒿的多糖抗肿瘤免疫临床疗法提供了一定的现代科学依据.

目的 研究雪上一枝蒿多糖组分XP-10 体内外免疫调节作用及初步效应机制,为雪上一枝蒿多糖的应用和合理开发提供科学依据.方法 构建体外小鼠脾淋巴细胞模型,分别采用ConA、LPS和anti-CD3 抗体诱导脾淋巴细胞增殖,MTT法检测各组脾淋巴细胞的活力;ELISA法检测ConA诱导的脾淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-2 和IL-6 水平.构建环磷酰胺诱导的体内免疫抑制模型,测定XP-10 对模型小鼠免疫器官指数的影响;MTT法检测各组脾淋巴细胞的活力;流式细胞术检测各组脾淋巴细胞Treg细胞(CD4+Foxp3+)表达水平.结果 XP-10 具有丝裂原活性,显著促进ConA和LPS诱导淋巴细胞增殖,且呈现显著的浓度依赖性关系(P＜0.05).XP-10 在 250 μg/mL浓度下可促进anti-CD3 抗体诱导的淋巴细胞增殖.XP-10 药物干预显著促进细胞因子IFN-γ(P＜0.05)和IL-6(P＜0.05 或P＜0.01)水平,然而对IL-2 的产生无明显的影响(P＞0.01).XP-10 在 125 mg/kg剂量下能显著提高免疫抑制模型脾指数和胸腺指数(P＜0.05),提高免疫抑制模型小鼠脾淋巴细胞的增殖功能,下调Treg细胞(CD4+Foxp3+T细胞)比例(P＜0.05).结论 中药雪上一枝蒿多糖组分XP-10 在体内外均具有较好的免疫调节活性,其机制可能与促进细胞因子IFN-γ分泌和下调Treg细胞表达有关,其可能在抗肿瘤免疫辅助用药方面具有一定的应用前景.

目的 研究顺铂诱发药源性虚证性小鼠类固醇激素合成功能的改变.方法 72只雄性ICR小鼠分为对照组32只和顺铂组40只,顺铂组予10mg/kg顺铂腹腔注射,每周1次,共5次(d1、d8、d15、d22、d29).每次造模后1周各组取8只检测相应指标,以ELISA检测睾酮和皮质酮含量、RT-qPCR检测下丘脑、垂体、肾上腺和睾丸类固醇激素合成酶相关基因表达.Western Blot 检测 肾上腺 StAR、CYP11A1、CYP21A2、CYP11B1;睾丸 StAR、CYP11A1、CYP17A1、HSD3B2 蛋白表达.结果 ①顺铂给药4次(d28)后显著下降小鼠体重,胸腺与肾脏萎缩,脾肿大.②小鼠血清皮质酮在顺铂给药2次(d14)及4次(d28)显著上升,末次(d30)显著下降.血清睾酮含量在给药1次后(d7)明显上升,给药4次和末次(d28、d30)明显下降.③随顺铂累积肾上腺皮质束状带明亮细胞增多.④随顺铂累积,曲细精管改变、生精细胞紊乱加重,给药4次(d28)后曲细精管内改变显著,支持细胞减少,间质增厚,间质细胞水肿明显.⑤顺铂组肾上腺在给药1次(d7)后Cyp21a1基因表达和CYP11A1蛋白表达上调,但Cyp11b2基因表达下调;给药2次(d14)后Star、Cyp11a1、Cyp11b1、Cyp11b2和Cyp21a1基因表达均下调;给药3次(d21)Cyp11a1和Cyp21a1基因表达下调;给药4次(d28)Cyp11b1基因表达上调.⑥顺铂组睾丸在给药2次(d14)后Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd17b3和Ar基因表达均下调;给药3次(d21)Hsd3b2和Ar基因表达上调;给药4次(d28)Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b2、Hsd17b3和Ar基因表达均显著上调,StAR蛋白表达上调;末次给药(d30)Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b2、Hsd17b3和Ar基因表达均上调,StAR、CYP11A1 和 CYP17A1蛋白表达显著增强.⑦顺铂组下丘脑在给药2次(d14)GnRH基因表达增强,给药1次、4次和末次(d7、d28、d30)CRH基因表达均增强.⑧顺铂组垂体在给药1次(d7)Pou1f1基因表达上调而Fshb和Lhb基因表达均下调;给药4次(d28)Pomc基因表达上调.结论 顺铂可损害类固醇激素合成的肾上腺皮质轴与睾丸轴,尤其对睾丸各细胞的累积性损害可能是诱发肾精不足证的主要机制.

目的 探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响.方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合.流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋白(Cyclins)的表达.结果 单用α-常春藤皂苷或雷公藤红素均能抑制细胞增殖,且呈剂量依赖性;作用48 h后,当α-常春藤皂苷质量浓度为10.0μg/mL,雷公藤红素质量浓度为0.30 μg/mL时,CI值为0.24,协同效应最佳.在以上质量浓度条件下,协同组早期凋亡率高于其余3组(P＜0.05).α-常春藤皂苷组及协同组晚期凋亡率高于对照组(P＜0.05);总凋亡率以协同组最高且高于对照组(P＜0.05).雷公藤红素及协同组G0/G,期比例较对照组升高(P＜0.05);α-常春藤皂苷组S期比例较对照组升高(P＜0.05);协同组G1+S期总比例最高且高于对照组(P＜0.05).与对照组比较,各给药组Bax、Bcl-2及Bax/Bcl-2比值无明显变化(P＞0.05);协同组CDK2和CDK4蛋白表达降低(P＜0.05);雷公藤红素组和协同组Cyclin D1表达均升高(P＜0.05);各给药组Cyclin E1表达均升高(P＜0.05).结论 α-常春藤皂苷协同雷公藤红素抑制SMMC7721细胞增殖效应确切,该效应可能与诱导G0/G,期周期阻滞、G1+S期总比例增加有关,而Cyclin D1可能是参与其中的关键分子.

目的 观察预知子联合雷公藤红素对肝癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用及对核因子(NF)-κB通路的影响,并探讨其作用靶点.方法 皮下接种肝癌SMMC7721细胞建立荷瘤裸鼠模型,将裸鼠随机分为模型对照组、预知子提取物组、雷公藤红素组和联合组,将药物包载于壳聚糖/甘油磷酸钠温敏性凝胶系统,分别于分组后第1、6、11日经皮瘤内注射相应药物,共3次.每2日测量裸鼠体质量和瘤径,第16日称量瘤体及肝、脾、左肾脏器质量,计算瘤指数、抑瘤率及脏器指数;ELISA测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;HE染色观察瘤组织形态变化;Western blot检测瘤组织NF-κB通路相关蛋白表达.结果 与模型对照组比较,各给药组裸鼠体质量、去瘤体质量、瘤体积、瘤质量和瘤指数均呈下降趋势,其中以雷公藤红素组最为显著(P＜0.05),联合组瘤体积和瘤质量显著下降(P＜0.05),各给药组裸鼠肝和左肾质量及指数均显著下降(P＜0.05),预知子提取物组、雷公藤红素组和联合组抑瘤率分别为6.68％、35.08％和22.00％;各给药组裸鼠血清TNF-α含量显著增加(P＜0.05);HE染色显示,各给药组裸鼠瘤组织均出现间质增多现象,且联合组部分区域出现炎症细胞浸润、堆积;Western blot结果显示,雷公藤红素组裸鼠瘤组织IκB激酶α(IKKα)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、周期蛋白D1(CyclinD1)、NF-κBp65蛋白表达显著降低(P＜0.05),联合组裸鼠瘤组织NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和p-IκBα蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 预知子联合雷公藤红素能抑制肝癌荷瘤裸鼠肿瘤生长,NF-κB通路p-IκBα分子可能是二者联合发挥抑瘤作用的重要靶点.

肝癌属难治性恶性肿瘤,癌细胞增殖迅速且拥有抵御药物干预的复杂分子应激网络,是其难以治愈的重要原因.发展包含中医药在内的综合治疗手段,开发新药(如中药提取物或有效成分),开展联合用药研究,具有一定的应用前景.通过综述中药成分联用抑制肝癌细胞增殖及机制研究,以期为肝癌的综合治疗及中医药相关研究提供参考.

肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一,流行病学数据显示,2018年全球约有1810万肿瘤新发病例以及960万肿瘤死亡病例;肿瘤的发病率和死亡率在全球范围内迅速增长,其难治性及危害性使得肿瘤成为全球最重要的生命科学领域之一[1].

Metastasis remains a crucial obstacle to the clinical treatment of hepatocellular carcinoma (HCC). Investigating the potential anti-tumor compounds from medicinal herb against HCC metastasis is of particular interest. As a triterpenoid saponin, α-Hederin has been reported to exhibit cytotoxicity for diverse cancer cell lines by inducing mitochondrial related apoptosis or autophagic cell death. Nevertheless, little is known about the inhibitory effect of α-Hederin on the metastasis of HCC and its underlying mechanisms. Here, we integrated well-established target prediction webtool and molecular docking methods to predict the potential targets for α-Hederin, and finally focused on PTAFR, the receptor for platelet-activating factor (PAF). Activation of PAF/PTAFR pathways has been reported to be contribution to the initiation and progression of cancer. We showed for the first time that non-cytotoxic concentration of α-Hederin inhibited cell migration and invasion induced by PAF in HCC cells, as well as lung metastasis in vivo. Moreover, we demonstrated α-Hederin reduced the PAF-induced matrix metalloproteinase-2 expression through inhibiting the activation of STAT3 in PAF stimulated HCC cells. These findings suggest that α-Hederin functions as a prospective inhibitor of PTAFR and may be utilized as an optional candidate for treatment of HCC.

OBJECTIVE:To investigate the efficacy of Yuzhizi seed extract (FAQSE) on inhibiting the proliferation of hepatocellular carcinoma (HCC) cells in vitro and to explore the anti-HCC action mechanism of FAQSE.METHODS:Human HCC HepG2 and Huh7 cells were used to investigate the anti-HCC effect of FAQSE. 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) method was used to measure cell viability. Affymetrix microarray was adopted to detect the expression of transcriptome. The differentially expressed genes (DEGs) of each cell line were identified. For co-DEGs of both cell lines, the gene ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway were enriched using the Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery (DAVID), and the network analysis of protein-protein interaction (PPI) was mapped using the Retrieval of Interacting Genes/Proteins (STRING) and Cytoscape software. Some important genes in the PPI network of co-DEGs were selected to verify by quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction, Western blot and enzyme-linked immunosorbent assay.RESULTS:FAQSE decreased the viability of HepG2 and Huh7 cells. There were 211 co-upregulated and 86 co-downregualted genes in both cell lines after FAQSE treatment. The enriched GO terms of co-upregulated DEGs were primarily involved cell-cell adhesion, viral process, transcription initiation from RNA polymerase II promoter, positive regulation of transcription from RNA polymerase II promoter and actin cytoskeleton organization. The GO terms of co-downregulated DEGs were mainly enriched in the processes of SRP-dependent cotranslational protein targeting to membrane, viral transcription, nuclear-transcribed mRNA catabolic process, nonsense-mediated decay, translational initiation and rRNA processing. Main KEGG pathways of co-upregulated DEGs were endocytosis, glutathione metabolism, protein processing in endoplasmic reticulum, synaptic vesicle cycle and lysosome. The major KEGG pathways of co-downregulated DEGs were ribosome, biosynthesis of amino acids, arginine and proline metabolism, systemic lupus erythematosus and complement and coagulation cascades. The top 10 co-DEGs with high hub nodes in STRING analysis were ribosomal protein S27a, transferrin, ribosomal protein S20, ribosomal protein L9, protein phosphatase 2 regulatory subunit B alpha, transthyretin, thioredoxin reductase 1, ribosomal protein L3, ribophorin I and ribosomal protein L24. Alpha-fetoprotein (AFP) was also co-downregulated and contained in the PPI network. The mRNA and protein expression of most verified genes was consistent with the results of co-DEGs analysis. And the AFP level was significantly reduced after FAQSE treatment.CONCLUSIONS:A series of genes and pathways of HepG2 and Huh7 cells were changed after FAQSE treatment, which might be the targets of FAQSE against HCC and worthy of further study. AFP might be important one of them.

本文介绍方肇勤在中医辨证论治理论方面的学术成果.从辨证论治理论研究及其计算机程序化模拟研究、辨证论治动物实验方法学研究、肝癌同病异证证候特征及其物质基础研究、中药复方及其拆方后不同治法的研究予以简要梳理.方肇勤在学术上的突出成就体现在辨证中提出了"新值"和"潜值""显值"等概念,创建了大鼠/小鼠辨证论治实验方法学,率先提出与践行按照不同治法拆方的思路研究复方药效,领先开展大规模临床病例的证候流行病学调查研究,同步从神经内分泌免疫组织基因表达谱全方位探索证候物质基础,所取得的研究成果丰富与发展了当代中医基础理论.

目的 观察预知子醇提物联合雷公藤红素对SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将不同浓度预知子醇提物和雷公藤红素分别作用于SMMC7721细胞72 h,MTT法获得细胞存活率、72 h IC50后,计算药物相互作用指数(CDI).将SMMC7721细胞分为空白对照组、预知子醇提物组、雷公藤红素组和预知子醇提物+雷公藤红素组(联合组),光镜观察细胞形态,荧光显微镜观察细胞核形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测线粒体凋亡途径、内质网应激途径、自噬相关和线粒体-内质网结构偶联(MAM)相关蛋白的表达.结果 预知子醇提物和雷公藤红素72 h IC50剂量CDI值为0.45,存在显著协同效应.联合组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞形态发生改变,且部分细胞核呈碎块状,细胞凋亡率较其余3组显著升高(P<0.05).与空白对照组比较,雷公藤红素组和联合组线粒体凋亡相关蛋白Caspase-3表达明显降低(P<0.05),联合组cleaved Caspase-3表达明显降低(P<0.05),预知子醇提物组内质网应激相关蛋白Grp78表达明显降低(P<0.05),雷公藤红素组和联合组Grp78蛋白表达明显升高(P<0.05);联合组Chop蛋白表达较其余3组均明显升高(P<0.05);与空白对照组比较,预知子醇提物组和联合组自噬相关蛋白p62、LC3BⅡ及LC3BⅡ/Ⅰ比值均显著升高(P<0.05),各给药组MAM标志物Mfn2表达均升高但差异无统计学意义(P>0.05).结论 预知子醇提物联合雷公藤红素可抑制SMMC7721细胞增殖、诱导细胞凋亡,预知子醇提物和雷公藤红素作用靶点不尽相同;二者的一致性效应机制方面,除Caspase-3和cleaved Caspase-3、Chop和Mfn2等分子外,尚需进一步扩大关注面.

目的 探讨预知子醇提物(AFE)与姜黄素(CUR)联用抑制SMMC7721肝癌细胞增殖协同效应及机制.方法 将不同浓度预知子醇提物AFE(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 g·L-1)和姜黄素CUR(25.0、20.0、15.0、10.0、5.0μmol·L-1)分别作用于SMMC7721肝癌细胞72h,噻唑蓝法(MTT)获得细胞存活率;在此基础上进一步设置不同浓度9种组合,以药物相互作用指数(Coefficient of Drug Interaction,CDI)为标准筛选最佳协同效应组合,同时设置空白以及各自等剂量单药对照组,进一步采用光镜观察细胞形态、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(WB)检测线粒体和内质网应激凋亡、死亡受体途径相关蛋白表达量.结果 ①AFE 72h IC50为2.09 g·L-1;CUR 72h IC50为16.90μmol·L-1;②AFE 1.5 g·L-1+CUR 15.0μmol·L-1组合协同效应最佳,CDI值为0.74±0.06;③细胞形态方面,AFE作用后细胞增殖被抑制且出现ERS空泡样表现,CUR作用后细胞增殖被抑制但无相同形态变化,协同组类似二者效果的叠加;④AFE、CUR单独作用凋亡现象基本不出现,协同组诱导细胞凋亡现象则被显著增强,凋亡率显著高于其它3组(P<0.05);⑤协同组Bcl-2较对照和CUR组显著上升(P<0.05);AFE下调Caspase-9表达(P<0.05);Cleaved Caspase-9和Parp1均呈下降趋势,其中大片段Cleaved Parp1和小片段Cleaved Parp1均被CUR显著下调(P<0.05),但后者被AFE和协同组显著上调(P<0.05);AFE显著下调Bip表达(P<0.05);Chop在各用药组中表达量均被下调(P<0.05),且在协同组低于各单药组(P<0.05);p-JNK在AFE和协同组均被上调(P<0.05);IKBα在CUR和协同组均被上调(P<0.05),且协同组高于各单药组(P<0.05).结论 预知子醇提物和姜黄素联合抑制肝癌细胞增殖协同效应确切;线粒体和内质网应激凋亡、死亡受体途径上,Bcl-2,Parp1,Chop、IKBα等诸多标志性分子可能参与该过程.

目的:研究顺铂短期给药诱发小鼠药源性证候的属性及对类固醇激素合成功能的影响.方法:40只雄性ICR小鼠随机分为对照组及顺铂不同剂量(3、5、10 mg·kg-1·d-1)组,每组10只.各药物干预组小鼠腹腔注射相应剂量的顺铂,连续5 d.分别于干预5 d后和停药5 d后,观察小鼠体征(体质量、摄食量、腋温、爪色泽),并进行行为学测试(抓力、旷场试验和转棒试验).观察期后,取血清;分离肾脏、心脏、胸腺和脾脏,计算脏器指数;收集肾上腺和睾丸.ELISA检测血清皮质酮和睾酮含量;HE染色后光镜下观察肾上腺与睾丸组织形态学变化;PCR、Western blot分别检测肾上腺皮质类固醇激素合成酶和睾丸睾酮合成酶相关的mRNA、蛋白表达.结果:①干预5 d后,顺铂10 mg·kg-1·d-1组小鼠体质量、摄食量、腋温、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);顺铂3、5mg·kg-1·d-1组小鼠腋温明显低于对照组,而爪色r值高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).停药5 d后,顺铂10 mg·kg-1·d-1组小鼠体质量、摄食量、在棒时间、抓力、腋温、爪色r值、水平运动及垂直运动较对照组均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);顺铂3、5 mg·kg-1·d-1组小鼠垂直运动较对照组亦明显减少(P＜0.01).②与对照组相比,10 mg·kg-1·d-1顺铂作用显著抑制小鼠脾脏、胸腺、心脏,脏器指数明显降低(P＜0.05,P＜0.01),而肾脏指数显著升高(P＜0.01);5 mg·kg-1·d-1顺铂作用亦抑制心脏(P＜0.05).③形态学观察显示,顺铂10mg·kg-1·d-1组小鼠肾上腺皮质球状带细胞肿胀明显,顺铂5、10mg·kg-1·d-1组小鼠可见各级生精细胞排列略紊乱,睾丸间质细胞收缩明显.④与对照组相比,顺铂10 mg·kg-1·d-1组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P＜0.01),血清睾酮含量无明显变化.⑤与对照组相比,顺铂3 mg·kg-1·d-1组小鼠肾上腺Star、Cyp21a1的mRNA表达受到抑制(P＜0.05),而顺铂10mg·kg-1·d-1组小鼠肾上腺Star、Cyp11b1、Cyp21a1的mRNA表达及StAR、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01).⑥与对照组相比,10 mg·kg-1·d-1顺铂作用显著抑制睾丸 StAR、CYP1 1A1、CYP17A1、HSD3B2的 mRNA 与蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01);5 mg·kg-1·d-1 顺铂干预显著抑制 Star 和Hsd3b2的 mRNA 表达(P＜0.05,P＜0.01);3 mg·kg-1·d-1 顺铂作用亦显著抑制 Cyp17a1 和Hsd3b2的mRNA表达(P＜0.01).结论:顺铂短期给药可诱发小鼠虚证表现,以精气亏虚为主,其物质基础与类固醇激素合成及储备下降有关.

通过在实验中医学课程考核方式中引入探究性学习实践,发现学生在理论向科研实践过渡的过程中,暴露出的一系列问题.由此,在学生探究性学习基础上,加入个性化辅导的教学环节,针对每名学生的探究性学习报告,评价其科研设计的优势及薄弱环节、分析问题原因、找到解决思路,帮助学生构建完整的科研思维框架.结果 显示,个性化辅导有助于学生对本课程知识点的巩固,学生探究性学习报告的成绩及科研设计的各方面能力均有显著提升.据此形成的"理论学习—探究性学习(暴露问题)—个性化辅导(解决问题)"教学模式,更有助于学生科研思维的形成,从而实现本课程的教学目标.

目的:对糖皮质激素诱发的小鼠药源性证候模型建立规范化的造模方法及评价标准.方法:对模型动物、糖皮质激素类药物及其干预的剂量、时间等进行考察,采用小鼠辨证论治实验方法学以及反映肾上腺皮质功能的实验指标综合评价小鼠证候属性.结果:对糖皮质激素诱发的小鼠药源性证候模型,建议首选ICR小鼠,常规造模采用3.3 g·kg-1·d-1氢化可的松连续灌胃14 d;大剂量短期造模采用25 g ?kg-1·d-1氢化可的松连续灌胃5 d;小剂量长期造模采用0.33 g·kg-1·d-1氢化可的松连续灌胃28 d;小剂量减停干预造模采用0.66 g·kg-1·d-1氢化可的松连续灌胃给药28 d、再剂量减半7 d、停药14 d.较理想的评价指标包括:体质量、脾脏指数、胸腺指数、腋温、体表红外温度、自主行为活跃度、四肢抓力、血液皮质酮、肾上腺类固醇激素合成酶特异性分子(StAR、CYP11A1、CYP11B1、CYP21A1、SRBI、LDLR)、肾上腺皮质形态及超微结构.结论:对糖皮质激素诱发的小鼠药源性证候模型建立了规范化的造模方法及可量化的疗效评价标准,为中药及其复方的药效研究提供理想的小鼠证候模型.

EB病毒是一种感染人类B淋巴细胞的疱疹病毒,对于免疫功能异常的感染者,则可能引发一系列具有发热性质的急性病症或淋巴组织增生性疾病.本研究介绍了EBV致发热患者临床流行病学特征及临床症状,剖析其致病免疫机制,进而从中医温病学视角,探讨该类疾病卫气营血辨证分型特征,为中医温病学辨证论治提供参考借鉴.

目的:研究补肾复方对小剂量氢化可的松减停给药诱发的小鼠证候及肾上腺皮质功能的影响.方法:48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、氢化可的松组、六味地黄汤组、桂附地黄汤组,每组12只.每组给予1.32 mg· kg-1·d-1氢化可的松28 d减半剂量7d停止用药14 d造模,减量及停药阶段同步给予相应组六味地黄汤药液12.5 g·kg-1·d-1,桂附地黄汤药液13.5 g·kg-1·d-1,连续21d.实验第28,49天采用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(抓力、体表红外温度);在实验第50天处死小鼠取材,摘取脾脏、胸腺,计算脾脏与胸腺脏器指数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清皮质酮含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(Star),胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1),细胞色素P450家族21亚家族A多肽1(Cyp21a1),细胞色素P450家族11亚家族b多肽1(Cyp11b1),低密度脂蛋白受体(Ldlr),B类Ⅰ型清道夫受体(Scarb 1/SRBI),3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(Hmgcr),酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1 (Acat1),激素敏感性脂肪酶(HSL/LIPE),胰岛素诱导基因1(Insig1),固醇调节元件结合转录因子2(Srebf2)mRAN表达;蛋白免疫印迹法(Western b1ot)检测低密度脂蛋白受体(LDLR),B类I型清道夫受体(Scarb 1/SRBI),胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1),胆固醇21-羟化酶(CYP21A2)蛋白表达.结果:与正常组比较,连续给药28 d后,模型组小鼠体质量与躯体平均红外温度均显著下降(P＜0.01);减停造模后,模型组小鼠抓力明显下降(P＜0.05),胸腺指数显著升高(P＜0.01),血清皮质酮含量明显降低(P＜0.05),肾上腺Cyp21a1,Hmgcr mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01),Lipe,Acat1 mRNA表达显著上升(P＜0.01),肾上腺CYP11A1,SRBI蛋白表达显著下降,LDLR蛋白表达上升.与模型组比较,中药治疗21d后,桂附地黄汤组小鼠体质量显著下降(P＜0.01);六味地黄汤组小鼠脾脏指数显著下降(P＜0.01);桂附地黄汤组Cyp11a1,Cyp21a1,Acat1,Lipe mRNA表达明显上升(P＜0.05,P＜0.01),Ldlr,Scarb1 mRNA表达明显下降(P＜0.05),六味地黄汤组Ld1r,Acat1,Lipe mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01);六味地黄汤及桂附地黄汤组CYP11A1,SRBI蛋白表达上升.结论:桂附地黄汤可通过纠正肾上腺皮质激素合成酶的表达,以促进药源性虚证小鼠肾上腺皮质功能恢复.

目的:观察黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍对人肝癌细胞自噬作用的影响,探讨其抗肝癌的作用机制.方法:体外培养肝癌HepG2及Huh7细胞,设对照组、复方组、组方组,分别给予相应药物处理24h后,溶酶体探针染色法观察细胞内溶酶体形成情况;免疫荧光法观察细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3B)蛋白分布及表达;RTqPCR法检测酵母ATG6同源物(Beclin-1)、LC3B mRNA表达,蛋白印迹法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B的表达.结果:复方组和组方组溶酶体荧光数量明显多于对照组,组方组更明显,两种细胞中对Huh7细胞作用更明显;免疫组化中复方组、组方组LC3B的表达优于对照组,复方组更甚,两种细胞差异不大.HepG2细胞中,复方组和组方组Beclin-1、LC3B mRNA显著增加(P＜0.05);Huh7细胞中,两用药组LC3B mRNA也有增加(P＜0.05).HepG2细胞中,复方组和组方组Beclin-1蛋白表达明显上调(P＜0.05),复方组更明显(P＜0.05),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值升高(P＜0.05);Huh7细胞中组方组LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值升高(P＜0.05).结论:黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍均可诱导肝癌HepG2细胞和Huh7细胞自噬水平增加.