本实验旨在探讨不同药物处理、季节和生产阶段对奶水牛同期发情效果的影响,为进一步优化并提高同期发情效果提供依据.选择 2～8 岁、体重 350～700 kg的本地奶水牛 90 头(后备牛 40 头、经产牛 50 头).试验一:选取33头后备牛,随机分为2组,采用GnRH+PGF2α+GnRH法(GnRH组)和CIDR+PGF2α法(CIDR组)处理,在秋季观察其同期发情效果;试验二:选取40头后备牛,采用GnRH+PGF2α+GnRH法处理,观察春季、秋季和冬季奶水牛同期发情效果;试验三:选用17头后备牛和50头经产牛,采用GnRH+PGF2α+GnRH法处理,观察不同生产阶段奶水牛同期发情效果.结果表明:GnRH组和CIDR组的发情率、排卵率分别为 94.12％、81.25％和 81.25％、76.92％;冬季、秋季发情率(100.00％、94.12％)均高于春季(58.33％)(P＜0.01),秋、冬两季差异不显著;排卵率由高到低依次为冬季(90.91％)、秋季(81.25％)、春季(57.14％)(P＞0.05);后备牛和经产牛的发情率分别为 94.12％和 96.00％(P＞0.05),排卵率分别为 81.25％和 97.92％(P＜0.05).可见,GnRH组和CIDR组的同期发情效果无显著差异;季节会影响奶水牛的同期发情效果,秋、冬季进行同期发情较为适宜;经产牛的同期发情效果比后备牛好,可能是后备牛生殖系统还未发育成熟,一定程度上影响其排卵.

[目的]探索不同来源卵母细胞对体细胞核移植(SCNT)重构胚的发育能力及发育潜能关键蛋白表达水平的影响.[方法]试验分为活体采卵(OPU)和屠宰场(SLH)卵巢2组,OPU组用超声波活体采卵仪穿刺抽吸10头非泌乳期经产水牛卵巢的卵泡采卵,SLH组从屠宰场卵巢抽吸卵泡采卵.获得的卵母细胞分别进行体外成熟,体外成熟22～24 h后,吹打去除卵丘细胞,挑选具有第一极体的卵母细胞,去核后与水牛耳部成纤维细胞进行SCNT,分别统计SCNT重构胚的融合率、分裂率和囊胚率,用免疫荧光检测2种SCNT重构胚的E-钙黏蛋白(E-cadherin)和转录因子Sox2蛋白的表达水平.[结果]OPU组卵母细胞成熟率及其SCNT重构胚的囊胚率均显著高于SLH组(P＜0.05),但2组SCNT重构胚的融合率和分裂率均无显著差异(P＞0.05);免疫荧光结果显示,E-cadherin蛋白定位于细胞膜上,Sox2蛋白分布在细胞核膜及细胞质中,OPU组SCNT重构胚中E-cadherin和Sox2的表达水平均显著高于SLH组(P＜0.05).[结论]活体采集的水牛卵母细胞更适合用于SCNT重构胚的构建.

牛奶体细胞数(SCC)在奶牛业的理论研究以及生产实际指导中都具有十分重要的意义.为了解广西水牛研究所水牛种畜场SCC的影响因素,2017—2019年间共收集3185份样本数据,研究品种、产犊季节、胎次、季节和泌乳阶段对SCC的影响,结果发现:地中海水牛SCC低于尼里-拉菲水牛(P<0.05);母牛夏季产犊其SCC低于春季和秋季(P<0.05),与冬季差异不显著;河流型水牛SCC在各胎次之间差异不显著;河流型水牛SCC在冬季高于春、夏、秋季(P<0.05),并且夏季低于春季与秋季(P<0.05);泌乳阶段对河流型水牛SCC均无显著差异.本研究结论表明:品种、产犊季节及季节对SCC的影响均达到显著水平,胎次与泌乳阶段对水牛SCC无显著影响.

研究旨在从水牛犊牛血浆中分离外泌体,并对分离的外泌体进行分子生物学特征分析和鉴定.采用差速离心法分离3头水牛犊牛的血浆外泌体,并在透射电子显微镜下观察其形态,使用纳米粒度及Zeta电位仪对提取的外泌体进行粒径大小分析,应用Western blotting方法检测外泌体标记蛋白钙联蛋白(Calnexin)、肿瘤易感基因101(TSG101)、CD9、CD81在3头水牛犊牛血浆外泌体中的表达情况.结果显示,从水牛犊牛血浆中分离的外泌体形态多为圆形和椭圆形,直径在30～150 nm;Western blotting检测结果表明,在水牛血浆外泌体表面,特异性蛋白Calnexin、TSG101和CD81阳性表达,CD9不表达.本研究从形态学和分子生物学特征等方面证实研究获得的提取物为外泌体,由此说明,差速离心法可以成功分离提取水牛犊牛血浆中的外泌体,为水牛外泌体的后续研究提供了重要技术基础和参考.

本研究旨在探讨连续活体采卵(OPU)对水牛卵母细胞质量的影响,为建立高效的水牛胚胎体外培养体系奠定基础.实验选择4～12岁、体重580～700 kg的92头水牛(摩拉27头、尼里-拉菲30头、杂交水牛35头),每隔3d进行1次OPU,连续5次OPU.供体不用激素处理,收集的卵母细胞分为A、B、C和D级,计算各级卵母细胞百分率、优质卵母细胞百分率、卵母细胞回收率.结果 表明:连续5次OPU时,卵母细胞回收率分别为65.91％、48.16％、43.54％、50.77％和47.31％,第1次OPU时卵母细胞回收率显著高于第2～5次,而第2、3、4、5次之间差异不显著;优质卵母细胞(A+B级)在第1～2次OPU的百分率比第3、4、5次效果差(P＜0.05):C级卵母细胞在第1次OPU时的百分率与第2、3、4、5次差异极显著;尼里-拉菲水牛第1次OPU时,C级卵母细胞百分率显著高于与第2、3、4、5次;第1次OPU时的优质卵母细胞百分率显著低于第2、3、5次;摩拉水牛第1次OPU时,C级卵母细胞百分率显著高于第2～5次,第1次卵母细胞百分率显著高于第2～5次,第1次的优质卵母细胞百分率显著低于第4、5次OPU;杂交水牛第1次OPU时的卵母细胞百分率显著高于第2～5次.综上,杂交水牛的优质卵母细胞百分率比尼里-拉菲和摩拉水牛好,并且效果相对稳定.

本文介绍了世界奶水产业概况及我国奶水牛业在世界奶水牛业中的地位,全面介绍了我国奶水牛业发展情况,重点阐述了和奶水牛业发展历程,并就更好地发展奶水牛产业提出建议.

为了缩短奶水牛的产犊间隔,提高繁殖效率和养殖效益,利用酶联免疫反应原理采用一种快速可视孕检试剂盒对配种后28 d以上的试验母牛进行检测.对429例已配种母牛进行检测,其中阴性(空怀)265例,阳性(怀孕)164例,验证检查阴性265例,阳性160例,试剂盒检测的阴性准确率为100％,阳性准确率为97.56％,可见该试剂盒可用于水牛的早期孕检.

用"GnRH+PGc+GnRH"法同期化处理水牛,利用B超对多卵泡发育和排卵进行监测.结果表明,经同期化处理的母水牛多卵泡发育发生率为6.43％(42/653),排卵率为72.73％(24/33).母水牛多卵泡发育的发生与品种、年龄、季节等因素无关.

水牛作为我国南方主要的大型经济动物,是农业发展的特色优势产业.目前这一宝贵丰富资源尚未得到合理配置使用,未能形成以奶水牛业为核心的草食家畜优势产业.通过对比分析国内外水牛产业发展现状,并采用SWOT分析我国南方水牛产业的发展优势、劣势、机遇和面临的挑战,提出构建生态友好、资源循环的发展模式,跨省联合、协作有力的良繁体系,区域集中、示范有效的品改体系,母犊留养、公牛育肥的培育体系,规模养殖、标准统一的奶牛体系,品种多样、均衡供应的饲料体系,特色高值、国际竞争的产品体系,肉用突出、品质争先的肉牛体系,优势互补、重点突出的支撑体系,内外联动、协同创新的国合体系等今后南方水牛产业发展模式构想,以及实施的具体对策措施.

为了保存富钟水牛的遗传物质,试验选择10头富钟水牛,分为对照组(不经过激素处理直接活体采卵)、孕马血清促性腺激素(PMSG)组(采卵前4d肌肉注射PMSG 1 500 IU/头,每天1次)、促卵泡素(FSH)组(采卵前4天开始肌肉注射FSH,共2d,每天2次,每次1.25 mg/头).结果表明:对照组与PMSG纽、FSH组相比,平均每头回收卵母细胞数差异不显著(P＞0.05),但可用率、平均每头可用卵母细胞数差异显著(P＜0.05);PMSG组可用率、平均每头可用卵母细胞数与FSH组相比差异不显著(P＞0.05).对照组最后15批次母牛的回收卵母细胞总数、可用卵母细胞数、平均每头回收卵母细胞数、平均每头可用卵母细胞数均呈下降趋势.

为了繁育纯种地中海水牛,试验采用“促黄体素释放激素A3+氯前列醇+促黄体素释放激素A3”同期化处理国外引进的地中海育成水牛,并用引进的地中海水牛冻精进行人工授精.结果表明:经同期化处理的地中海水牛发情率为87.07％,淡、旺季发情率差异不显著(P＞0.05);情期受胎率为37.39％,旺季配种受胎率显著高于淡季;淡季母牛48 h内排卵率为59.72％,旺季为81.13％,差异显著(P＜0.05).间隔一定时间重复处理不影响发情率和受胎率.地中海水牛同期发情-人工授精效果与摩拉水牛、尼里-拉菲水牛、本地水牛的处理效果基本一致.

为研究母水牛卵泡的发育和排卵规律,用“促黄体素释放激素A3+氯前列醇+促黄体素释放激素A3”的方法同期化处理水牛,用B型超声波对卵泡发育和排卵进行监测.结果表明:经同期化处理的母水牛发情率为79.94％(522/653),优势卵泡直径范围在9～14 mm之间,大部分在10～11 mm之间.排卵时间范围在0～60 h之间,大部分在24～48 h之间,季节对发情和排卵有显著影响;年龄和品种因素对发情有影响,对排卵的影响不显著;左右侧卵巢排卵概率基本一致.

试验旨在研究全混合日粮对泌乳水牛生产性能的影响.选择20头泌乳前期、健康状态良好的奶水牛,按品种、产奶量、产犊时间及胎次相近的原则随机分成2组,每组10头,第1组:传统精粗分开饲喂组;第2组:全混合日粮(TMR)组.结果为:与传统精粗分开饲喂组相比,TMR组水牛的平均日产奶量下降有所减缓,但差异不显著(P>0.05),而TMR组水牛的干物质采食量显著提高(P<0.05);与传统精粗分开饲喂相比,TMR饲喂方式对泌乳水牛总固形物和乳脂率的影响差异显著(P<0.05),但对泌乳水牛乳非脂固形物含量、乳蛋白率、乳糖率、比重的影响差异不显著(P>0.05).试验结果表明,全混合日粮与传统精粗分开饲喂方式相比,可以增加泌乳后期奶牛干物质采食量,对产奶后期产奶量的下降有减缓作用,改善泌乳奶水牛的乳品品质.

国内在生物技术方面的研究出现了新的进展,并且对诸多牲畜都进行了较为全面的研究,但是对水牛的生物技术研究却体现出了明显的落后,而水牛繁殖生物技术的研究对全球水牛业的发展都会起保障性作用.所以,文中将对水牛繁殖生物技术的运用进行分析.

为进一步丰富我国乳用良种水牛遗传资源、扩大种源、促进中国水牛杂交改良和水牛奶业的发展,文章对近几年引进意大利地中海水牛冻精对我国几个地方品种水牛(摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、摩拉×尼里水牛以及本地水牛等)人工授精的情况进行资料汇总.结果表明:地中海杂交水牛平均情期受胎率为58.82％,各杂交组合间差异不显著(P＞0.05),杂交后代生长发育正常.地中海×摩拉、地中海×尼里/拉菲杂交公牛染色体数为2n=48 +XY,母牛染色体数均为2n=48 +XX;地中海×本地水牛杂交后代染色体有三种类型,分别为2n=48、2n=49、2n=50.各种杂交组合的怀孕期在309.40～322.89 d之间,平均为(314.11±12.07)d,杂交后代初产年龄最早为887 d,最晚为1 185 d,平均为(1 029.71± 130.32)d.第一泌乳期平均泌乳天数为(316.24±55.62)d,总产奶量为(2036.18±590.89)kg,305 d产奶量为(2 086.16±383.08)kg.地中海杂交水牛乳成分主要指标均略高于《广西食品安全地方标准》.说明地中海水牛能适应我国气候环境,并且杂交改良效果显著.

老挝是东盟内陆欠发达国家, 属资源型传统农业国家,北面与我国云南、 广西接壤, 民间交往源远流长. 2004年中国-东盟博览会永久落户广西南宁, 中国-东盟国家间科技、经贸交流日益增多. 为强化与东盟成员国的科技合作, 2014年广西科技厅下达科技合作与交流计划项目 "水牛杂交改良技术在老挝的本地化研究与推广示范", 项目承担单位为广西水牛研究所, 对方对接单位为老挝国家农林研究所畜牧研究中心, 由此正式展开与老挝方面的水牛科技项目合作.

为了对广西本地水牛新生儿卵巢同源盒基因(NOBOX基因)5'侧翼序列进行克隆、生物信息学分析及其转录活性进行研究,试验采用GenBank上已公布的黄牛NOBOX基因5'侧翼序列设计引物,以广西本地水牛血液基因组为模板扩增NOBOX基因5'侧翼序列并进行生物信息学分析.结果表明:研究成功克隆得到广西本地沼泽型水牛NOBOX基因5'侧翼序列及部分CDS区序列,共2 906 bp.同源性分析结果表明,其与地中海水牛、黄牛、绵羊和山羊的相似性分别为99％、96％、91％、91％.试验对NOBOX基因5'侧翼序列2 000 bp进行启动子及转录因子结合位点预测,在其翻译起始位点上游-868/-853 bp处存在TATA box,启动子区存在GATAs、Foxo1、Foxo3、Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、YY1等反式作用元件结合位点,其中GATAs家族基因在NOBOX启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个GATA基因结合.水牛NOBOX启动子能够启动EG-FP在HEK-293T细胞上表达,但表达非常微弱,也能够启动EGFP在CHO细胞上表达,且与CMV启动EGFP在CHO细胞中的表达强度相似,表明水牛NOBOX是个强启动子.

为了阐明水牛17β-羟类困醇脱氢酶1 (17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1,HSD17B1)基因对水牛繁殖性能的影响,本试验采用了3'-RACE克隆获得HSD17B1基因,并对其核苷酸序列和蛋白质序列进行了生物信息学分析,通过构建其真核表达载体并转染293T细胞验证所构建载体的准确性.结果表明,水牛HSD17B1基因编码区长954 bp,3'-UTR区长58 bp,编码317个氨基酸.BLAST分析显示水牛HSD17B1核苷酸序列与牛、绵羊、猪、马、犬、非洲象和人的相似性分别为100％、100％、92％、94％、87％、87％和87％,系统进化树分析结果表明,HSD17B1基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性.蛋白质分析结果表明HSD17B1蛋白呈弱酸性,无信号肽,亚定位于细胞质,存在type1_17beta-HSD-like_SDR_c、PRK05993、LPOR和FabG等结构域.试验成功构建了水牛HSD17B1基因真核表达载体pEGFPN1-HSD17B1,转染293T后,产生较强的绿色荧光信号,表明能够形成HSD17B1-EGFP融合蛋白.水牛HSD17B1基因的克隆及其真核表达载体的成功构建,为今后阐明HSD17B1基因在水牛卵泡及胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了理论基础.

[目的]克隆沼泽型水牛VASA基因5'侧翼序列,对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测,为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础.[方法]根据GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5'侧翼序列,经过同源比对,设计PCR引物.以沼泽型水牛血液基因组为模板扩增VASA基因5'侧翼序列并进行测序和生物信息学分析.将扩增的VASA基因5'侧翼片段插入pEGFP-1多克隆位点处,构建pVASA-EGFP-1载体.载体经脂质体转染HEK-293T和CHO细胞系,分析其转录活性.[结果]成功克隆沼泽型水牛VASA 5'侧翼序列及部分CDS区序列,共3 081 bp,同源性分析表明,沼泽型水牛VASA基因5'侧翼序列与河流型水牛、黄牛、绵羊、山羊、小鼠和人的相似性分别为99％,96％,93％,95％,90％和79％.对其5'侧翼序列2 000 bp进行启动子预测及转录因子结合位点预测,发现在其翻译起始位点上游-635-586处存在TATA box,启动子区存在Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、Gata3、Smad2、Smad3和Smad4等反式作用因子结合位点,其中Stat家族基因在VASA启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个Stats基因结合的情况.水牛VASA启动子能启动EGFP在HEK-293T细胞中的表达,但非常微弱;能启动EGFP在CHO细胞中表达,且启动活性与CMV启动子相似.[结论]成功克隆了沼泽型水牛VASA基因启动子,分析了其启动子序列特征并成功验证其组织特异性和转录活性.

1项目来由<br>　　老挝地处东南半岛，北面与我国云南、广西接壤，是传统的农业国家。该国农林资源丰富，具有土地、气候和物种等共同构成的农林业发展自然地理优势和生态优势，但仅从农业方面看，老挝仍属农业欠发达国家，全国农副产品在市场销售的部分占比很低。农业科研及农业技术推广服务体系缺乏，农民普遍缺乏畜禽养殖技术和病虫害的防治技术，养殖生产完全凭借传统经验，畜禽死亡率高、繁殖率低。这些问题不同程度地制约着老挝农业的进一步发展，解决这些问题便成为发展老挝农业的当务之急。