2021年4月15日《中华人民共和国生物安全法》实施,对学生进行全面、规范的实验室安全教育刻不容缓.本学院整合、优化了病原生物学实验内容并针对其中涉及的生物安全方面内容建立教育培训体系:包括线上法规学习、线上实验理论讲解、线下实际操作、线上+线下总结考试.在不增加学生课程学时的情况下培养其建立起牢固的安全意识、养成优秀的实验安全习惯.

采用反相高效液相色谱法,以甲醇和水为流动相,使用C18色谱柱和紫外检测器,在250 nm波长下对试样中溴氰虫酰胺和噻虫嗪进行液相色谱分离和定量分析.结果表明,溴氰虫酰胺和噻虫嗪的线性相关系数分别为0.99974和0.99999,标准偏差为0.072和0.014,变异系数为0.36％和0.068％,平均回收率为99.23％和99.51％.该方法操作简单、快速、准确,适用于溴氰虫酰胺·噻虫嗪悬浮种衣剂的定性和定量分析.

[目的]建立蜂蜡中6种常用农药及其代谢物残留的气相色谱质谱联用分析方法.[方法]采用高效便捷的QuEChERS前处理技术,用三重四极杆气相色谱质谱联用仪进行测定,外标法定量.[结果)在标准溶液质量浓度为5～500 μg/L的范围内呈现出良好的线性关系,线性相关系数均大于0.99,定量限为10(ig/kg,在10、50、100 μg/kg水平添加回收率范围在78.6％～110.7％之间,相对标准偏差范围在1.2％～9.6％之间.[结论]该方法具有高效便捷、精密度和准确度高、线性关系好的特点,可有效监控蜂蜡中常用农药的残留,为蜂产品质量安全监控提供有力的技术支撑.

传统的病原生物学实验课程是理论课的从属,实验安排往往以生物学特点作为依据,各自验证一个知识点,彼此间缺少联系;而且教授方式以老师作为主体向学生灌输相关知识.随着社会发展,知识获取的途径变得广阔而简便,实验课的教学模式也应随之改变.本文将以学生为主导,培养其能力及探索和创新精神为导向的教学模式为目标,浅析病原生物学实验课的特点以及针对这样的特点进行实验课改革的思考和方法.

蜂胶中的多环芳烃用乙腈提取后再用正己烷萃取,经固相萃取柱净化,浓缩定容后,用气相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪进行测定,以外标法定量检测蜂胶中多环芳烃的残留量.该方法的线性范围为1～100μg/L,相关系数均大于0.99,回收率均在70.0％ ～95％,相对标准偏差均在1.0％ ～5.0％,表明该方法的准确度和精密度均能达到残留分析的要求.该方法可以有效地监控蜂胶中多环芳烃残留,提高蜂胶的品质和国际竞争力.

本文研究了双接枝淀粉成批量吸附锌离子的实验条件,确定了最佳吸附效果下的工艺条件为:pH=7,温度30℃,不同浓度的锌离子达到吸附平衡的时间为120min.

建立了一种同时测定7％吡虫啉·咯菌腈·嘧菌酯悬浮种衣剂中三种有效成分含量的高效液相色谱分析方法,该方法流动相为乙腈-磷酸水溶液(pH值=3),使用紫外可变波长检测器、C18反相色谱柱进行测试.结果表明,吡虫啉、咯菌腈和嘧菌酯测得的平均回收率分别为99.96％、99.67％、99.76％,标准偏差分别为0.039、0.009、0.012,变异系数分别为0.62％、4.12％、1.38％.

Objective To establish a new course"Experimentation of Pathogenic Biology"for constructing systematic knowledge of pathogen including medical microbe and parasite. Methods "Experimentation of Pathogenic Biology"was implemented in 2014 and 2015 grade students major in clinical medicine in Guangzhou Medical University. Questionnaire survey was used for analyzing the efficient of this course. Results It was generally affirmed by students that this course could reflect systematic knowledge of pathogen,improve scientific research quality,interests,and operate ability,etc. Conclusion The course could integrate Medical Microbiology and Human Parasitology effectively ,and explore experiments in scope and depth.

目的：探讨“三明治”教学法对学生的主动学习能力和教学效果的影响。方法：在2013级临床医学专业病原生物学理论教学中，采用了“三明治”教学法与传统教学法相结合的教学模式。结果：“三明治”教学法有效调动了学生的学习积极性和主动性，提高了学生的自主学习能力，传统教学法则系统地传授了专业理论知识。结论：将两者有效结合，能取得优于传统教学法的教学效果。

在本科临床专业留学生医学微生物学教学过程中，根据课程大纲的具体要求、各章节的内容以及学生的学习能力，联合运用PBL和LBL教学法，教学效果显著提高，获得学生广泛认可，为留学生教育改革的全面深入开展提供了思路。

目的 确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞线性表位.方法 通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子的B细胞表位并人工合成相应肽段;经克隆、表达、纯化等步骤得到纯化的重组LytA(rLytA)蛋白用以免疫小鼠并进行Westen blot鉴定;取免疫组小鼠和对照组小鼠血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选出B细胞表位.结果 利用多种方法分析LytA蛋白分子的B细胞表位,经整理得到11条候选肽段,命名为LB1到LB11,并进行了人工合成.利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功地免疫了小鼠,间接ELISA结果显示:肽段LB3、LB5、LB6、LB7、LB11与rLytA免疫小鼠的血清发生反应,其OD 450 nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子5个B细胞线性表位的位置和序列.

[目的]确定肺炎链球菌表面粘附素A(PsaA)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位.[方法]通过生物信息学方法预测肺炎链球菌PsaA蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人工合成相应肽段;克隆重组质粒BL21/pET/PsaA并得到纯化的rPsaA蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组和对照组小鼠的血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选B细胞表位;分离小鼠脾及淋巴结细胞并分别与人工合成的T细胞候选表位肽段体外共培养,取上清进行双夹心ELISA检测IFN-γ的量进行初步筛选.用初筛到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式检测,确定PsaA蛋白分子T细胞表位.[结果]分析PsaA蛋白分子的B细胞表位及MHC-Ⅰ结合肽、MHC-Ⅱ结合肽;得到候选B细胞表位肽10条,MHC-Ⅰ结合肽21条,MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成.利用分子生物学技术获得了rPsaA蛋白并成功免疫了小鼠.间接ELISA结果显示:肽段PB2、PB6,PB7与rPsaA免疫小鼠的血清发生反应,其OD450nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高;双夹心ELISA结果初步提示:肽段PⅠ 10、PⅠ 14、PⅠ 17、PⅠ 18、PⅠ21以及肽段PⅡ2、PⅡ5、PⅡ6刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高.细胞流式结果进一步确定:经肽段PⅡ2、PⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性细胞百分比较对照小鼠细胞显著升高;经肽段PⅠ 14、PⅠ 17、PⅠ21刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性细胞的百分比较对照小鼠细胞显著升高.[结论]确定了肺炎链球菌PsaA蛋白分子的3个B细胞线性表位;2个CD4 T细胞表位;3个CD8 T细胞表位.

目的 研究伯氏疟原虫CSP基因的N端蛋白与小鼠肝细胞膜HPSGs受体结合后在体外、体内的肝组织靶向性.方法 将伯氏疟原虫CSP基因N端片段(PbCSP-N)克隆入原核表达质粒pET-28a,经IPTG诱导表达重组蛋白,经亲和层析纯化后采用Western blot方法鉴定;采用Pull-down方法检测PbCSP-N蛋白与小鼠肝细胞表面受体硫酸乙酰肝素糖蛋白(Heparan sulfate proteoglycan,HSPG)的结合力;应用免疫组化、放射性碘标记示踪方法检测该蛋白在体外、体内特异性靶向小鼠肝组织作用.结果 成功构建PbCSP-N原核表达质粒并表达、纯化出PbCSP-N重组蛋白(15 ku),Pull-down方法证实该蛋白可与小鼠肝细胞膜HPSGs受体结合,免疫组化试验显示该重组蛋白定位于正常小鼠肝细胞膜,表明该蛋白可特异结合正常小鼠肝细胞膜;放射性碘(125I)标记示踪显示,标记的重组蛋白在注射1、2、4、6、12 h后在小鼠肝脏分布较多,表明该重组蛋白可靶向正常小鼠肝组织.结论 伯氏疟原虫CSP基因N端蛋白与肝细胞膜HPSGs受体结合后在体内、外靶向肝细胞,可作为肝细胞靶向性药物候选分子.

利用琥乙红霉素与中性红在乙醇介质中发生电荷转移反应，建立了分光光度法测定琥乙红霉素含量的方法。考察了溶剂种类、中性红用量、荷移反应时间和温度对对吸光度的影响，并与高效液相色谱法进行了对比。经产品中琥乙红霉素含量的测定实验表明，电荷转移络合物在波长463 nm处有最大吸收峰，检出限与相对标准偏差分别为1．23 g／mL和1．38％，加标回收率为98．2％和101．5％，完全满足生产中琥乙红霉素含量的快速检测。

Objective To assess the effects of immunity of recombinant dengue virus type-1(DENV-1) virus-like particles(VLPs) and lay a foundation for developing ployvalent VLPs vaccines. Methods DENV-1 CprME-VLPs(CprME-VLPs)and DENV-1 prME-VLPs(prME-VLPs) were prepared from Pichia pastoris(P.pastoris) expression system, and were purified by sucrose density gradient centrifugation. High-yielded VLPs were selected and used in conjunction with Freund adjuvant(FA) formulations at 10, 25, or 50 μg dose-1to vaccine mice. Control animals received phosphate buffered saline(PBS) or FA alone. The mice were tested for both humoral and cellular immune responses by ELISA and virus neutralization test, and by lymphocyte proliferation and detection of the number of IL-4, IFN-γ and TNF-α producing cells(IL-4, IFN-γ and TNF-α). Results Our data demonstrated that CprME-VLPs and prME-VLPs were both spherical particles with a diameter of approximately 30 nm and prME-VLPs were produced in higher yield. Mice immunized with VLPs began to produce antibodies on the day 7 post-prime. The neutralization titers reach 1∶40. And the antibody titer and neutralization titers of 25 μg dose-1group and 50 μg dose-1group were higher than that of the control groups(P0.05), while no difference between the two groups. The proliferation level and detection of the number of IL-4, IFN-γ and TNF-αproducing cells from 25 μg dose-1group and 50 μg dose-1group were higher than that of the control groups(P0.05), while no difference between the two groups. Conclusion Three immunizations with the recombinant DENV-1 VLPs at 25 μg dose-1could efficiently induce neutralizing antibodies and cellular immune responses in mice.

采用重量法测定氧化镍中的镍含量,该分析方法相对简便,易于操作,准确度高,能够满足检测分析的要求。

A HPLC method was developed for the quantitative determination of MCPA.fluroxypyr-meptyl 36% WP.The sample was separated and analyzed quantitatively on ODS column and UV detector at 220nm,using methanol,water and acetic acid as mobile phase by reverse phase HPLC.The results showed that the linear correlation coefficients of MCPA and fluroxypyrmeptyl were 0.999 1 and 0.999 0.The standard deviation were 0.026 and 0.032,the variation coefficients were 0.09 and 0.53%,the average recovery rates were 99.84 and 99.63%,respectively.The method was simple,rapid,accurate and suitable for the qualitative and quantitative analysis of MCPA.fluroxypyr-meptyl 36% WP samples.

采用液相色谱法,以乙腈-水为流动相,使用使用C18色谱柱和紫外检测器,在240 nm波长下对试样中的乙氧基聚三硅氧烷进行液相色谱分离和定量分析。有机硅的线性相关系数为0.999 4,标准偏差为0.026,变异系数为0.09%,回收率为99.85%。方法简便、快速、准确度高,可以满足乙氧基改性聚三硅氧烷的定性和定量分析。

Dear Editor,We report the results of cloning,expression,subcellular localization analysis,and molecular properties of the Epstein-Barr virus （EBV） BFRF3 gene,using several bioinformatics tools.Bioinformatics analysis indicated that the encoding protein of EBV BFRF3 gene （designated BFRF3） has a conserved Herpes c apsid domain,which was found to be closely related to the gammaherpesvirus capsid protein family,and is highly conserved among its counterparts.Multiple nucleic acid sequence and amino acid （aa） sequence alignments suggested that BFRF3 has a relatively higher homology