QingFei Yin (QFY), a Chinese traditional medicine recipe, is known for its excellent therapeutic pharmacological effects for the treatment of bacterial lung infections, although its molecular mechanism of action remains unknown. Here, QFY chemical composition was determined using a High-Performance Liquid Chromatography-Mass (HPLC-MS/MS)-based method then QFY was evaluated for protective pharmacological effects against pneumonia using two models: a Streptococcus pneumoniae-induced in vivo mouse model and an in vitro pneumolysin (PLY)-induced murine lung alveolar-derived MH-S cell line-based model. Notably, QFY exerted prominent anti-pneumonia effects both in vivo and in vitro. To further explore QFY protective effects, 4D label-free proteomics analysis, pathologic evaluation, and immunohistochemical (IHC) analysis were conducted to identify cellular pathways involved in QFY protection. Notably, our results indicated that NF-κB/NLRP3 and autophagy pathways may contribute to pharmacological effects associated with QFY-based protection. Briefly, QFY triggered autophagy via down-regulation of upstream NLRP3/mTOR signaling pathway events, resulting in the amelioration of inflammatory injury. Collectively, our results revealed molecular mechanisms underlying QFY protection against pneumonia as a foundation for the future development of novel treatments to combat this disease and reduce antibiotic abuse.

目的 建立北五味子商品饮片质量评价标准.方法 收集50批北五味子,以其杂质、水分、灰分、酸不溶性灰分、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素含量作为质量评价的内在指标.对外在指标与内在指标采用Person相关性分析确定分级指标.建立主成分分析模型,并与商品信息中的等级进行对比,确定等级划分模式.结果 建立北五味子商品等级划分数学评分模型,以五味子醇甲含量≥0.4％、颜色红色、无白霜、得分＞0者为一等品,五味子醇甲含量≥0.4％、颜色暗红色、有或无白霜、得分＜0者为二等品.结论 所建立的等级划分标准可用于综合评价北五味子饮片质量.

目的 阐明产地对射干水溶性成分影响.方法 采用高效液相色谱检测15批不同产地射干水溶性成分含量,并评价其相似度.化学模式识别及含量测定比较分析不同产地射干水溶性成分含量.结果 建立射干水溶性成分HPLC指纹图谱,确定12个共有峰,指认5个特征峰,北方产射干鸢尾苷含量低于南方产射干,野鸢尾苷和次野鸢尾黄素含量高于南方产射干.建立主成分分析模型,北方产射干得分普遍较高.结论 明确南北方产射干水溶性成分含量差异.

采用HPLC测定不同品种淫羊藿黄酮类即淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C4种有效成分含量,结合主成分分析对不同品种淫羊藿进行质量分析与评价,并考察淫羊藿对大鼠肾阳虚保护作用.将实验动物随机分为阳虚模型对照组(模型组)、金匮肾气丸干预组(阳性组)、淫羊藿低(125 mg/kg)、中(250 mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量组.四周后测定肾阳虚大鼠血清中尿酸(UA)、肌酐(CRE)和尿素氮(BUN).主成分分析结果显示,主成分1淫羊藿苷、朝藿定C和主成分2朝藿定B是影响样品质量评价的主要因子.12批淫羊藿药材整体质量较好.药理学结果显示,与空白组相比,大鼠血清中UA、CRE和BUN含量显著降低.上述结果表明:本方法同时测定淫羊藿黄酮类4种有效成分,为建立淫羊藿质量评价提供参考;淫羊藿对氢化可的松诱导的肾阳虚具有明显的保护作用,具有量效关系.

目的:建立芩连润肺汤的指纹图谱,测定其中11种成分的含量,并进行聚类分析、正交偏最小二乘判别法(OPLS-DA)分析.方法:采用高效液相色谱法(HPLC).色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18,流动相为乙腈-0.05％磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为260 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL.以汉黄芩苷为参照,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》绘制10批芩连润肺汤的HPLC指纹图谱并进行相似度评价,确定共有峰;同法测定芩连润肺汤中11种成分的含量;采用SPSS 21.0软件进行聚类分析,采用SIMCA 14.0软件进行有监督模式的OPLS-DA分析,并筛选影响其质量的标志物.结果:10批芩连润肺汤共有21个共有峰,与对照指纹图谱的相似度均大于0.98;共指认了11个共有峰,分别为芦丁、连翘酯苷A、连翘酯苷B、鸢尾苷、野鸢尾苷、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩苷、黄芩素、次野鸢尾黄素、汉黄芩素.上述11种成分检测进样量的线性范围分别为9.9600～49.8000、1.9740～9.8700、0.6720～3.3600、0.9600～4.8000、0.5490～2.7450、5.0400～25.2000、1.3740～6.8700、0.6150～3.0750、0.7599～3.7950、0.1620～0.8100、0.0420～0.2100μg(r均大于0.999);精密度、稳定性(48 h)、重复性试验的RSD均小于2％;平均加样回收率为95.81％～100.29％(RSD为0.43％～1.73％,n=6);含量分别为8.9244～12.8208、0.3522～0.8687、0.4356～0.7112、0.3898～1.3090、0.3358～0.5301、1.6805～4.5423、0.7018～1.5842、2.2402～5.4425、2.3510～5.5589、0.1060～0.1822、0.0768～0.1289 mg/g.聚类分析结果显示,当类间距为10时,10批样品可聚为两类,S1～S3聚为一类、S4～S10聚为一类;当类间距为5时,第2类又可聚为两类,S6、S7、S9聚为一类,S4、S5、S8、S10聚为一类.OPLS-DA分析结果显示,S6、S7、S9位于得分图的上方,S4、S5、S8、S10位于得分图的左下侧,S1～S3位于得分图的右下侧,与聚类分析结果一致;黄芩苷、鸢尾苷、连翘酯苷A、黄芩素、汉黄芩苷的变量重要性投影值均大于1.结论:所建指纹图谱、含量测定方法的精密度较高、稳定性较好,结合多元统计分析可用于芩连润肺汤的质量控制.黄芩苷等5种成分为影响芩连润肺汤的质量标志物.

目的:基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列建立一种新的PCR鉴定方法,以快速鉴别出梅花鹿、马鹿茸片与驯鹿茸片.方法:采集不同来源的鹿茸片共60批.通过比较梅花鹿、马鹿与驯鹿等其他伪品的COⅠ基因序列差异,根据SNP鉴别位点设计梅花鹿茸、马鹿茸同驯鹿茸的鉴别引物Cne-F、Rt-F、Co-R,并对影响聚合酶链反应(PCR)结果的主要因素变性时间、退火温度、退火时间、延伸时间等进行方法学考察和优化.结果:该实验构建的双位点特异PCR鉴别体系,基于COⅠ的鉴别位点,可通过PCR扩增获得294 bp的梅花鹿、马鹿特异片段,而产生514 bp的驯鹿特异片段,伪品及阴性对照无条带.结论:该实验建立对梅花鹿、马鹿及驯鹿等其他伪品鹿茸的PCR鉴别方法简便、可靠.

目的 采用高效液相色谱法建立鹿茸中核苷类成分指纹图谱,进行聚类分析与主成分分析,并比较梅花鹿鹿茸药材中6种核苷成分的差异.方法 采用高效液相色谱法对15批不同产地梅花鹿鹿茸进行测定,以甲醇-0.07％冰醋酸为流动相梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长为254 nm.运用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”2012版进行评价,并对6种核苷类成分进行含量测定.结果 建立了鹿茸核苷类成分HPLC指纹图谱,确定了6个共有峰构成鹿茸药材的特征峰,且方法学考察达到标准.结论 该法所建立的鹿茸核苷类指纹图谱特征性强、方法简便,结合6种核苷类成分含量测定可更好控制其质量,对梅花鹿鹿茸的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值.

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求.采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素.实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6h时提取效果最佳.本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中.

The antler regeneration has been well studied for the past two decades and adopted in the regenerative medicine model for studying on developmental biology. Despite our growing knowledge of functional molecules regulating antler regeneration, we still do not know whether antler from different deer species possess the exact same mechanism or not. Our previous comparative study between sika deer and red deer suggests that the metabolic pathways between them are profoundly different based on protein level. Therefore, the metabolomic technology is used to identify and quantify the metabolites in antler samples, providing interesting insights into differential metabolite profile of antlers between sika deer and red deer. The distinct metabolic characteristics of sika deer compared to red deer provide an opportunity to explain why the red deer antler with a larger size. The enrichment analysis of differential metabolites showed that three pathways including glycine and serine metabolism, methionine metabolism, and pterine biosynthesis had a significant difference between two antler groups.

目的 采用HPLC法建立鹿茸饮片指纹图谱,并测定核苷类成分含量,进行聚类分析与主成分分析(PCA),比较鹿茸饮片中6种核苷成分(尿嘧啶、腺嘌呤、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷)的差异.方法 采用HPLC法对16批不同批次鹿茸饮片6种核苷类成分进行测定,运用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)"进行评价,并结合PCA和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等化学计量学方法对4种饮片(蜡片、粉片、纱片和骨片)进行区分与比较.结果 建立了鹿茸核苷类成分HPLC指纹图谱,相似度均达 0.960以上,确定了6个共有峰(尿嘧啶、腺嘌呤、次黄嘌呤、尿苷、肌苷和鸟苷)构成鹿茸饮片的特征峰,尿嘧啶、次黄嘌呤和肌苷是差异性化合物,可作为鉴别和区分鹿茸饮片质量控制指标.结论 该法所建立的鹿茸核苷类成分指纹图谱特征性强、方法简便,结合 6种核苷类成分含量测定可更好控制其质量,对鹿茸饮片的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值.

目的:建立指纹图谱与一测多评(QAMS)结合的考察模式,验证该方法在中药质量评价中的准确性和可行性.方法:以鹿茸为研究对象,建立鹿茸核酸类成分的HPLC指纹图谱,以次黄嘌呤为参照物计算该成分与尿嘧啶、腺嘌呤、尿苷、肌苷、尿苷的相对校正因子,并计算含量,实现QAMS.同时对QAMS的计算值与外标法实测值进行比较,以确认QAMS法的可行性和科学性.结果:建立了鹿茸核酸类成分HPLC特征指纹图谱共有模式,标定了12个共有峰,指认了其中6个共有峰,15批鹿茸的相似度均大于0.95.15批鹿茸样品中6个主要成分的计算值与实测值无显著差异.结论:QAMS结合指纹图谱的质量控制模式在鹿茸中得到验证,该方法快速准确灵敏,可为鹿茸定量测定和指纹图谱质量控制提供参考.