为了解四川省兔出血症病毒2型(rabbit hemorrhagic disease virus type 2,RHDV2)的流行情况及分子遗传变异特征,采集全省范围内的7525份样品,其中发病兔场肝脏组织样品117份、环境拭子样品243份,受监测兔场血液样品3340份、环境拭子样品3825份,采用商品化荧光RT-PCR试剂盒,对以上样品进行RHDV2检测;对筛选出的12份肝组织阳性样品进行RHDV2 VP60基因RT-PCR扩增、测序和遗传进化分析.结果显示:RHDV2流行无明显季节性,各养殖品系家兔均有RHDV2感染,哺乳仔兔、幼兔、怀孕哺乳母兔死亡率分别为25％～60％、18％～45％、9％～30％.发病兔场肝脏样品RHDV2阳性检出率为88.89％(104/117),环境样品为46.09％(112/243);受监测兔场全血样品RHDV2阳性检出率为25.99％(868/3340),环境样品为16.29％(623/3825).12份阳性样品的RHDV2 VP60基因序列长度均为1740 bp,核苷酸序列同源性为98.4％～100％,在系统发生进化树上独成一簇;与国内外参照毒株的VP60基因序列核苷酸同源性为93.7％～100％,编码的氨基酸序列同源性为95.7％～99.8％.结果表明:RHDV2已开始在四川省流行,需要加强检疫,重视饲养管理工作;其VP60基因序列出现了一定程度的变异,但遗传演化相对稳定.本研究补充了国内RHDV2的分子流行病学信息,也为该病的相关防控研究和控制对策制定提供了参考.

为评估四川省规模场猪伪狂犬病(PR)发生风险,通过问卷调查了解省内种猪场、扩繁猪场、商品猪场的生产管理情况,用情景树法描述PR发生的风险路径,在世界动物卫生组织(OIE)风险评估框架下构建评估模型.根据问卷调查结果和本底调查数据,采用定性风险评估方式,用矩阵法估算各风险路径的风险值.结果显示,四川省规模场发生PR的高风险路径为引种、使用精液、未有效控制鼠害、未有效控制犬猫以及地理位置和饮水控制.近年来由于生物安全管理水平提高,经人、车、物、料等传统途径释放PR的风险大大降低,在各类型规模场开展PR净化的条件已较为成熟.在PR净化的同时开展风险评估,能帮助猪场找出风险漏洞,便于提出针对性的防控建议,为PR净化提供有力的技术支撑.

通过对2020年四川省高致病性猪蓝耳病免疫抗体(活疫苗)监测和病原学监测的调查结果和汇总数据进行分析,对比往年的监测数据,分析了四川省高致病性猪蓝耳病疫病的流行情况,以供相关人员参考.

为评估微流控芯片法在非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸快速检测中的各项性能,验证该方法的敏感性、特异性、重复性和临床效果,本研究将ASFV VP72质粒标准物质、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和伪狂犬病病毒(PRV)培养物各1份以及临床样本43份进行核酸提取,用ASFV微流控芯片快速检测试剂盒进行测试研究,并与市场上某品牌ASFV荧光定量PCR检测试剂盒进行比对.结果表明:微流控芯片法可以在15～30 min内,实现2.5 copies/μL的最低检出限,与荧光定量PCR具有相同的敏感性和重复性;同时该方法对CSFV、PEDV、TGEV、PCV2和PRV病毒培养物均无交叉反应,特异性良好;通过对43份临床样本测试显示,微流控芯片法与荧光定量PCR的临床符合率为97.67％(42/43).研究表明,微流控芯片法在ASFV核酸检测上性能良好.

为调查四川省猪群PRV野毒(也即流行株)的感染及其遗传进化情况,本实验对2019年～2020年来自四川省11个地区55个猪场的466份疑似PRV感染猪的不同组织样品进行了PRV gE基因的荧光定量PCR检测,并统计不同类型猪和不同地区猪PRV的感染情况.结果显示,当前四川省11个地区PRV总阳性率为10.94％(51/466),猪场阳性率为21.81％(12/55).其中,不同种类猪的阳性率分别为2.63％(2/76,公猪)、4.76％(2/42,哺乳仔猪)、11.26％(8/71,保育猪)、13.41％(11/82,妊娠母猪)、17.96％(23/128,育肥猪)、7.94％(5/63,后备猪).其中育肥猪PRV的阳性率极显著高于哺乳仔猪(p<0.01),妊娠母猪PRV阳性率显著高于公猪(p<0.05);不同地区PRV总阳性率为4％～21.21％.表明,PRV目前仍在四川多地区流行,且育肥猪较其他生长阶段的猪更易感.对其中12份gE基因阳性样品中PRV野毒的4个主要基因gB、gD、gC和gE进行克隆、测序和编码氨基酸序列的同源性分析,并构建gC和gE基因遗传进化树分析PRV的遗传进化特征.序列分析结果显示,12份PRV阳性样品中扩增的gB、gD、gC和gE全基因编码氨基酸序列之间的同源性分别为97.7％～98.9％(gB)、100％(gD)、99.2％～99.6％(gC)、98.4％～100％(gE);与NCBI已登录的所有PRV相应基因编码氨基酸的同源性分别为:95.31％～99.56％(gB)、98.8～100％(gD)、94.3％～99.8％(gC)、97.6％～100％(gE).上述结果表明,近年四川地区流行的PRV均发生了不同程度的变异;12株流行株的毒力蛋白出现多个独有氨基酸位点的突变或缺失;但gE蛋白仅有1～2个独有氨基酸位点突变,gD蛋白则无突变.表明,PRV流行株gE和gD蛋白相对较保守.gC和gE基因的遗传进化分析结果显示,本研究鉴定的PRV流行株均为基因Ⅱ型,与国内近年流行株及日本、韩国PRV株处于同一大分支,但与四川早期PRV流行株和欧美PRV株的遗传关系均较远,表明,近年该地区流行的PRV又出现了新的变异,且亚洲地区流行的PRV可能存在相似的遗传演化关系.本研究系统调查和分析了四川省11个主要地区PRV野毒感染情况和遗传进化特点,为四川省PR的防控和净化提供科学依据.

为了解四川地区猪源戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)的感染情况,采集四川13个地区屠宰场的358份生猪组织样品,采用荧光RT-PCR进行HEV检测,对阳性样品进行开放阅读框(open reading frame,ORF)两部分序列测序、同源性及系统进化分析.结果 显示:猪感染HEV的阳性率为4.75％,17个毒株ORF2部分序列之间同源率为85.4％～ 99.4％,均属于基因4型,其中4a亚型8株、4b亚型3株、4d亚型6株.与人、猪等不同宿主的HEV参考毒株比较,四川猪源HEV与我国主要流行的人源HEV遗传关系密切,其中10株与人源毒株同源率超过95％.结果 表明:四川地区生猪HEV流行毒株以基因4型为主,具有较大的人畜共患风险,应有针对性、系统性地对其进行预防和控制.

检测报告是实验室依据相关标准或技术规范开展检测工作后,根据准确、客观、真实的检测数据和结果所出具的格式规范的正式书面文件.兽医系统实验室的检测报告是实验室质量管理水平和检测能力最直接的体现,也为制定动物疫病防控政策、落实措施、处置疫情等提供科学的依据.《检验检测机构资质认定能力评价 检验检测机构通用要求》(RB/T 214-2017)对结果报告有明确要求,笔者在从事兽医系统实验室考核工作中,发现四川省各实验室出具的检测报告存在一些问题,本文就部分典型问题进行分析和探讨.

戊型肝炎是一种重要的人畜共患传染病,在世界各地广泛存在,猪是戊型肝炎病毒的重要宿主.猪感染后一般不表现出明显的临床症状,但HEV对人却有致死性感染,且猪感染HEV的现象十分普遍,严重威胁着人类的健康.因此,开展猪戊型肝炎的研究具有十分重要的公共卫生学意义.主要从猪戊型肝炎的病原学、猪群感染HEV的研究、诊断及防控措施等几个方面进行阐述,以期为该病的防控工作提供参考.

兔病毒性出血症2型(RHD2)是由兔出血症病毒2型(RHDV2)引起的家兔和野兔的高度传染性、急性致死性疫病.RHDV2目前主要在欧洲流行,引起的临床症状与经典兔病毒性出血症(RHD)相似,但毒株特性差异较大.2020年4月四川省两个兔场的家兔同时出现了疑似RHD症状,但用经典RHDV疫苗免疫后家兔发病及死亡情况均无好转.分别采集两个兔场的病死兔组织样品进行实验室诊断,使用OIE推荐的RHDV2特异性引物进行RT-PCR检测,两个发病兔场的兔组织混合样品均扩增出大小约800bp的片段.进一步的测序和Blast比对分析发现来自两个发病兔场的2条序列均与RHDV2参考毒株的VP60部分序列高度同源,其中同源性最高的是荷兰RHDV2分离株RHDV2-NL2016,分别为98.01％和97.95％.分析结果表明,报告发病的两兔场的病死兔均为RHDV2感染,这是我国首次官方确诊RHD2疫情.分别将两个兔场组织病料中的RHDV2毒株命名为SCADC-JT01和SCADC-JT02,有关这2株新毒株的毒株特性和基因组特征还有待进一步研究.

本试验以镧系元素铕(Eu)为荧光标记,用纯化的PRV-gE和PRV-gB表达蛋白抗原建立了检测猪伪狂犬病gE、gB抗体的镧系荧光免疫层析快检试剂盒.经特异性、敏感性、重复性试验及与同类产品的对比试验,得出该试剂盒特异性强、敏感性高、重复性好、符合率高,且质量稳定,保质期长,是实现猪伪狂犬病即时现场快速检测的一种血清学检测方法.

目的 了解四川地区不同生猪养殖模式场点猪源戊型肝炎的流行情况.方法 于2019-2020年在四川21个市州的规模化养殖场、散户收集了猪肛拭子800份、血清1600份,荧光RT-PCR检测、ELISA检测.结果 四川生猪HEV总体带毒率较低(10.25％,82/800),总体感染率较高(41.06％,657/1600),散户带毒率、感染率均高于规模化养殖场;不同经济区域之间,带毒率为川西北最高、川东北最低,感染率为攀西最高、川西北最低.结论 HEV感染在四川各地区健康猪群广泛存在,不同经济区域间带毒率和感染率存在差异.

档案管理是兽医系统实验室质量和生物安全管理的重要环节.目前,四川省各级兽医系统实验室发展相对落后,实验室档案管理较为混乱.依据质量管理和生物安全管理的要求,就兽医系统实验室如何进行档案管理进行探讨.

为了调查小反刍兽疫病毒四川简阳株(SCJY株)的分子遗传特征,我们对四川简阳发病羊鼻拭子中的小反刍兽疫病毒N基因进行了遗传进化分析.通过RT-PCR、克隆测序获得SCJY株N基因序列,使用DNASTAR软件将其与GenBank中的15条参考株序列进行同源性比对,使用MEGA6软件进行系统进化分析.结果显示:SCJY株N基因序列全长1578 nt,与参考株的核苷酸同源性为88.9％～100％,氨基酸同源性为92.8％～100％,与2013～2014年小反刍兽疫中国流行毒株高度同源;系统进化分析将16个毒株N基因划分为4个谱系,SCJY株属于Ⅳ系.

为了了解市场上不同毒株猪伪狂犬病活疫苗的稳定性和体液免疫效果,本试验对市场上销售的6种猪伪狂犬病活疫苗进行了稀释稳定性测试和免疫效力测试.结果显示:不同疫苗使用配套稀释液稀释后稳定性差异较大,稀释后常温放置1 h,有3种疫苗的病毒含量无变化,有2种疫苗的病毒含量下降约50％,稀释后常温放置4 h,稳定性差的疫苗的病毒含量仅为稀释前的14.79％,稀释后4 h 6种疫苗的病毒含量均高于疫苗参考标准;所有疫苗免疫后均能刺激仔猪产生特异性免疫抗体,不同疫苗间gB-ELISA抗体的产生规律基本一致;不同疫苗免疫后使用猪伪狂犬病毒2型XJ株测定中和抗体,发现仅1种疫苗的中和抗体较高,其余疫苗对猪伪狂犬病毒2型XJ株的中和能力较差,且中和抗体较差的疫苗在使用免疫增强剂后其中和抗体也无实质性提高.

非洲猪瘟疫情下生猪复养势在必行,而且需要立行.如何判定复养场基本条件达标,又将如何改进是摆在复养面前的首要抉择.如何彻底消毒,又将如何防控疫病侵入是摆在复养面前的两大难点.快速挑出病猪、分类集中诊疗、及时控制疫情等是复养过程中不可缺少的措施.

本试验以镧系元素铕(Eu)为荧光标记建立了检测猪蓝耳病病毒抗体的镧系荧光免疫层析快检试剂盒,经特异性、敏感性、重复性试验及与同类产品的比对试验,表明该试剂盒特异性强、敏感性高、重复性好、符合率高;且质量稳定,保质期长,是实现猪蓝耳病即时现场快速检测的简单而实用的血清学检测方法.

为了调查四川地区猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株的遗传多样性,试验对2017年于四川省12个地区分离的28株PCV-2进行全基因组扩增和测序分析,应用Lasergene 7.0和MEGA 6.0软件对分离株的全基因组序列进行比对并构建系统进化树,使用Clustal W方法对ORF2核苷酸和Cap蛋白氨基酸进行比对,并对Cap蛋白型特异性基序及抗原表位的突变情况进行比较分析.结果 表明:28株PCV-2四川分离株与参考株之间的同源性为93.9％～ 99.9％;在进化关系上,3株为PCV-2b基因亚型,24株为PCV-2d基因亚型,1株为重组毒株;PCV-2四川分离株ORF2核苷酸与参考株之间同源性为88.6％ ～ 100％,氨基酸同源性为85.9％ ～ 100％;PCV-2四川分离株的Cap蛋白型特异性基序及抗原表位在各自亚型内较为保守,在B细胞表位和T细胞表位分别发现9处、2处氨基酸替换,其中位于122 aa和169 aa处的突变值得注意.说明2017年四川省流行的PCV-2以PCV-2d亚型为主,也存在少数的PCV-2b亚型毒株,各亚型毒株变异程度较小,但也存在少量关键位置的氨基酸替换,另外还发现四川省存在PCV-2重组毒株.

细菌性传染病是生猪养殖业的严重威胁之一,近年来其发病情况呈现出新变化,对动物产品质量和公共卫生安全造成严重危害.对病原进行快速、准确的检测,是预防和控制猪病的有效手段,对养猪业发展和人畜健康具有重要意义.伴随生命科学技术的发展和学科间的交叉融合,传统的病原菌分离培养、普通PCR方法和早期免疫学等检测技术均朝着精确高效的方向不断发展革新,并以传统方法为基础建立了多种新型检测技术.文章重点介绍了猪细菌性传染病病原检测的几种新技术:以核酸分子生物学为基础的实时荧光定量PCR法(qPCR)、环介导等温扩增法(LAMP)、夹心DNA杂交(DNAH)等;以免疫学为基础的免疫胶体金标记技术、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、免疫磁珠分离法(IMS)等;以蛋白质分子生物学为基础的细菌质谱鉴定技术;以及适用于现场快速诊断的即时检测(POCT)技术,并分析了这几种新技术的优缺点,为不同条件的检测机构和研究部门在开展猪细菌性传染病检测和研究时选择相应的方法提供一定的参考,以期在猪病预防控制中发挥更加积极的作用.

1 复养可行性与复产改造 1.1 复养可行性 年出栏1000～3000头,公司+农场/户等类型的养殖场具有生物安全防护优势、管理优势、技术优势,有资金保障,具备较强的复养可行性.

1 调查目的 H7N9 流感是一种新型甲型流感,2013年 3月底在上海和安徽两地首次发现[1],是全球首次发现的新亚型流感病毒[2].该病毒可感染人,早期出现发热等上呼吸道临床症状,后期可致人死亡,目前尚未证实该病毒是否具有人传染人的特性[3].2016年底和2017年初,该病毒发生变异,出现了对禽致死率很高的高致病性毒株,给养禽业造成重大损失[4].为进一步了解H7N9 流感在四川省禽间流行和变异的情况,我们在全省范围内开展了 H7N9流感病毒的监测和流行病学调查,为科学防控和预防人感染H7N9流感提供重要的预警信息[5].