目的 筛选对多重耐药菌具有广谱抗性的放线菌,发掘新型抗生素,为人类和动物细菌性疾病防控提供物质储备.方法 采集江苏省部分地区土壤样品20份,稀释涂布于改良高氏一号固体培养基进行分离纯化,Chelex-100法提取放线菌基因组DNA,PCR测定16S rRNA基因序列,确定菌属.应用垂直条纹法检测放线菌对标准菌株和临床多重耐药分离菌株的抗菌效果;PCR检测放线菌抗菌活性和抗生素合成基因之间是否存在相关性;筛选抗菌活性最强的放线菌,检测不同时间抗菌物质释放量,测定临床分离病原菌的抗菌谱;基于16S rRNA基因确定其系统进化关系;对抑菌活性最好的放线菌进行基因组测序,应用antiSMASH在线工具分析次级代谢产物生物合成基因簇,预测其产生新颖次级代谢产物的潜力.结果 从20份土壤样品中分离纯化237株放线菌,分布于放线菌纲的10个目13个科19个属,优势菌属为链霉菌属,占分离总数的57.8％;抗生素合成基因检测实验表明放线菌的抗菌作用与抗生素合成基因的存在可能呈正相关;抗菌活性最强的链霉菌命名为Y94,在第七天产生具有抗菌活性的次级代谢产物最多;Y94产生的次级代谢产物对临床分离的238株不同种属的病原菌均有良好的抗菌效果;对Y94进行系统发育分析,结果表明其与甲酸链霉菌(Streptomyces formicae)lH-GS9的相似度为95.83％,可能为潜在新种;Y94全基因组中有多种抗生素相关的次级代谢产物基因簇,有巨大的生物合成潜能.结论 链霉菌Y94株具有抗多重耐药菌活性,可能属于1个新的种属,其抗菌活性物质可能是1种新的物质,具有潜在的开发价值.

2020年8月底,江苏省某猪场断尾、阉割仔猪出现大量急性死亡,病情持续2个月左右.为确诊引起死亡的原因,11月中旬,对送检的4只发病仔猪进行了剖检和实验室诊断.根据流行史、临床症状、剖检病变,以及心血涂片和脏器触片检查结果进行初步诊断,结合细菌和分子生物学检测结果进行确诊.结果显示:剖检病变多呈黄染、败血性变化,脏器触片检查观察到大量球形、圆形蓝紫色细菌;经16S rRNA序列比对,病变组织中分离、纯化的细菌被鉴定为溶血性葡萄球菌;心血涂片检查发现大量红细胞变形,呈星芒状、锯齿状和半月状等不规则形状,符合附红细胞体特征,且经PCR扩增出特异性条带.最终确诊,引起该规模猪场仔猪死亡的病因为附红细胞体与溶血性葡萄球菌混合感染.根据诊断结果针对性给药,5 d后该猪场疫情得到有效控制.本病例的诊断结合了现代分子生物学方法和经典检测方法,这对于混合感染的诊断有着重要作用.

从池塘中分离、纯化了1株具有极强溶血活性的革兰氏阴性杆菌BB2,在TSA培养基上菌落呈灰色、半透明圆形,经16S rRNA基因序列分析确定为色杆菌属,但无法确定到种;进一步全基因组测序结果表明,该菌株与GenBank中唯一的1株稻根色杆菌基因组同源性最高,但生物学特性又不一致.文献逆索发现其命名为稻根色杆菌主要是由于其分离于水稻根部,这对分类造成了困惑.最终依据细菌形态特征、生理生化特性、16S rRNA和全基因组序列分析及文献分析等综合信息,确定分离菌BB2为溶血色杆菌,这提醒研究者们在细菌鉴定时应谨慎使用GenBank数据序列数据,一定要对相关参考文献进行全面认真研读,获取必要的证据,为最终分类提供科学依据.本研究也为进一步研究该分离株的生物学特性和应用提供了参考和基础.

近年来,禽霉菌病对养禽业造成了一定的危害和损失.为了解当前禽霉菌病流行的主要病原体,于2020年6-7月在扬州大学动物医院畜禽门诊采集了3例确诊为鸡霉菌感染病例的肺脏病料,分离、培养、纯化获得霉菌分离株,并对其进行染色镜检观察和内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)扩增分析.结果显示:从3例病例中分离出2株黄曲霉菌、1株烟曲霉菌.结果表明,2020年6-7月该门诊中鸡曲霉菌病例存在黄曲霉菌或烟曲霉菌感染.

Hemagglutination inhibition (HI) and virus neutralization antibody (nAb) do not always correlate with the protection of H7 avian influenza vaccines in mammals and humans. The contribution of different classes of antibodies induced by H7N9 vaccines to protection is poorly characterized in chickens. In this study, antibody responses induced by both inactivated and viral-vectored H7N9 vaccines in chickens were dissected. Chickens immunized with inactivated H7N9 vaccine showed 50% seroconversion rate and low HI and nAb titers at week 3 post immunization. However, inactivated H7N9 vaccine elicited 100% seroconversion rate in terms of high levels of HA-binding IgG antibody determined by ELISA. Despite inducing low levels of nAb, inactivated H7N9 vaccine conferred full protection against H7N9 challenge in chickens and markedly inhibited virus shedding. Similarly, Newcastle disease virus (NDV)-vectored H7N9 vaccine induced marginal HI and nAb titers but high level of IgG antibody against H7N9 virus. In addition, NDV-H7N9 vaccine also provided complete protection against H7N9 challenge. Chicken antisera had a high IgG/VN ratio, indicating that a larger proportion of serum antibodies were non-neutralizing antibody (non-nAb). More importantly, passive transfer challenge experiment showed that non-neutralizing antisera provided partial protection (37.5%) of chickens against H7N9 challenge, without significant difference from that provided by neutralizing antisera. In conclusion, our results suggest that antibodies measured by the traditional HI and virus neutralization assays do not correlate with the protection of inactivated and viral-vectored H7N9 vaccines in chickens, and HA-binding non-nAb also contributes to the protection against H7N9 infection. Total binding antibody can be used as a key correlate to the protection of H7N9 vaccine.