A key aspect of cystic fibrosis pathophysiology is the significant role played by neutrophils, central to the inflammatory response in cystic fibrosis airways. Neutrophil-dominated inflammation greatly influences clinical outcomes, including airway damage and lung function decline. People with cystic fibrosis have an increase in circulating neutrophils that exhibit numerous functional and phenotypic abnormalities. We used spectral flow cytometry to delineate the expression of 24 cell surface markers on neutrophils from 24 healthy donors and 45 adults with cystic fibrosis, before and after elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor treatment. This comprehensive analysis examined phenotypic markers associated with fundamental neutrophil functions, including differentiation, maturity, activation, antimicrobial activities (degranulation, pathogen sensing and chemotaxis), metabolism, and immunomodulation. Prior to treatment, neutrophils from adults with cystic fibrosis displayed a phenotype suggestive of immune activation and metabolic aberration. Treatment with elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor normalized a FPR1high/CXCR2high subset, an observation consistent with enhanced pathogen-sensing capacity. The treatment, however, failed to restore fully normal phenotypes in cystic fibrosis neutrophils but rather induced the modulation of a PD-L1high/CD114high/GLUT-1high subset of mature neutrophils with an increased expression of PD-L1 and adhesion molecules such as CD11c and CD11b. Taken together, our data reveal a specific immunophenotypic signature of neutrophils in cystic fibrosis that is further modified by treatment with elexacaftor-tezacaftor-ivacaftor, suggesting the opportunity for developing adjunctive therapies to enhance beneficial antimicrobial subsets while simultaneously mitigating immunosuppressive phenotypes, thereby opening new perspectives for immune modulation in cystic fibrosis treatment.

AIMS:We examined the predictive value of soluble levels of triggering receptor expressed on myeloid cells 1 (sTREM-1) for incident cardiovascular disease (CVD). METHODS:The main analysis was conducted in an observational prospective cohort. Adjudicated CVD events included coronary heart disease, stroke, heart failure and peripheral artery disease. sTREM-1 measures were centralized using a protocol optimized for Meso Scale Discovery technology. RESULTS:Among 9097 CVD-free participants (39% females, mean age 59.6±6.3 years), median sTREM-1 concentration was 193.41 pg/mL (IQR= 158.13 to 241.54) at baseline (2008 to 2012). Over 10.1 years of median follow-up (IQR= 9.2 to 12.0), 444 participants experienced 479 CVD events. Higher sTREM-1 concentrations were associated with higher risk of CVD in multivariable Cox proportional hazard model (HR 200-290 vs. <200pg/ml= 4.25;95% CI:3.20 to 5.63 and HR >290 vs. <200pg/ml=10.40;95% CI:7.72 to 14.02). Results were consistent across CVD subtypes. Adding sTREM-1 to SCORE2-SCORE2 OP improved the Harell-C index (C-index 0.79 vs. 0.71; bootstrapped C index difference: 0.084; 95% CI: 0.083 to 0.085) overall including among individuals at low to moderate 10-year risk of CHD or stroke, and reclassification: categorical NRI: 0.34; 95% CI: 0.28 to 0.40. Findings were similar with other recommended risk scores. CONCLUSIONS:In this prospective study, higher circulating sTREM-1 levels were independently associated with incident CVD. Addition of sTREM-1 to established risk scores was associated with improvements in discrimination and reclassification metrics, supporting its potential relevance as a candidate biomarker for further evaluation in primary prevention.

Chordoid glioma (ChG) is a rare, low-grade brain tumor characterized by a novel recurrent point mutation, D463H, in the kinase domain of protein kinase C alpha (PKCα). The mutation is invariably an Asp to His substitution, suggesting a unique function beyond catalytic inactivation associated with other cancer-associated PKCα mutations. Here, we show that this mutation converts PKCα into a pseudokinase, abolishing catalytic activity, and, additionally, confers novel scaffolding functions. Activity assays in vitro and in cellulo revealed that PKCαD463H is catalytically inactive and functions as a dominant-negative to suppress endogenous PKC activity. Molecular dynamics simulations predicted that mutation to His, but not Asn, not only destabilizes the active site, but stabilizes the substrate-binding helices in the kinase C-lobe to potentially promote aberrant interactions. Supporting this, phosphoproteomic, proximity labeling, and coimmunoprecipitation mass spectrometry data from cells overexpressing PKCαD463H identified both altered phosphorylation of substrates and binding to multiple proteins involved in cell-cell junctions compared to WT enzyme. Last, single nuclei RNAseq established that ChG derives from specialized tanycytes. Our data reveal that this disease-defining, fully penetrant mutation converts PKCα into a pseudokinase with novel scaffold functions that uniquely rewire the cellular interactome to impair cell junction function.

IntroductionThe treatment of chronic viral infections can often bring viral replication under control. However, chronic immune activation persists and can lead to the development of comorbid conditions, such as cardiovascular disease and cancer. This is particularly true for people living with HIV (PLWH), who have significantly more extracellular vesicles from membrane budding, also called plasma microparticles (MPs), than healthy individuals (HDs), and a much more immunomodulatory phenotype. We hypothesized that the number and phenotypic heterogeneity of MPs can trigger a functional remodeling of immune responses in PLWH, preventing full immune restoration.MethodsWe investigated the rapid impact of three types of MPs — derived from membrane budding in platelets (CD41a+ PMPs), monocytes (CD14+ MMPs) and lymphocytes (CD3+ LMPs) in the plasma of PLWH or HDs—on four cell types (CD4+ and CD8+T lymphocytes, monocytes and DCs).ResultsThese investigations of the short multiple interactions and functions of MPs with these cells revealed an increase in the secretion of cytokines such as IFNg, IL2, IL6, IL12, IL17 and TNFa by the immune cells studied following interactions with MPs. We show that this functional remodeling of immune cells depends not only on the number, but also on the phenotype of MPs.ConclusionThese data suggest that the large numbers of MPs and their impact on functional remodeling in PLWH may be incompatible with the effective control of chronic infections, potentially leading to chronic immune activation and the onset of comorbid diseases.

Adrenocortical carcinomas (ACC) are aggressive and resistant to medical treatment. This study reports a single-nucleus transcriptome atlas of steroid and microenvironment cells in 38 human normal adrenals and adrenocortical tumors. We identify intermediate-state cells between glomerulosa and fasciculata, a transition state in the centripetal trans-differentiation of normal steroid cells. In tumors, steroid cells show expression programs reflecting this zonation. Although ACC microenvironment is scarce, its signatures combine with those of steroid cells into ecotypes. A first ecotype combines cancer-associated fibroblasts, tumor-associated endothelial cells, with hypoxia and mitosis signatures in steroid cells. Another ecotype combines exhausted T cells, with fasciculata steroid signature. These ecotypes are associated with poor survival. Conversely, a third ecotype combines inflammatory macrophages, with reticularis steroid signature, and better outcome. These steroid/microenvironment cells interplays improve outcome predictions and may open therapeutic options in aggressive ACC, through immune microenvironment activation by modulating glucocorticoids/androgens balance.

Neutrophils are central mediators of the hyperinflammatory response in severe SARS-CoV-2 infection. We report elevated cytosolic levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in neutrophils from patients with severe and critical COVID-19, correlating with enhanced NADPH oxidase-dependent reactive oxygen species (ROS) generation and neutrophil extracellular trap (NET) formation. Using T2AA, a small-molecule inhibitor of the PCNA scaffold, we demonstrate potent suppression of NADPH oxidase activation and NET release, particularly in response to SARS-CoV-2 RNA. Mechanistically, we identify a previously unrecognized interaction between PCNA and the heterodimeric S100A8/S100A9 (calprotectin), predominantly enriched in CD16highCD62Llow neutrophils expanded during COVID-19. PCNA binds the dimeric S100A8/S100A9 complex mediated via S100A8 subunit with micromolar affinity, and this interaction is abrogated by tetramerization, suggesting regulation by intracellular calcium. Disruption of this complex by T2AA inhibited ROS production in an S100A8/S100A9-dependent manner, implicating calprotectin as a functional regulator of neutrophil activation. In a betacoronavirus mouse model, T2AA treatment attenuated lung inflammation, reduced NET and calprotectin levels, and shifted pulmonary neutrophils away from hyperactivated and immunosuppressive phenotypes, consistent with immune reprogramming toward resolution. These findings establish cytosolic PCNA as a central scaffold in neutrophil hyperactivation during COVID-19 and highlight its pharmacological disruption as a promising host-directed strategy to limit inflammation and prevent organ damage.

Chordoid glioma (ChG) is a rare, low-grade brain tumor characterized by a novel recurrent point mutation, D463H, in the kinase domain of protein kinase C alpha (PKCα). The mutation is invariably an Asp to His substitution, suggesting it endows a unique function beyond catalytic inactivation associated with other cancer-associated PKCα mutations. Here we use in vitro and in cellulo activity assays to show that PKCα D463H is catalytically inactive, functions as a dominant-negative mutant to suppress endogenous PKC and uniquely rewires the cellular interactome. Specifically, phosphoproteomic, proximity labeling, and co-immunoprecipitation mass-spectrometry data from cells overexpressing PKCα D463H identify altered phosphorylation of substrates and binding to multiple proteins involved in cell-cell junctions compared to WT enzyme. Lastly, single nuclei RNAseq reveals that ChG derives from specialized tanycytes. Our data suggest that this disease-defining, fully penetrant mutation promotes neomorphic non-catalytic scaffolding to impair cell junction function.

IntroductionThe immunological profiles of CD4+ T lymphocytes (TLs) from patients with hematological malignancies differ between patients who have and have not received transfusions. There may be several reasons for these differences, including the presence of extracellular vesicles (EVs) derived from plasma membrane budding and present in the platelet concentrates. Indeed, EVs can modulate the immune system through interactions with many immune cells, but the underlying mechanisms remain incompletely understood.MethodsWe therefore investigated how interactions with CD41a+ EVs cause immune cells to change phenotype and function. CD41a+ EVs were cultured with TLs, B lymphocytes, and monocytes. Given the potential involvement of monocytes in leukemia progression, we performed a new original multi-omics study to confirm the protein changes and gene activation observed following interaction with CD41a+ EVsResultsThe CD41a+ EVs had immunomodulatory effects on all these cell types but this effect depended on the numbers of EVs. CD4+ TLs required large numbers of CD41a+ EVs for activation, whereas monocytes were the most sensitive. With the new multi-omics technique, we confirmed the direct effects of CD41a+ EVs on protein phenotype and gene activation.ConclusionTransfusion EVs should be considered during the immunological follow-up of patients after transfusion to detect immunological effects on malignant hemopathies, and during the development of new immunotherapies.

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IntroductionAu cours du cancer du poumon (CP), des études ont mis en évidence le rôle de sous-populations de neutrophiles (PNN) dans la progression tumorale, mais peu se sont attachées à comprendre la relation entre phénotype et fonctions des PNN dans ce contexte.MéthodesVingt-sept patients (pts) atteints de cancer bronchique pulmonaire non à petites cellules (CBNPC), 21 adénocarcinomes, 4 épidermoïdes et 2 indifférenciés, de stade IV étaient recrutés, dont 10 avec addiction oncogénique (AO), et 17 contrôles issus de l’Établissement français du sang. Une étude phénotypique par cytométrie spectrale (Aurora) avec un panel de 24 marqueurs était réalisée sur sang total. Une étude de l’apoptose des PNN était réalisée sur PNN isolés par cytométrie en flux après marquage par l’annexine-V/7AAD couplée à une analyse par Western blot des protéines impliquées dans la survie et la glycolyse. Parmi les pts sans AO, les données des pts survivants à 1 an (S1, n=9) étaient comparées à celles des pts décédés avant 1 an (D1, n=8).RésultatsLe nombre de PNN et le ratio PNN sur lymphocyte (NLR) avant traitement étaient plus élevés chez les pts que chez les contrôles. Ils diminuaient significativement à 3 mois dans le groupe S1 mais pas dans le groupe D1 (Fig. 1A et B). L’étude cytométrique montrait une baisse des marqueurs de maturité (CD10et CD13), une augmentation des récepteurs au G-CSF (CD114) et au glucose (GLUT1) chez les pts par rapport aux contrôles. L’augmentation de l’expression de ces récepteurs était significativement plus importante dans le groupe D1par rapport au groupe S1. L’analyse par double marquage CD16/CD62L montrait une baisse de la population CD16hi/CD62Lhi au profit des populations CD16hi/CD62Llo et CD16lo/CD62Lhi. L’augmentation de CD16hi/CD62Llo, décrite comme immunosuppressive dans l’inflammation aiguë, était très augmentée chez D1alors que CD16lo/CD62Lhi, considérée comme phagocytaire, était plutôt augmentée chez S1. Une comparaison par analyse non supervisée entre les groupes S1, D1et les contrôles révélait une population de PNN exprimant fortement CD114hi/GLUThi/CXCR2hi/PDL1hi dans le groupe D1par rapport aux contrôles. L’analyse de l’apoptose montrait que les PNN des pts avaient une survie augmentée associée à une augmentation de l’expression de PCNA, de NAMPT et de certaines enzymes de la glycolyse (ENO1 et LDH-B) par rapport aux contrôles.ConclusionIl existait une augmentation des populations CD16lo/CD62Lhi et CD16hi/CD62Llo chez les pts corrélée à un mauvais pronostic [1]. L’identification de cellules plus immatures, exprimant d’avantage le récepteur au G-CSF (CD114) et le récepteur au glucose (GLUT1) suggère une reprogrammation des PNN. Il existait une surexpression de PCNA cytosolique ainsi que de ses protéines partenaires NAMPT et enzymes de la glycolyse (comme l’enolase) associée à une survie accrue des PNN [2]. Nos résultats suggèrent qu’il existe une reprogrammation métabolique des PNN circulants de mauvais pronostic.

Objectif La classification transcriptome sépare les tumeurs bénignes (cluster « C2 ») des corticosurrénalomes et identifie deux groupes de corticosurrénalomes, « C1A » (signature stéroïde et prolifération), de mauvais pronostic, et « C1B » (signature immune), de pronostic bien meilleur. Ces signatures étant définies à l’échelle du tissu (« bulk »), la composition et le rôle du microenvironnement tumoral restent peu connus. L’objectif de cette étude est de réaliser l’atlas cellulaire des corticosurrénalomes. Patients et méthodes Nous avons construit un atlas cellulaire à partir du transcriptome (10×) des noyaux de ∼ 170 000 cellules de surrénales normales (n=4), tumeurs bénignes (n=14) et corticosurrénalomes (n=20). Nous avons ensuite estimé la proportion des différents types cellulaires (Cibersortx) dans des données de transcriptome « bulk » de 201 corticosurrénalomes, afin de définir des « écotypes » tumoraux par clustering consensus et tester leur association avec la survie. Résultats Nous identifions trois écotypes tumoraux associés à la survie. Un premier écotype combine une signature de cellules endothéliales associées aux tumeurs (TEC) avec des signatures d’hypoxie et de mitoses dans les cellules stéroïdes. Un deuxième écotype combine une signature d’épuisement des lymphocytes T, avec une signature stéroïde fasciculée. Ces écotypes sont associés à « C1A » (p<10−15) et à un mauvais pronostic (log-rank p<10−9). Un troisième écotype combine une signature de macrophages inflammatoires « M1-like » avec une signature stéroïde réticulée et est associé à « C1B » et à un meilleur pronostic (log-rank p<10−7). Discussion Les signatures des cellules stéroïdes et du microenvironnement s’agrègent en écotypes tumoraux pronostiques, et confirment la partition C1A/C1B des corticosurrénalomes.

IntroductionPeople living with HIV (PLWH) now benefit from combined antiviral treatments that durably control viral replication. These antiretroviral treatments decrease mortality and improve quality of life in PLWH, but do not completely control the excessive non-specific activation of the immune system in PLWH. This chronic immune activation is a key element of HIV immunopathology that contributes to the pathophysiology of inflammatory comorbid conditions, such as cardiovascular disorders, cancer and autoimmune diseases. Circulating non-exosomal extracellular vesicles, also known as microparticles (MPs) are detected in these diseases and have been linked to immune activation. The objective of this study was to characterize the MPs present in PLWH and to assess their association with chronic immune activation.MethodsWe performed flow cytometry for the complete phenotypic characterization of MPs from fresh plasma from PLWH and from people without HIV as the control group. The absolute number, size and cellular origin of MPs were evaluated. The immunoregulatory profile was determined by cell origin, for MPs derived from platelets (PMPs), monocytes (MMPs) and T lymphocytes (LMPs).ResultsPLWH had significantly more circulating MPs than controls, for MPs of all sizes originating from T lymphocytes, red blood cells, neutrophils, dendritic cells, B lymphocytes and endothelial cells. PMPs and MMPs were not more numerous in PLWH, but the immunoregulatory phenotypes of these MPs differed between PLWH and controls. These differences in immunoregulatory molecule expression profile were also observed for LMPs. PDL1, ICOSL, CCR5, TGFβ1, MHC classes I and II, TRAIL, CXCR4, OX40, DC-SIGN, CTLA4 and PDL2 were more strongly expressed on the surface of MPs from PLWH than on those from controls.ConclusionMPs are an important element in intercellular communication, making it possible to transfer phenotypes and functions to immune cells. The significantly higher numbers of MPs expressing diverse immunomodulatory molecules in PLWH may make a major contribution to the maintenance and/or the development of immune-cell activation in these individuals.

Au cours du cancer du poumon, des études ont mis en évidence le rôle de sous-populations de neutrophiles (PNN) dans la progression tumorale, mais peu se sont attachées à comprendre la relation entre phénotypes et fonctions des PNN dans ce contexte. Au total, 27 patients (pts) atteints de CBNPC : 21 adénocarcinomes, 4 épidermoïdes et 2 indifférenciés, de stade IV, naïfs de tout traitement, étaient recrutés ; dont 11 avec addiction oncogénique (AO). Les contrôles étaient des donneurs sains (n = 17) issus de l'Établissement français du sang. Une étude phénotypique par cytométrie spectrale (Aurora®) avec un panel de 24 marqueurs était réalisée sur sang total. Une étude de l'apoptose des PNN était réalisée sur PNN isolés par cytométrie en flux après marquage par l'annexine-V/7AAD couplée à une analyse par western blot des protéines impliquées dans la survie (PCNA et NAMPT) et la glycolyse (PGK, ENO-1, PK…). Parmi les pts sans AO, les données des pts vivants (n = 8) étaient comparées à celles des pts décédés à 1 an (n = 8). Le nombre de PNN et le ratio PNN sur lymphocyte (NLR) avant traitement étaient plus élevés chez les pts que chez les contrôles. Ils ne diminuaient pas significativement à 3 mois chez les pts décédés, contrairement chez les pts vivants. L'étude cytométrique montrait une baisse des marqueurs de maturité (CD10et CD13), une augmentation des récepteurs au G-CSF (CD114) et au glucose (GLUT-1) chez les pts par rapport aux contrôles. L'expression de ces récepteurs était significativement plus élevée chez les pts décédés par rapport aux patients vivants. Le double marquage CD16/CD62L montrait une baisse de la population CD16high/CD62Lhigh au profit des populations CD16high/CD62Llow et CD16low/CD62Lhigh chez les pts atteints de CBNPC par rapport aux contrôles. L'augmentation de CD16high/CD62Llow, décrite comme immunosuppressive dans l'inflammation aiguë, était significativement augmentée chez les pts décédés alors que CD16low/CD62Lhigh, considérée comme phagocytaire, était significativement augmentée chez les pts vivants. Chez les patients sans AO, une analyse non supervisée, montrait chez les pts décédés par rapport aux contrôles une population de PNN exprimant fortement CD114high/GLUT-1high/CXCR2high/PD-L1high. Les PNN des pts avaient une viabilité augmentée par rapport aux contrôles, associée à une augmentation de l'expression de PCNA, de NAMPT et de certaines enzymes de la glycolyse (ENO-1 et LDH-B) (Figure 1). Il existait une augmentation des populations CD16low/CD62Lhigh et CD16high/CD62Llow chez les pts par rapport aux contrôles, corrélée au pronostic [1]. L'identification de cellules plus immatures, exprimant d'avantage le récepteur au G-CSF (CD114) et le récepteur au glucose (GLUT-1) suggérait une reprogrammation des PNN. Il existait une surexpression de PCNA cytosolique ainsi que des protéines partenaires NAMPT et enzymes de la glycolyse (comme l'enolase) associée à une viabilité accrue des PNN [2]. Nos résultats suggèrent qu'il existerait une reprogrammation métabolique des PNN circulants de mauvais pronostic.

In Streptococcus pyogenes, the type II fatty acid (FA) synthesis pathway FASII is feedback-controlled by the FabT repressor bound to an acyl-Acyl carrier protein. Although FabT defects confer reduced virulence in animal models, spontaneous fabT mutants arise in vivo. We resolved this paradox by characterizing the conditions and mechanisms requiring FabT activity, and those promoting fabT mutant emergence. The fabT defect leads to energy dissipation, limiting mutant growth on human tissue products, which explains the FabT requirement during infection. Conversely, emerging fabT mutants show superior growth in biotopes rich in saturated FAs, where continued FASII activity limits their incorporation. We propose that membrane alterations and continued FASII synthesis are the primary causes for increased fabT mutant mortality in nutrient-limited biotopes, by failing to stop metabolic consumption. Our findings elucidate the rationale for emerging fabT mutants that improve bacterial survival in lipid-rich biotopes, but lead to a genetic impasse for infection.

AbstractInStreptococcus pyogenes, the type II fatty acid (FA) synthesis pathway FASII is feedback- controlled by the FabT repressor bound to an acyl-Acyl carrier protein. Despite FabT defects being linked to reduced virulence in animal models, spontaneousfabTmutants arisein vivo. To resolve this paradox, we characterized the conditions and mechanisms that require FabT activity, and those that promotefabTmutant emergence. The primaryfabTmutant defect is energy dissipation: specific nutrients are consumed, but the mutant fails to grow on human tissue, cells, or cell filtrates where nutrients are limited. These features explain the FabT requirement during infection. Conversely,fabTmutants exhibited a marked growth advantage over the wild-type in biotopes rich in saturated FAs.fabTmutants emerge in this context, where continued FASII activity prevented environmental FA incorporation. Anex vivomuscle model demonstrated that wild-typeS. pyogeneswas inhibited, whilefabTmutant growth was stimulated, but conditional to FASII activity. Our findings elucidate the rationale for emergingfabTmutants that improve survival in lipid-rich biotopes, but lead to a genetic impasse for infection.

Les corticosurrénalomes sont des cancers agressifs de pronostic hétérogène. La classification transcriptome distingue deux groupes, « C1A » (signature stéroïde et prolifération), de mauvais pronostic, et « C1B » (signature immune), de pronostic meilleur. Ces signatures étant définies sur un broyat tissulaire (« bulk ») où les cellules stéroïdes sont majoritaires, la composition du microenvironnement tumoral reste peu connue. L’objectif de cette étude est de caractériser le microenvironnement des corticosurrénalomes par l’étude du transcriptome à l’échelle unicellulaire (« single-cell »). Nous avons construit un atlas cellulaire à partir du transcriptome (10 × ) des noyaux de ∼170 000 cellules de surrénales normales (n = 4), tumeurs bénignes (n = 14) et corticosurrénalomes (n = 20). Nous avons ensuite estimé la proportion des différents types cellulaires (Cibersortx) dans des données de transcriptome “bulk” de 201 corticosurrénalomes pour analyser leur association avec la sécrétion glucocorticoïde et la survie. Le microenvironnement comprend des cellules endothéliales (5,1 %), des fibroblastes (4,6 %), des macrophages (9,9 %) etdes lymphocytes T (1,2 %), avec des signatures tumorales typiques dans les corticosurrénalomes : fibroblastes associés aux cancers (PDGFRB/FN1), cellules endothéliales associées aux tumeurs (ANGPT2/VWF) et macrophages associés aux tumeurs (CD163/F13A1). Par rapport aux « C1A », les corticosurrénalomes « C1B » sont enrichis en macrophages inflammatoires. Cette population infiltre préférentiellement les tumeurs non sécrétantes (t-test p < 10-5) et s’associe à une survie plus longue (logrank p < 10-7). Cette étude est la première description du transcriptome “single-cell” des corticosurrénalomes. Les macrophages inflammatoires sont réprimés dans les corticosurrénalomes de mauvais pronostic (« C1A »), potentiellement par la sécrétion de glucocorticoïde, ce qui pourrait conduire à l’échappement au système immunitaire.

La myosite induite par les inhibiteurs de points de contrôle immunitaire (ICP) est une toxicité rare et grave dont la physiopathologie est partiellement connue. Les ICP sont utilisés en oncologie pour restaurer l’immunité antitumorale en levant l’inhibition de l’activité cytotoxique des lymphocytes T CD8+. L’objectif de ce travail est d’étudier les mécanismes physiopathologiques intratissulaires impliqués dans la survenue des dommages musculaires dans les myosites induites par ICP. Dix biopsies musculaires réalisées à visée diagnostique (n = 5 myosites induites par ICP et n = 5 contrôles sains) ont été étudiées en transcriptomique spatiale (Visium, 10x Genomics). Quatre biopsies musculaires ont été étudiées en transcriptomique en cellule unique après digestion enzymatique et mécanique du tissu et tri des cellules CD45+. Une validation des populations immunitaires intratissulaires a été faite par immunofluorescence et cytométrie de flux. Enfin, des expériences in vitro de stimulation par ICP ont été réalisées sur des infiltrats inflammatoires issus de biopsies musculaires (n = 8 myosites induites par ICP). Les analyses transcriptomiques in situ et unicellulaires de patients atteints de myosite ont permis d’identifier des populations lymphocytaires T CD4+ et CD8+ cytotoxiques contribuant aux dommages musculaires des myosites induites par ICP. En particulier, une population lymphocytaire T CD8+ résidente mémoire (CD69+ CD103+) a été mise en évidence en analyse transcriptomique et confirmée par immunofluorescence et par cytométrie de flux. Connues comme des cellules importantes pour l’immunosurveillance des sites muqueux, ces cellules expriment des points de contrôle immunitaire et sont productrices d’IFNγ et des molécules cytotoxiques (granzyme B, perforine), ce qui suggère leur rôle potentiel en tant que déclencheur de la toxicité. L’exposition in vitro des T CD8+ musculaires à un traitement par ICP induit une augmentation de leur cytotoxicité. De plus, ces cellules T CD8+ résidentes mémoires sont présentes plusieurs mois après la résolution de la myosite et également au sein du tissu musculaire sain. Ces travaux soulignent l’importance des lymphocytes T résidents mémoires dans la survenue de la myosite induite par les ICP, ce qui ouvre la voie à de nouvelles cibles thérapeutiques. Au-delà de cette situation pathologique, la découverte de T CD8+ résidents mémoires dans le muscle normal soulève la question de leur implication dans l’homéostasie tissulaire et ouvre des perspectives dans de nombreux domaines impliquant le muscle tels que la régénération musculaire, la thérapie génique musculaire ou les vaccins.