毒理基因组学(toxicogenomics,TGx)是将基因组学应用于毒理学的一门新兴学科,其主要研究基因表达与环境污染物之间的关系,它一方面深入到分子生物学的角度对毒理学进行研究,另一方面,它还可以对致毒机制提供海量信息.毒理基因组学对毒理学的发展起到了很大的推动作用,推动免动物试验在管理毒理学中的应用.本文将讨论体外TGx系统及其对风险评估的潜在影响,使人们认识到由基因组技术发展产生的新的基因组特征促进了风险评估的发展;本文重点强调在管理毒理学中应用TGx测试时结果可重复性的重要意义,同时也强调机器学习在开发基于TGx的预测模型中的作用;接下来阐述TGx方法如何推动有害结局路径(adverse outcome pathways,AOP)策略在毒理学中的发展,并进一步推动其在监管中应用;最后,本文总结目前基于TGx进行风险评估所做的努力,以及未来面临的挑战.
大气细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)是重要的环境健康危险因素.PM2.5暴露对包括肺部感染,异常肺功能和肺癌在内的呼吸系统疾病产生重要影响.目前已经提出了参与PM2.5不良作用的几种机制,包括氧化应激、DNA损伤、炎症反应和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)等[1-2].其中,EMT在多种细胞命运决定和转移过程中发挥重要作用,引起广泛关注.有机物是PM2.5的重要化学组分,其在健康相关研究最多的是多环芳烃(Polycyclic aromatic hydrocarbon,PAHs)及其衍生物.
目的 探讨β-榄香烯对分化型甲状腺癌细胞TPC-1131碘(Ⅰ)敏感性的影响及相关机制.方法 将TPC-1细胞随机分为对照组、131I组、β-榄香烯组和131I+β-榄香烯组.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测TPC-1细胞存活率,克隆形成实验检测TPC-1细胞克隆形成数,流式细胞术检测TPC-1细胞凋亡率,Hoechst 33258染色检测TPC-1细胞凋亡形态,Transwell检测TPC-1细胞迁移水平,蛋白免疫印迹(Western blot)检测TPC-1细胞细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、p-p65、p65、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)和核因子κB抑制蛋白α(IKBα)蛋白表达水平.结果 对照组、131I组、β-榄香烯组、131I+β-榄香烯组的细胞存活率依次是100.00％±0.00％、83.69％±15.13％、91.35％±14.30％和 56.13％±9.05％,克隆形成数依次是 507.19±72.31、421.25±65.43、453.30±79.80和317.71±53.24.与对照组比较,131I组TPC-1细胞存活率、克隆形成数、迁移数和CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9 水平明显降低(P＜0.05),凋亡率和 p21、Bax、p-p65/p65、p-IKBα/IKBα 水平明显增加(P＜0.05),与131I 组比较,[3]I+β-榄香烯组TPC-1细胞存活率、克隆形成数、迁移数和CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-p65/p65、p-IKBα/IκBα水平明显降低(P＜0.05),凋亡率和p21、Bax水平明显增加(P＜0.05).对照组和β-榄香烯组细胞核呈均匀的淡蓝色,131I组和131I+β-榄香烯组细胞核出现碎裂、浓缩、染色呈亮蓝色等凋亡特征,且131I+β-榄香烯组的凋亡特征更明显.结论 榄香烯可提高TPC-1细胞131I敏感性,其机制可能与β-榄香烯抑制131I引起的核因子κB(NF-κB)信号通路激活有关.
镉(Cadmium)是一种对环境和人类健康威胁巨大的有毒重金属,生物半衰期长达10～35年[1].中国是世界上镉储量最丰富的国家,镉在电镀、油漆、颜料、电池、照相材料和陶瓷等行业广泛应用.随着工业的发展,含镉的有害物质越来越多地随工业废水、废气及废渣污染环境.环境中的镉进入人体后逐渐积累,而肝和肾作为主要的蓄积器官,损伤尤为严重[2].日本"痛痛病事件"的患者肝纤维化发生率明显升高,可能与持续性的镉暴露导致肝蓄积有关[3-4].动物试验也发现,大鼠长期暴露于氯化镉后肝出现间质纤维化[4-5].人群研究发现,肝硬化/癌症患者血液和血清中的镉水平是同年龄对照组的3倍[6].流行病学调查提示,血镉水平的升高与肝纤维化的发生有关[7-8].
新兴污染物(emerging contaminants,ECs)是指环境中新出现的,或目前已明确存在、对环境或人类健康具有已知或潜在威胁的但尚无法律法规和限定标准或限定标准不明确的一类天然或合成的化学物质[1].目前常见的ECs包括药物及个人护理产品(pharmaceutical and personal care products,PPCPs)、全氟和多氟化合物(perfluoroalkyl and polyfluorLoalkyl substances,PFASs)、新型溴化阻燃剂(novel brominated flame retardants,NBFRs)、微塑料(Microplastics,MPs)和工程纳米材料(engineered nanomaterials,ENMs)等.由于监管方法不完善、去除技术研发滞后等原因致其大量残留于环境介质中,从而污染空气、土壤和水源等,对人类造成直接或间接的健康影响,因此ECs带来的健康风险是需要长期关注的全球公共卫生问题.本文总结近年来国内外相关研究,围绕较为常见的ECs不良健康效应进行阐述,有助于研究者快速了解ECs相关研究进展.
沙米(Agriophyllum squarrosum)别名沙蓬,一年生藜科沙蓬属植物,是干旱、半干旱荒漠地区特有的沙生植物,具有生命力顽强、繁殖速度快、繁育周期短和光合效率高的特点,对风沙等恶劣环境适应性较强,被誉为"固沙先锋"[1-6].沙米在我国沙区具有较长的采食历史,至今仍有食用沙米的习惯.现代研究发现,沙米具有较高的营养价值,其蛋白质平均含量为21％左右,且氨基酸模式接近于人体蛋白质氨基酸模式,可以被较好的被人体吸收;富含人体必需的钙、铁、锌和碘等微量元素,其铁元素含量高于小麦粉、苦荞麦和大米等粮食作物;沙米中黄酮、三萜和生物碱等活性成分含量较高,具有保肝、降糖和降血脂的作用,是一种天然绿色高蛋白食品[7-13].
皮肤致敏又称过敏性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD),是皮肤反复接触致敏物质后引发的迟发型超敏反应.皮肤致敏性筛查是外用制剂和化妆品等皮肤接触类产品安全性评价的重要内容.目前我国皮肤致敏性检测中最普遍采用的仍是动物试验,如豚鼠局部封闭涂皮试验(Buehler test)、豚鼠最大值试验(GPMT test)和小鼠局部淋巴结试验(LLNA),需使用相当数量的动物.2013年,欧盟颁布了关于化妆品检测时使用实验动物的禁令.2017年化学品注册、评估、许可和限制(Registration,Evaluation,Authorization and Restriction of Chemicals,REACH)法规要求使用计算机模拟和体外方法作为皮肤致敏性筛选的首要方法.
金花茶(Camellianitidissima)为山茶科山茶属金花茶族植物,是中国8种国家一级保护植物之首,属《濒危动植物种国际贸易公约》附录物种[1-2].金花茶为广西壮族传统用药,在《广西中药材标准》中记载用于治疗咽喉炎、肾炎、痢疾、肿瘤、便血、高血压和月经不调等病症[3].它以叶和花入药,其叶主要用于咽喉疼痛、肾炎水肿、尿路感染、高血压和预防肿瘤等,其花主要用于便血、月经不调和降压减脂等.2010年中华人民共和国卫生部批准金花茶(茶叶)等5种资源为新资源产品(2010年卫生部第9公告),对于深入开展金花茶营养性及药用活性成分研究,开发新型金花茶功能保健食品、延长金花茶产业链及提高产品附加值具有重要意义4-5].
目的 观察N-亚硝基化合物-甲基硝基亚硝基胍(MNNG)亚慢性暴露对大鼠胃黏膜组织炎性损伤的影响.方法 75只SPF级雄性Wistar大鼠(体重80～100 g)随机分为生理盐水对照组、MNNG染毒组(0.08、0.12、0.16和0.20 mg/kg),每组15只.对照组大鼠采用等量生理盐水灌胃,实验组大鼠以0.08、0.12、0.16和0.20 mg/kg MNNG灌胃染毒,同时自由饮用含30 μg/ml MNNG的水,持续染毒13周.苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃组织结构改变,Western blot技术及免疫组化实验检测大鼠胃组织凋亡、炎性相关蛋白及胃癌肿瘤相关Wnt信号通路关键蛋白的表达变化.结果 大鼠胃组织切片结果显示,MNNG亚慢性暴露可引起大鼠胃黏膜糜烂、脱落、坏死,胃黏膜下出血,部分胃组织切片中可见大量炎性细胞浸润.与对照组大鼠相比,MNNG亚慢性暴露大鼠胃组织中凋亡相关蛋白Bcl-2呈明显降低趋势,而Bax,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达量呈上升,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,实验组大鼠Wnt信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β,CK1,Axin1和TCF7的表达水均升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);免疫组化结果显示,与对照组相比,MNNG亚慢性暴露大鼠胃组织Wnt信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β表达水平升高,数据差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MNNG亚慢性暴露可引起大鼠胃黏膜组织结构发生炎性损伤,并引诱发胃组织凋亡、炎性相关蛋白及胃癌肿瘤相关Wnt信号通路关键蛋白的表达变化,本研究可为MNNG亚慢性暴露致大鼠胃损伤及炎性反应机制探索提供参考.
原矛头蝮蛇(Protobothrops mucrosquamatus)主要分布于我国长江以南和台湾地区,原名烙铁头蛇(Trimeresurus mucrosquamatus),属蝰蛇科原矛头蝮属[1].原矛头蝮蛇毒(Protobothrops mucrosquamatus venom,PMV)主要表现为血液毒性,影响心血管及凝血系统等方面,对组织细胞也有毒性作用[2-3].该蛇伤较为常见,临床表现主要为凝血障碍、头昏恶心、视力模糊和胸闷腹痛等,严重者出现皮下出血、血尿、全身内脏出血甚至失血性休克[4-5].迄今,对PMV的研究主要集中在纤溶酶、类凝血酶、丝氨酸蛋白酶及诱导血小板聚集的蛋白等成分[1-2,6].课题组前期研究表明,PMV具有明显的破坏凝血功能的作用,PMV及其组分能诱导血小板聚集引起全血中血小板计数下降,具有酶切底物S-2251活性,能延长凝血酶时间(TT)和部分活化凝血活酶时间(APTT),破坏人微血管内皮细胞[2,7].此前研究更多采用凝血四项等研究方法,为进一步研究和认识PMV对凝血功能的影响,课题组采用血栓弹力图测定方法来开展PMV对大鼠全血凝血功能影响的研究,以期为进一步认识原矛头蝮蛇伤的机制及临床救治方案和新药研究提供参考.
目的 探讨环状RNA(circRNA)circMTO1对氯氮平致大鼠原代肝细胞损伤的影响及分子机制.方法 将大鼠原代肝细胞随机分为对照组、氯氮平组、氯氮平+pcDNA3.1组、氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1组、氯氮平+miR-NC组、氯氮平+miR-384组和氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1+miR-384组.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞存活率,实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测circMTOI和miR-384表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,双荧光素酶报告实验验证circMTO1与miR-384的靶向关系.结果 对照组、氯氮平组、氯氮平+pcDNA3.1组、氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1 组、氯氮平+miR-NC 组、氯氮平+miR-384 组和氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1+miR-384 组大鼠原代肝细胞存活率依次为 100.00％±5.37％、53.09％±8.71％、58.71％±9.26％、80.25％±12.71％、56.07％±8.02％、39.01％±5.64％、61.24％±8.35％,凋亡率依次为 5.53％±0.93％、37.26％±6.20％、41.18％±5.60％、19.87％±3.03％、38.96％±5.02％、53.24％±6.01％和32.69％±4.17％.与对照组比较,氯氮平组大鼠原代肝细胞存活率和circMTO1表达水平明显降低,miR-384表达水平、凋亡率、凋亡指数、ALT和AST水平明显增加(P＜0.05).与氯氮平组比较,氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1组大鼠原代肝细胞存活率和circMTO1表达水平明显增加,miR-384表达水平、凋亡率、凋亡指数、ALT和AST水平明显降低(P＜0.05).与氯氮平组比较,氯氮平+miR-384组大鼠原代肝细胞存活率明显降低,miR-384表达水平、凋亡率、凋亡指数、ALT和AST水平明显增加(P＜0.05).与氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1组比较,氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1+miR-384组大鼠原代肝细胞存活率明显降低,miR-384表达水平、凋亡率、凋亡指数、ALT和AST水平明显增加(P＜0.05).与氯氮平+miR-384组比较,氯氮平+pcDNA3.1-circMTO1+miR-384组大鼠原代肝细胞circMTO1表达水平、细胞存活率明显增加,miR-384表达水平、凋亡率、凋亡指数、ALT和AST水平明显降低(P＜0.05).circMTO1靶向负调控miR-384的表达.结论 circMTO1可减轻氯氮平致大鼠原代肝细胞损伤,其机制可能与circMTO1靶向负调控miR-384的表达有关.
目的 研究Erastin对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤作用及Ferrostatin-1(Fer-1)和Deferoxamine(DFO)对细胞损伤的保护效果,为Fer-1和DFO应用于神经退行性疾病提供依据.方法 将SH-SY5Y细胞分为溶剂对照组(DMSO)、Erastin 组(10 μmol/L)、Fer-1 组(10 μmol/L)、DFO 组(100 μmol/L)、Erastin+Fer-1 组(10 μmol/L Erastin+10 μmol/L Fer-1)和 Erastin+DFO 组(10 μmol/L Erastin+100 μmol/L DFO),染毒 24 h.CCK-8 法检测细胞活力;显微镜观察细胞形态结构;透射电子显微镜观察细胞线粒体结构变化;流式细胞仪检测细胞脂质ROS水平;试剂盒检测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、细胞铁含量;Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、人胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7a1 1)和突触素(SYN)蛋白表达.结果 Erastin暴露可导致细胞存活率降低至73.19％±3.51％,明显低于对照组100％±0.00％(P＜0.01);细胞形态不规则,突触减少,SYN蛋白表达明显降低(P＜0.01);细胞线粒体明显皱缩,膜增厚,线粒体嵴减少.与对照组相比,Erastin暴露组细胞GSH含量、GSH-Px的活力、SOD的活力明显降低(P＜0.01),脂质ROS含量、MDA含量、细胞内铁离子水平明显升高(P＜0.01),GPX4、SLC7a11蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).与Erastin暴露组相比,Erastin+Fer-1组、Erastin+DFO组细胞的存活率明显提高(P＜0.01),不规则形态和突触缺失的细胞数目减少,SYN蛋白表达水平明显增加(P＜0.01);异常形态线粒体数量减少,线粒体形态结构趋于正常,脂质活性氧(ROS)、MDA和细胞铁离子水平明显下降(P＜0.01),GSH含量、GSH-Px和SOD活力明显提升(P＜0.01),GPX4、SLC7a11蛋白表达水平明显增加(P＜0.01).结论 Erastin可以诱导SH-SY5Y细胞损伤及铁死亡;Fer-1和DFO通过抑制细胞铁死亡而起到细胞保护作用.
Objective: To investigate the effect of arsenic and its main metabolites on the apoptosis of human lung adenocarcinoma cell line A549 and the expression of pro-apoptotic genes Bad and Bik. Methods: In October 2020, A549 cells were recovered and cultured, and the cell viability was detected by the cell counting reagent CCK-8 to determine the concentration and time of sodium arsenite exposure to A549. The study was divided into NaAsO(2) exposure groups and metobol: le expoure groups: the metabolite comparison groups were subdivided into the control group, the monomethylarsinic acid exposure group (60 μmol/L) , and the dimethylarsinic acid exposure group (60 μmol/L) ; sodium arsenite dose groups were subdivided into 4 groups: control group (0) , 20, 40, 60 μmol/L sodium arsenite NaAsO(2). Hoechst 33342/propidium iodide double staining (Ho/PI) was used to observe cell apoptosis and real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to detect the expression levels of Bad and Bik mRNA in cells after exposure. Western blotting was used to detect the protein expressions of Bad, P-Bad-S112, Bik, cleaved Bik and downstream proteins poly ADP-ribose polymerase PARP1 and cytochrome C (Cyt-C) , using spectrophotometry to detect the activity changes of caspase 3, 6, 8, 9. Results: Compared with the control group, the proportion of apoptotic cells in the 20, 40, and 60 μmol/L NaAsO(2) dose groups increased significantly (P<0.01) , and the expression levels of Bad, Bik mRNA, the protein expression levels of Bad, P-Bad-S112, Bik, cleaved Bik, PARP1, Cyt-C were increased (all P<0.05) , and the activities of Caspase 3, 6, 8, and 9 were significantly increased with significantly differences (P<0.05) . Compared with the control group, the expression level of Bad mRNA in the DMA exposure group (1.439±0.173) was increased with a significant difference (P=0.024) , but there was no significant difference in the expression level of Bik mRNA (P=0.788) . There was no significant differences in the expression levels of Bad and Bik mRNA in the poison groups (P=0.085, 0.063) . Compared with the control group, the gray values of proteins Bad, Bik, PARP1 and Cyt-C exposed to MMA were 0.696±0.023, 0.707±0.014, 0.907±0.031, 1.032±0.016, and there was no significant difference between the two groups (P=0.469, 0.669, 0.859, 0.771) ; the gray values of proteins Bad, Bik, PARP1 and Cyt-C exposed to DMA were 0.698±0.030, 0.705±0.022, 0.908±0.015, 1.029±0.010, and there was no difference between the two groups (P=0.479, 0.636, 0.803, 0.984) . Conclusion: Sodium arsenite induces the overexpression of Bad and Bik proteins, initiates the negative feedback regulation of phosphorylated Bad and the degradation of Bik, activates the downstream proteins PARP1, Cyt-C and Caspase pathways, and mediates the apoptosis of A549 cells.
Background: Screening and preliminary identification of DNMT1 high expression related LncRNA, which is involved in various inter-related signaling pathways, has revealed a theoretical basis for various types of disease mechanisms. Methods: LncRNA and mRNA differential expression profiles were identified on a microarray. The 10 LncRNAs with high levels of variation were identified by qRT-PCR. KEGG and GO analyses were used to dissect out differentially expressed mRNAs. Results and Conclusions: Six signal pathways were selected based on the KEGG results of the LncRNA-mRNAs expression network analysis.We found a total of 6987 differentially expressed LncRNAs and 7421 differentially expressed mRNAs were obtained from the microarrays in experimental and control groups ( P <0.05; Fold Change >2.0x). GO analysis KEGG pathway analysis showed high expression of DNMT1 in esophageal epithelial cells. Nine pathways involved mRNA up-regulation including natural killer cell mediated cytotoxicity and many other prominent biochemical pathways. Forty six pathways were associated with down regulated mRNAs and ribosomes involving multiple biological pathways. Co-expression network analysis showed that the 8 mRNA and 16 LncRNA were linked to the P53 signaling pathway. Interactions occurred between 22 LncRNA and 11 mRNA in the ErbB signaling pathway, between 19 LncRNA and 8 mRNA in epithelial cell signal transduction of Helicobacter pylori infection. Interactions were present in 19 LncRNAs and 5 mRNAs in the sphingolipid signaling pathway along with 21 with LncRNA and 12 with mRNAs in the PI3K-Akt signaling pathway. Cytotoxicity interactions occurred with 22 LncRNAs and 9 mRNAs in natural killer cells.
目前风险评估理念已广泛应用于评估化合物对人类健康构成的风险程度,其在化妆品领域的运用也越来越被业界和监管部门所接受.欧盟消费者安全科学委员会(Scientific Committee on Consumer Safety,SCCS)针对欧洲市场上的化妆品原料及风险物质的评估发布了风险评估指南,并定期更新[1].美国化妆品原料评价委员会(Cosmetic Ingredient Review,CIR)则通过化妆品原料综述建立了包含数千种化妆品原料的风险评估报告数据库,该数据库也会定期增补新的原料安全信息.
目的 探究连翘叶作为新食品原料开发的营养含量和食用安全性.方法 使用食品安全国家标准中规定的方法,进行了连翘叶营养成分、卫生学指标及90 d经口毒性的研究.结果 连翘叶含有丰富的蛋白质、膳食纤维、氨基酸、矿质元素及维生素等人体所需的营养素,其蛋白质的含量高达14 g/100 g,膳食纤维的含量为26.6 g/100 g,钾元素的含量为1.14 g/100 g,维生素E及β-胡萝卜素的含量也较高,能够满足作为食品原料的营养需求;卫生学成分检测结果表明,重金属和农药残留符合食品安全国家标准的相关规定;90 d经口毒性试验,未观察到中毒表现和体征,大鼠的体重、进食量、食物利用率、血液学、血生化等指标均未见损害性影响.结论 试验结果表明连翘叶营养丰富,卫生学及90 d经口毒性试验安全,为其作为新食品原料研究提供了依据.
交叉参照是用于填补毒理学终点数据缺口的一种非测试方法,它通过已知化学物质的毒性数据终点预测具有"相似"特性或化学特征化学物质的相同的毒性终点.基于减少测试时间和费用的目的,动物伦理等原因,对交叉参照的倡导和使用近年来不断增多.工业界、科学界和各国政府机构和相关组织也通过法规和指南文件来积极推动其在化学品安全评估和监管中的使用.因为交叉参照是一个需要专家判断、不断迭代自检的多步骤复杂过程,在实际使用中仍然面临一些如有效性、不确定性等问题.本文简要的介绍了交叉参照的基本原理和步骤,法规监管框架,应用指南和研究进展,并讨论了实际应用中的挑战.
细颗粒物(PM2.5)也称为可入肺颗粒物,美国心脏协会在2010年明确指出PM2.5是引发心血管疾病(Cardiovascular Disease,CVD)的环境危险因子. 流行病学研究显示,PM2.5浓度每增加10 μg/m3,CVD住院人数增加0.96％,心律失常、心力衰竭、缺血性心脏病住院率均有不同程度的升高[1].人们采用不同模式生物在PM2.5心血管毒理学机制方面积累了许多重要研究成果,近年来表观遗传学机制成为研究热点.本文总结和归纳了 PM2.5致心脏损伤的表观遗传学机制研究进展,旨在更全面深入地理解PM2.5致心脏损伤的分子机制,寻求潜在的、有价值的表观遗传学特征标志物,对促进PM2.5心血管毒理学研究有重要意义.
目的 研究党参多糖(Codonopsis pilosula polysaccharide,CPP)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用不同浓度CPP(10、20和40 μmol/L)体外处理MCF-7细胞,将CCHE1小干扰RNA(si-CCHEl)及其阴性对照(si-con)、CCHE1过表达载体(pcDNA-CCHEl)及其阴性对照(pcDNA-con)分别转染MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白3(cleaved-Caspase-3)的表达水平,qRT-PCR检测CCHE1表达水平.结果 10、20和40 μmol/L CPP处理的MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率和cleaved-Caspase-3表达水平呈剂量依赖性增加,CCHE1表达水平呈剂量依赖性降低(P＜0.01).下调CCHE1表达后的MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率和cleaved-Caspase-3表达水平增加(P＜0.01).上调CCHE1表达可逆转CPP对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率和cleaved-Caspase-3表达水平的影响(P＜0.01).结论 党参多糖通过下调CCHE1表达抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡.
目的 探讨PM2.5短期高浓度暴露及停止暴露对大鼠肺组织炎症和纤维化相关标志物的影响.方法 采集冬季北方某典型复合污染区PM2.5并进行成分分析.32只SD雄性大鼠随机分为PM2.5暴露组和空白滤膜对照组,每组16只.暴露组气管滴注超纯水洗脱的PM2.5,每次15 mg/kg-bw,每3 d暴露1次,持续30 d;对照组滴注等量超纯水洗脱的空白滤膜.末次染毒后每组随机处死一半大鼠,剩余大鼠停止暴露,恢复15 d后处死,取肺组织,分别进行病理和相关指标的检测.根据病理切片苏木素-伊红(HE)和Masson染色进行肺泡炎和纤维化评价;通过RT-qPCR检测肺组织炎性因子(IL-6、IL-lβ、TNF-α和MCP-1)和纤维化指标(Collagen Ⅰ、TGF-β和PDGF)的转录水平.结果 PM2.5短期高浓度暴露后肺组织形态学显示肺泡炎程度加重,差异有统计学意义(P＞0.05),炎性因子转录水平无明显改变(P＞0.05);恢复15 d后,与同期对照组相比,暴露组肺泡炎分级差异无统计学意义(P＞0.05),IL-6的mRNA表达量明显升高(P＜0.05),其余炎性因子均呈现下降趋势,差异有统计学意义(P＞0.05).纤维化结果显示,PM2.5暴露后肺组织胶原纤维含量明显增多(P＜0.05),纤维化指标的mRNA水平均无明显改变(P＞0.05);恢复15 d后,暴露组在组织层面恢复到对照组水平(P＞0.05),Collagen Ⅰ转录水平比恢复前明显上升(P＜0.05),TGF-β则明显下降(P＜0.05);与同期对照组相比,暴露恢复组的Collagen Ⅰ和PDGF的mRNA水平均明显上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PM2.5短期高浓度暴露会引起大鼠肺部炎症和胶原纤维升高,停止暴露后,组织层面得到恢复,相关因子表达降低,但部分标志物的持续表达提示PM2.5暴露存在后期效应.
