为解决基层养殖生产中禽病诊断的最后一公里问题,满足禽病的及时、快速诊断需求,禽病远程网络诊断技术云平台应运而生,其主要由远程诊断、实验室诊断、监测中心、专家禽病库等部分组成.文章就禽病远程网络诊断技术云平台架构与应用方面进行阐述,介绍平台各组成部分及其使用流程,分析平台目前存在的问题.平台的应用将为行业提供新的禽病诊断方向,做到实时、便捷地诊断疾病,为家禽业生产创造更多的社会效益和经济效益.

试验旨在从免疫遗传学的角度初步探讨藏鸡(TC)和隐性白羽鸡(RWC)对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)易感性差异的分子机制,分别用1×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡.应用实时荧光定量PCR检测藏鸡和隐性白羽鸡感染前0 d和感染后第2、4、6和8天脾脏、盲肠、胸腺、法氏囊中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-16、Toll样受体(TLR3)和TLR15免疫相关基因的转录水平变化.结果显示,藏鸡脾脏IFN-γ、IL-2、IL-16及TLR3、TLR15免疫相关基因转录水平于感染后第4和8天明显上调,隐性白羽鸡则无明显变化.藏鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第2天显著上调(P<0.05),TLR3在感染后第4天起显著上调(P<0.05),其余免疫相关基因变化幅度不大;隐性白羽鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第8天显著上调(P<0.05),IL-2在感染后第2天起显著上调(P<0.05),IL-16在感染后第6天起显著上调(P<0.05),TLR3在感染后第2和8天显著上调(P<0.05),TLR15变化幅度不大.各免疫相关基因在2个品种鸡胸腺和法氏囊中均出现上调或下调,但除藏鸡法氏囊TLR3和TLR15转录水平变化幅度相对较大外,其余免疫相关基因与感染前相比变化幅度不大.以上结果显示,球虫感染主要导致藏鸡和隐性白羽鸡脾脏和盲肠中的各免疫相关基因出现显著变化,表明宿主的遗传背景在一定程度上可影响球虫感染的免疫应答.

为了解江苏某种鸡场鸡白痢沙门菌分离株的药敏性及其与耐药基因的相关性,采用K-B法测定96株鸡白痢沙门菌分离株对9类21种抗菌药物的敏感性,通过PCR方法检测分离株的6类药物的10种耐药基因,并对分离株的药敏性与耐药基因的相关性进行分析.结果 表明:所有鸡白痢沙门菌分离株均有不同程度的耐药现象,其中对萘啶酸(95.83％)、氨苄西林(55.21％)和链霉素(39.58％)的耐药率较高,且56.25％的分离株呈多重耐药.36.46％的分离株可检出耐药基因,共检出7种耐药基因,分别为aadA1 (26.04％)、blaCMY-2 (11.46％)、sul2 (11.46％)、blaTEM-1 (9.38％)、tetA (4.17％)、strA (3.13％)和qnr (3.13％).与药敏性符合率较高的耐药基因依次为cat1 (93.75％)、tetA(73.96％)、tetC (71.88％)、sul2 (68.75％)和sul1 (67.71％).这一研究提示该种鸡场鸡白痢沙门菌耐药情况较为严重,但耐药基因携带率较低,且耐药基因检测结果与药敏性并不完全符合.

为建立一种快速检测chSAMHD1表达量的方法,本研究以SPF鸡外周血单个核细胞总cDNA为模板,构建了包含chSAMHD1全长CDS的重组质粒pMD-chSAMHD1.跨chSAMHD1内含子设计1对荧光定量PCR特异性引物,以构建的重组质粒作为标准品,建立chSAMHD1实时荧光定量PCR检测方法,并对其敏感性、特异性及重复性进行验证,将其应用于1日龄SPF鸡组织chSAMHD1表达量的检测.结果显示:用建立的实时荧光定量PCR方法对5×108～5×104拷贝/μL的标准质粒进行检测,所得标准曲线呈现良好的线性关系;最低检测限为50拷贝/μL,灵敏度是普通PCR的100倍;特异性良好,仅能检测到鸡源细胞中SAMHD1基因;重复性好,组内和组间变异系数均小于2％;应用该方法检测1日龄正常SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、神经、胸腺、法氏囊、十二指肠、腿肌、腺胃等组织的chSAMHD1基因拷贝数,结果显示chSAMHD1具有广泛的组织分布性.本研究为chSAMHD1功能研究提供了一种准确、有效的检测手段.

为了解江苏省某种鸡场重要疫病感染和免疫状况,从绿壳蛋鸡核心群采集了290日龄鸡的血清样品进行了禽白血病(AL)、网状内皮组织增生症(RE)、沙门菌病、新城疫(ND)和高致病性禽流感(HPAI)血清学调查.562份样品进行鸡白痢和鸡伤寒沙门菌(SP/SG)、新城疫病毒(NDV)和高致病性禽流感病毒(HPAIV)抗体检测,取460份样品检测A亚群和B亚群禽白血病病毒(ALV-A/B)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和网状内皮组织增生症病毒(REV)抗体.结果 显示:种鸡群ALV-A/B、ALV-J、REV以及SP/SG抗体阳性率分别为10.00％(46/460)、6.92％(32/460)、27.39％ (126/460)和26.16％ (147/562).公鸡ALV-A/B、ALV-J和SP/SG抗体阳性率显著低于母鸡,但其REV抗体阳性率则显著高于母鸡.在同时检测ALV-MB、ALV-J、REV和SP/SG抗体的鸡中,有54.78％(252/460)呈抗体阳性,其中,单抗体阳性、2种抗体阳性和3种抗体阳性的鸡数分别占74.21％(187/252)、22.22％(56/252)和3.57％(9/252).结果 提示种鸡群存在不同程度的ALV-A/B、ALV-J、REV和SP感染,以REV和SP感染较为严重,且多重感染现象较为普遍.ND和HPAI免疫抗体检测结果显示,NDV、H5亚型AIV Re-11株、Re-12株和H7亚型AIV平均血凝抑制(HI)抗体效价分别为(10.85±0.95) log2、(8.14±1.31) log2、(7.76±1.23) log2和(8.96±1.03) log2,表明鸡群ND和HPAI免疫效果良好.以上研究结果可以为鸡群重要疫病的防控和净化工作提供依据.

细胞苗因工艺优良、产品性质稳定等特点,一直是禽苗研究的主要方向.研究利用QX型传染性支气管炎毒株MJ株感染生物反应器中悬浮培养的Vero细胞,确定培养参数.结果表明,微载体浓度10 g/L、10％DMEM培养基、细胞与微载体比例为50:1时,细胞生长状态良好.MJ株与Vero细胞感染复数为0.50时,病毒扩增效率最高,在108 h病毒含量可达到106.53 TCID50/mL.

为评价口服米尔贝肟与吡喹酮复合片(Milbermax(R),Novartis Sante Animale)对猫自然感染胃肠道蠕虫的疗效,本研究将治疗前体况相近且粪便虫卵检查为阳性的猫分为Milbermax(R)组、药物对照吡喹酮单方组及阳性对照组,每组35只.随后按规定剂量和途径给药,并在给药前1d和给药后第7天与第14天取粪样用麦克马斯特氏法(McMaster method)计算克粪虫卵数(eggs per gram,EPG),治疗后第15天结束试验,对猫进行安乐死,剖检收集胃肠道蠕虫均按种类和阶段进行鉴定和计数.结果 显示Milbermax(R)组(米尔贝肟2 mg/kg+吡喹酮5 mg/kg)对华支睾吸虫、棘口吸虫、心形咽口吸虫、曼氏迭宫绦虫、犬复孔绦虫、猫弓首蛔虫和钩虫的驱虫率分别为97.3％、100.0％、99.7％、84.9％、100.0％、100.0％和100.0％,驱净率为53.3％、100.0％、92.3％、75.0％、100.0％、100.0％和100.0％,对毛细线虫的虫卵减少率和转阴率分别为100.0％和90.0％.毗喹酮单方组(5 mg/kg)对华支睾吸虫、棘口吸虫、心形咽口吸虫、曼氏迭宫绦虫和犬复孔绦虫的驱虫率分别为93.2％、100.0％、100.0％、83.0％和100.0％,驱净率为31.3％、100.0％、100.0％、50.0％和100.0％,对毛细线虫无效.受试药物对猫无不良作用.结果 表明Milbermax(R)以推荐剂量单次口服给药对猫自然感染胃肠道蠕虫更加安全有效,为防治猫只在野外条件下蠕虫感染提供了安全可靠的保障.

为快速检测鸡群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)感染状态,本研究针对鸡群中主要流行的外源性ALV亚群ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K,设计通用上游引物PF和特异性下游引物AR、BR、JR和KR,通过构建质粒标准品,对最适引物浓度、退火温度及循环数等反应条件进行优化,建立了能同时检测ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的多重PCR方法,进一步对其特异性、敏感性和重复性进行评估.结果 显示,采用0.2 μmol/L PF、0.1μmol/L AR、0.1μmol/L BR、0.1μmol/L JR和0.1 μmol/L KR,56.0℃退火温度和30个循环的反应条件建立的多重PCR方法检测效果最优.该方法能特异性地检测出ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的单一或混合感染,而对其它禽源病毒无特异性扩增;该方法对质粒标准品的检测下限为1×103拷贝/μL,敏感性较高;利用该方法对3个浓度混合质粒模板的检测,显示出良好的批内和批间重复性.利用本研究建立的多重PCR方法与传统病毒分离方法对96份表观健康鸡抗凝血样品及21份肿瘤组织样品进行检测,结果显示该多重PCR方法检出率更高,二者符合率99.1％.利用建立的多重PCR方法检测119份ALV阳性样品,结果显示,单一感染ALV-J检出率最高(43.7％),其次为ALV-K(17.6％);除单一感染外,地方品种鸡群还存在ALV-B+J、ALV-J+K的二重感染,以及ALV-A+B+J、ALV-A+B+K、ALV-B+J+K的三重感染.本研究为禽白血病流行病学调查及外源性ALV初步鉴定提供了技术支撑.

为探讨鸡源宿主限制因子SAMHD1(chSAMHD1)的功能及作用机制,研究将前期制备并纯化的chSAMHD1原核表达蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠,应用细胞融合技术筛选单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备抗chSAMHD1单克隆抗体.结果显示:经间接ELISA筛选和2次亚克隆最终获得了5株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1A8-2-1、1A12-1-8、2B9-7-6、1F5-1-4、1F7-7-7,小鼠腹水效价较高的1A8-2-1和2B9-7-6抗体亚型均为IgG1;间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)鉴定结果均表明,单克隆抗体1A8-2-1可特异性识别293T细胞和DF-1细胞过表达的chSAMHD1蛋白.该研究成功获得了特异性抗chSAMHD 1单克隆抗体,可用于ELISA、IFA和Western blot检测,为鸡源SAMHD1蛋白生物学功能的研究奠定基础.

为进一步明确柔嫩艾美耳球虫对球虫易感性差异鸡种的致病性,本研究以1×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊的剂量分别感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡,接种后观察记录各组鸡的临床表征、血便记分、死亡率、增重、盲肠病变记分、卵囊产量,并于感染前和感染后3、6和8d每个品种分别随机选择5只鸡采集抗凝血,应用流式细胞仪(FCAS)检测外周血CD4+T和CD8+T淋巴细胞亚群数量.结果 显示,柔嫩艾美耳球虫感染后藏鸡相对增重率高于隐性白羽鸡,死亡率、血便记分和盲肠病变记分均低于隐性白羽鸡,但卵囊产量高于隐性白羽鸡.外周血T淋巴细胞亚群变化方面,感染前,藏鸡CD4+T淋巴细胞数及CD4+/CD8+比值均高于隐性白羽鸡.感染后第3天,藏鸡CD4+、CD8+T淋巴细胞数及CD4+/CD8+比值下降,隐性白羽鸡CD8+T淋巴细胞数略有下降,CD4+T淋巴细胞数及CD4+/CD8+比值上升,但CD4+/CD8+比值仍显著低于藏鸡(P＜0.05).感染后第6天,2个品种鸡CD4+T淋巴细胞数及CD4+/CD8+比值均下降,其中藏鸡表现为显著下降(P＜0.05),而隐性白羽鸡仅CD4+/CD8+比值显著降低(P＜0.05),隐性白羽鸡CD8+T淋巴细胞数显著升高(P＜0.05).感染后第8天,2个品种鸡CD4+/CD8+比值显著下降(P＜0.05),藏鸡CD8+T淋巴细胞数显著高于隐性白羽鸡(P＜0.05),但CD4+/CD8+比值显著低于隐性白羽鸡(P＜0.05).结果 表明,球虫对藏鸡和隐性白羽鸡的致病性存在差异,这种差异与T淋巴细胞介导的免疫应答反应密切相关.

为从病理生理角度探究宿主抗球虫感染的机制,对藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)后的血清生化指标变化进行了比较分析.26日龄藏鸡和隐性白羽鸡均设感染组和非感染对照组,每组40只.感染组每只鸡经嗉囊接种1 mL含1×105个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊悬液.感染后第0、3、6、8天,分别测定感染组和对照组鸡的14项血清生化指标.结果表明:藏鸡血清球蛋白含量于感染后第3天升高,而隐性白羽鸡则显著下降(P＜0.05);藏鸡血清白蛋白含量于感染后第6天起显著降低(P＜0.05),隐性白羽鸡则在感染后第3天显著升高(P＜0.05);2个品种鸡血清碱性磷酸酶含量于感染后第6天起明显下降,其中隐性白羽鸡显著下降(P＜0.05).藏鸡血清γ-谷氨酰基转移酶含量于感染后第6天显著下降(P＜0.05),而隐性白羽鸡则表现为升高趋势;两个品种鸡血清甘油三酯含量于感染后第6天明显下降,其中藏鸡显著下降(P＜0.05);藏鸡血清尿酸含量在感染后第3天显著上升,隐性白羽鸡则在感染后第8天显著下降(P＜0.05);藏鸡和隐性白羽鸡血清P3+浓度分别于感染后第3和6天显著升高(P＜0.05);其余指标亦有升高或降低,但与对照组间无显著差异.提示鸡感染柔嫩艾美耳球虫后心、肝未受到严重损害,肾功能受到一定程度的影响,肠道受损较为严重,且隐性白羽鸡肠道受损程度较藏鸡严重.

为探讨鸡白痢沙门菌耐药基因携带情况及其与药敏性的相关性,研究采用PCR方法对已确定耐药谱的207株鸡白痢沙门茵分离株的6类药物的10种耐药基因进行了检测.结果显示:12株(5.80％)未检出耐药基因,11株(5.31％)可携带多达7种耐药基因,携带3种耐药基因的菌株数量最多,占38.16％.10种耐药基因均可检出,tetC基因检出率最高(54.11％),其次为tetA (50.24％)和blaCMY～2(49.76％).与菌株药敏性总符合率较高的基因依次为cat1(90.82％)、addA1(87.76％)、tetA(86.36％)、blaTEM-1(79.31％),但catⅠ的耐药符合率及addA1的敏感符合率均为0.blaCMY-2与tetC虽然基因检出率较高,但与药敏性的符合率均较低.研究表明:鸡白痢沙门茵分离株耐药基因携带率较高,但耐药基因与药敏性并不完全相符,耐药基因检测结果可能并不一定能反映分离菌株的实际耐药状况.

采用萘啶酸、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、加替沙星等5种喹诺酮类药物进行了鸡白痢沙门菌体外诱导耐药试验,观察和分析了细菌耐药性发展进程及药物间的交叉耐药情况.鸡白瘌沙门菌标准株C79-3以药物浓度递增法分别在5种药物的次抑菌浓度下诱导传代至30代,每10代进行药敏试验检测耐药性,并对诱导株诱导前和诱导30代后的药物最低抑菌浓度(MIC)进行测定和比较.结果:随着诱导代次增加,诱导株对诱导药物的敏感性逐渐下降,至30代时所有诱导株均对诱导药物产生耐药.不同药物诱导耐药的进程有一定程度的差异,萘啶酸最易诱导耐药,其次为恩诺沙星、环丙沙星和加替沙星,最后为诺氟沙星.环丙沙星诱导株的环丙沙星MIC增幅最大,萘啶酸诱导株的萘啶酸MIC值最高.5种药物间存在不同程度的交叉耐药现象,恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星之间为双向交叉耐药,而萘啶酸与恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星和加替沙星间以及加替沙星与恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星间为单向交叉耐药.此外,药物间的交叉耐药与菌株的耐药水平密切相关.

从江苏省某肉鸽场发生的腹泻症状的死亡鸽中采集病料,分离出1株病原菌,通过PCR鉴定菌株,并进一步做药敏试验.结果表明,病原菌分离鉴定为鼠伤寒沙门菌,属于血清O4群,该菌对20种抗生素均敏感.

以新城疫病毒(NDV) La Sota株为模板,以P基因发生RNA编辑的编码位点为起始,扩增获得V蛋白基因C末端,经原核表达获得其融合蛋白,并制备了小鼠抗血清,Western-blot试验结果表明,该抗血清具有良好的特异性.本研究结果为NDVV蛋白生物学功能的后续研究奠定了基础.

鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病,是危害世界养禽业的主要疫病之一.该病毒很容易发生变异,随着不同病变类型和组织嗜性毒株的不断出现,传统的疫苗株驯化方法已经不能满足当前IB防控的需要,以现代基因工程技术为基础,研制安全、高效的新型疫苗成为国内外发展的必然趋势.本文总结了国内外IBV毒力变异的分子机制研究进展,为IB新型疫苗的研制提供新的方向.

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有严格的上皮细胞嗜性.由于缺乏可供IBV复制的传代细胞系,从而阻碍了从细胞水平研究其复制、致病等分子机制.掌握鸡肾上皮细胞等原代细胞的制备、纯化及培养技术显得尤为关键.本项目组通过选择不同日龄的SPF鸡胚或雏鸡进行肾上皮细胞的制备,同时对消化酶、纯化方式及培养条件进行筛选优化,进一步采用具有EGFP标签的rH120-EGFP/5a重组病毒鉴定培养的鸡肾上皮细胞.结果表明:选择1日龄雏鸡,通过胶原酶Ⅰ消化制备的鸡肾上皮细胞的活力最佳;采用多次离心法能有效去除大量单细胞,从而达到纯化上皮细胞的目的;3％胎牛血清足够提供上皮细胞生长所需的营养,并能抑制CEF的生长.试验探索并优化了鸡肾上皮细胞制备及培养的条件,为禽源上皮细胞系的建立和IBV分子致病机制的研究奠定了基础.

This investigation was carried out to understand parasites infectious conditions in small-scale yellow broiler farms of Yangzhou in summer. 6 farms were randomly selected, which included three 30 d broiler farms and three 72 d broiler farms. 10 fecal specimens, intestinal specimens and blood specimens were examined in each farm, respectively. The results showed that coccidia and mite were detected out in these 6 small-scale free-range broiler farm, while without nematodes, tapeworm or live white worm. The coccidia rate was 71.7%, and its infection target was mainly 30 d broilers, with cecum as the main infection site, followed by small intestine. The mite rate was 30%, and its infection target was mainly 72 d broilers. In conclusion, controlling means of coccidia and mite in small-scale yellow broiler farms of Yangzhou in summer should be enhanced.

We report here the complete genome sequence and biological characterization of a virulent Newcastle disease virus (NDV) strain, NDV/duck/Jiangsu/JSD0812/2008, isolated from laying ducks in Jiangsu Province, China. The genome is 15,192 nucleotides in length and is classified in subgenotype VIId of genotype VII, class II.

禽流感主要是由A型流感病毒引起的一种禽的烈性传染病,采用疫苗免疫是防控高致病性禽流感的最有效方法.本试验采用水禽用重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-6株)和重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-4株)进行了鹅的免疫试验,对鹅免疫后抗体消长情况进行跟踪监测,旨在为鹅的禽流感免疫程序的制定提供依据.