Abstract Background Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite that causes severe threats to humans and livestock. Macrophages are the cell type preferentially infected by T. gondii in vivo. Protein phosphorylation is an important posttranslational modification involved in diverse cellular functions. A rapidly accelerated fibrosarcoma kinase (A-Raf) is a member of the Raf family of serine/threonine protein kinases that is necessary for MAPK activation. Our previous research found that knockout of A-Raf could reduce T. gondii-induced apoptosis in porcine alveolar macrophages (3D4/21 cells). However, limited information is available on protein phosphorylation variations and the role of A-Raf in macrophages infected with T. gondii. Methods We used immobilized metal affinity chromatography (IMAC) in combination with liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) to profile changes in phosphorylation in T. gondii-infected 3D4/21 and 3D4/21-ΔAraf cells. Results A total of 1647 differentially expressed phosphorylated proteins (DEPPs) with 3876 differentially phosphorylated sites (DPSs) were identified in T. gondii-infected 3D4/21 cells (p3T group) when compared with uninfected 3D4/21 cells (pho3 group), and 959 DEPPs with 1540 DPSs were identified in the p3T group compared with infected 3D4/21-ΔAraf cells (p3KT group). Venn analysis revealed 552 DPSs corresponding to 406 DEPPs with the same phosphorylated sites when comparing p3T/pho3 versus p3T/p3KT, which were identified as DPSs and DEPPs that were directly or indirectly related to A-Raf. Conclusions Our results revealed distinct responses of macrophages to T. gondii infection and the potential roles of A-Raf in fighting infection via phosphorylation of crucial proteins. Graphical Abstract

为了调查动物园动物禽流感病毒的携带情况,从扬州市动物园采集了 106份野禽类新鲜粪便棉拭子样品,进行SPF鸡胚接种、HA/AI试验鉴定、空斑纯化以及HA、NA、PB1、PB2、PA、NP、M、NS共8个片段扩增及测序分析.结果表明,分离到1株H3N2亚型禽流感病毒,分离率为0.94％,命名为A/Swan/Yangzhou/YZS1084/2019(H3N2).HA基因裂解位点只有1个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感的特征;携带242Q和244G的HA受体结合位点具有优先结合唾液酸α-2,3受体的能力,具有典型禽源特征.在扬州首次分离到的该病毒的8个基因片段均属于欧亚分支,与猪源和人源的毒株差异较大;8个基因片段来源均不相同,具有明显的遗传多样性.

临床见习课程是高等农业院校动物医学专业重要的实践性环节,也是国家执业兽医资格考试综合性科目的主要考查内容.介绍了扬州大学兽医学院以学生为主体、充分发挥学生主动性和参与性的案例教学模式及其应用效果.通过2届学生的具体实施,临床见习课程已成为一门具有自身特色、内容生动、方法与手段先进、考核方式新颖、师生参与性较高的实践性课程,大大提高了学生的临床诊治能力和综合素质,为其他相关专业实践课程的教学改革提供了 一定的参考和借鉴.

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) is a common pathogen of urinary tract infection. To investigate its characteristics and explore the interaction between UPEC and human urinary bladder cancer T24 cells, 7 canine UPEC strains were isolated from dogs in Yangzhou, China. The adhesion-encoding genes (iha, fimH, papA, papC, papG allele I, papG allele I', papG allele II, papG allele III, focA, focG, sfaS), virulence-associated genes (sat, cdtI, cnf1, hlyD), iron uptake system encoding genes (iroN, iut, ireA) were investigated, and the ability of biofilm formation was examined. In addition, UPEC in invading T24 cells, cytotoxicity, immune response and synthesis of proinflammatory cytokines were discussed. The results showed that fimH was 100% detected, followed by iut, iroN, and focA, with the detection rates of 71.4, 57.1 and 57.1% respectively; while papG allele I, papG allele I', papG allele II, papG allele III, cdtI, sat, sfaS, iha and sat were not detected. Most of the isolated UPEC strains have a strong virulence on T24 cells and could induce strong immune response. Taking these data together, canine UPEC strain may not be a canine specific pathogen, but has a certain potential for zoonosis.

为了探究鹅源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生物学特性,从临床送诊的病死鹅肠道分离出4株疑似产气荚膜梭菌,菌株纯化后分别进行革兰染色、生化鉴定、16 S rDNA序列分析、分子分型和药敏试验.结果显示:4株分离菌为革兰阳性菌,仅在厌氧条件下生长,且出现典型双溶血环菌落,16 S rDNA鉴定为产气荚膜梭菌,分别命名Cp1、Cp2、Cp3和Cp4;经多重PCR鉴定,4株菌仅含α毒素,无其他毒素,故属于A型产气荚膜梭菌;药敏结果显示4株菌对链霉素、庆大霉素、复方新诺明、多黏菌素B等多种抗生素耐药,对阿莫西林、头孢曲松钠、环丙沙星、氟苯尼考等敏感.综上所述,从临床病鹅分离到4株A型Cp,为鹅源Cp的生物特性研究提供了参考材料.

为了明确致猫呼吸道症状的病原菌及该菌的病原特征及其基因组功能信息,本研究对采集的3例发病猫的鼻腔拭子进行病原菌的分离、纯化及生化和16S rRNA基因的PCR鉴定;采用纸片法检测分离菌的药物敏感性及其对小鼠的致病性.并对其中一株分离菌进行基因组的生物信息学分析,利用不同的数据库对基因组编码的蛋白进行功能注释以及耐药和毒力相关基因的预测.细菌的分离及鉴定结果显示:分离出3株支气管败血波氏杆菌(Bb).药敏试验结果显示,分离菌对丁胺卡那、卡那霉素、四环素、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星和氯霉素敏感,对氨苄西林、链霉素、利福平、磷霉素和呋喃唑酮耐药;致病性试验结果显示,3株分离的Bb对小鼠均有一定的致病性,且浓度越高致病性越强.基因组分析结果显示,其中一株菌基因组大小为4520328 bp,GC％含量为68.12％,含有4690个蛋白质编码基因,87个tRNA基因,25个rRNA基因,1个tmRNA基因等信息;分离菌基因组编码蛋白功能的注释结果显示该菌的功能蛋白主要表现在细菌的复制增殖和生物代谢方面;分离菌携带多种耐药基因,包括主动外排系统相关基因、多粘菌素抗性基因、磷霉素抗性基因等,并基本与耐药表型一致;携带66种毒力基因,主要是分泌系统类毒力基因以及内外毒素、黏附侵袭类毒力因子基因.上述结果表明,本研究分离的Bb耐药性不强,但对小鼠呈强致病力,且含多种毒力相关基因.本研究为对该菌的研究奠定基础,并为该菌感染的防控研究提供参考.

为了对送检奶牛肺脏组织进行病原菌的分离鉴定并研究分离病原菌的生物学特性,试验采用细菌的分离纯化、革兰氏染色镜检、理化试验及16S rDNA序列分析对分离菌进行鉴定,并检测其血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因、致病性和耐药性.结果表明:该菌株能发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖等,不发酵甘露糖;革兰氏染色镜检显示该菌呈红色的球杆状,为革兰氏阴性菌;16S rDNA序列分析结果显示该菌株为溶血性曼氏杆菌,命名为202102NF,为血清型1型;202102NF的7个管家基因 adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh 和 zwf 序列号分别为 1,2,1,2,1,2,1,序列型为 ST1;202102NF 携带 LKTA、GCP、POMA、NANH、ADHE、HF 等多种毒力基因;小鼠腹腔注射 202102NF 18 h内死亡,镜检可见攻毒组的小鼠肝脏和肾脏发生肿大、颜色加深,肺部出现出血斑,肠道有大量炎性渗出物;202102NF对诺氟沙星中介,对多黏菌素B、头孢噻肟、左氧氟沙星等17种抗菌药物均敏感.说明202102NF为血清型1型的溶血性曼氏杆菌,其序列型为ST1,携带多种毒力基因,具有较强的毒力,并对多种抗生素敏感.

为探究羊源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的生物学特性,对3份送检病死羊的肺脏组织进行细菌分离,将分离到的3株菌株分别命名为P1、P2和P3.3株菌株经多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt PCR扩增阳性,随后检测荚膜血清型、多位点序列分型、18种毒力基因、药物敏感性和致病性.结果表明:3株分离株均为荚膜血清型D型多杀性巴氏杆菌,P1和P2序列型均为ST131,P3序列型为ST320;3株菌株的毒力基因各不相同,P1—P3均携带毒力基因RpoB、OmpH、ToxA、NanH,P3携带HgbA基因,P2携带pfhA基因,P1和P2携带SodA基因.该菌攻毒小鼠6 h后死亡,然而,采取相同的剂量攻毒白羽鸡未发生死亡;药敏结果显示3株分离株对左氧氟沙星、诺氟沙星、丁胺卡那、美洛西林、头孢曲松钠、复方新诺明敏感,对多黏菌素B、多西环素耐药.综合而言,从临床分离的3株羊源多杀性巴氏杆菌,荚膜血清型均为D型,基因型、毒力基因和致病性具有独特性,对小鼠致病力较强,对鸡致病力较弱.

从病死鹳的肝和肠分离出疑似产气荚膜梭菌,纯化后进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析和毒素鉴定、动物试验及药敏试验.结果 表明,分离的菌株为革兰阳性杆菌,能够发酵甘露糖和麦芽糖等糖类,不能发酵棉子糖和甘露醇;16S rDNA基因序列分析确定为产气荚膜梭菌序列;多重PCR结果显示,该菌仅含有α毒素基因,因而确定分离菌为A型产气荚膜梭菌.动物试验结果显示,将该产气荚膜梭菌灌服鸡48 h后,鸡肠道有较多出血点,但未表现坏死性肠炎症状.药敏试验结果显示,该菌对阿莫西林、头孢哌酮、氟苯尼考、美洛西林等药物敏感,对多黏菌素B、链霉素、卡那霉素等药物不敏感,对环丙沙星和庆大霉素中敏.

2020年4月,扬州某海洋馆1只海豚发生死亡.为了调查其死亡原因,对死亡海豚进行病理剖检,采集肺脏、肝脏和肾脏等组织进行病原的分离鉴定.随后将分离到的菌株分别进行染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析法鉴定种属,致病性试验及药敏试验研究其生物学特性.结果显示:从送检海豚组织中分离出的细菌在绵羊血平板上均呈灰白色的菌落,革兰染色为单个或双个的阴性球菌;分离菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖、硝酸盐、鸟氨酸等反应均为阴性;16S rDNA序列分析法鉴定分离菌为Kerstersia gyiorum;致病性试验采用腹腔注射的方式对小鼠攻毒,小鼠感染后24 h死亡;药敏试验结果表明,该分离菌株对头孢哌酮、妥布霉素和复方新诺明等敏感性较强,对诺氟沙星、环丙沙星耐药.

猫泛白细胞减少症又称猫瘟热,多发于2～6月龄未防疫的猫,对宠物猫危害极大. 导致猫泛白细胞减少症的病原为细小病毒科细小病毒属的猫细小病毒(FPV).感染FPV的猫多表现为精神萎顿,食欲减退或废绝,呕吐,下痢,体温升高(＞39.7℃),白细胞数减少. 本病一年四季均可发生,以冬春季节发病率较高,不同性别的猫发病率有明显差异.猫瘟热传染性强、发病急,一岁以内、未进行过免疫或免疫不完全的幼猫比成年猫更易患病,且病情更加严重,死亡率更高.处于病毒血症期的感染动物可通过分泌物、呕吐物、尿液及粪便排出大量病毒.临床康复的水貂和家猫可在一年内持续向外排毒,是猫瘟热的主要传染源.

用促卵泡素(FSH)和孕马血清促性腺激素(PMSG)对橘猫进行超数排卵,手术法冲取卵母细胞,并对卵巢上的排卵点和获卵数进行统计,探讨不同激素和重复超排对橘猫超排效果的影响.结果 表明:FSH组排卵点数和卵母细胞数分别为6.8和8.8个,国产PMSG组和韩国PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为5.1、7.7及6.2、8.5个,3组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著;重复超排时,国产FSH组超排获得的排卵点数和卵母细胞数分别为3.5和5.2个,国产PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为3.1和4.5个,两组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著.这一研究说明FSH和PMSG均可用于家猫超数排卵,为开展家猫胚胎工程相关研究奠定了基础.

为了分离新型曼氏杆菌并研究其生物学特性,试验对从两例山羊病例中分离出的相似细菌进行纯化培养,通过革兰氏染色镜检、生化试验、16S rDNA基因序列测定、多位点序列分型法(MLST)鉴定、血清型鉴定、药敏试验等方法研究其生物学特性.结果 表明:分离得到2株革兰氏阴性菌,2株细菌的生化试验和16S rDNA基因序列分析鉴定符合溶血性曼氏杆菌的特点,将其分别命名为201705YF和201805YS;对2株细菌进行血清型1型、2型和6型的多重PCR鉴定,201705YF为血清型2型,而201805YS的1型、2型和6型血清型检测为阴性;对2株细菌的7个管家基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf进行扩增并测序,菌株201705YF对应的7个管家基因的序列号为50,20,15,19,15,17,19,菌株201805YS对应的7个管家基因的序列号为1,2,20,2,1,1,1,这2株细菌的基因型为新基因型,即ST50和ST51;2株细菌对左氧氟沙星、卡那霉素、多黏菌素B、氟苯尼考、诺氟沙星、多西环素、美洛西林、环丙沙星、头孢哌酮等抗生素敏感,但201705YF对丁胺卡那耐药,201805YS对庆大霉素、新霉素、妥布霉素耐药.说明从送检病死山羊中分离出的2株细菌为不同血清型和新ST型的溶血性曼氏杆菌,为溶血性曼氏杆菌进化和流行病学关系研究提供了新的相关研究数据.

Sheep milk and related products have been growing in popularity around the world in recent years. However, the sheep milk industry is limited by low milk yield, and the molecular regulators of ovine lactation remain largely unknown. To investigate the transcriptomic basis of sheep lactation, RNA-Sequencing was used to explore the expression profiles of lncRNA and mRNA of the mammary gland in Hu sheep at three key time points during the lactation stage: 5 days before the expected date of parturition perinatal period (PP), 6 days after parturition early lactation (EL), and 25 days after parturition peak lactation (PL). A total of 1111, 688, and 54 differentially expressed (DE) lncRNAs as well as 1360, 660, and 17 DE mRNAs were detected in the EL vs PP, PL vs PP, and PL vs EL comparisons, respectively. Several prominent mRNAs (e.g.,CSN1S1,CSN1S2,PAEP,CSN2,CSN3, andCOL3A1) and lncRNAs (e.g., LNC_018483, LNC_005678, LNC_012936, and LNC_004856) were identified. Functional enrichment analysis revealed that several DE mRNAs and target genes of DE lncRNAs were involved in lactation-related pathways, such as MAPK, PPAR, and ECM-receptor interaction. This study enhances our understanding of how transcriptomic profiles change during the lactation period and pave the way for future studies examining sheep lactation.

从扬州某动物园病死松鼠猴的病料中分离出疑似沙门菌株,经革兰氏染色镜检、生化试验、PCR扩增沙门菌invA基因和血清型鉴定,再对该菌株的生物学特点如致病性、生物被膜形成能力和药物敏感性进行研究.结果 表明,从送检猴肝中分离出的菌株,革兰氏染色为阴性短杆菌;能够发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇等,不能发酵乳糖和蔗糖,V-P反应阴性,MR阳性;PCR检测invA基因为阳性,确认分离菌为沙门菌;血清型鉴定为鼠伤寒沙门菌.致病性试验采用灌胃方式攻毒小鼠,18h后小鼠死亡.生物被膜检测结果表明,该分离菌株有较强的生物被膜形成能力.药敏结果显示,分离菌对头孢噻肟、头孢哌酮和卡那霉素等敏感,对庆大霉素、链霉素和复方新诺明耐药.

子宫蓄脓是一种常见的犬生殖系统疾病,通常由内分泌紊乱和细菌感染共同引起.为了解兽医临床子宫蓄脓病例中的常见病原菌类型,对江苏省扬州市动物医院接诊的7例子宫蓄脓病例进行病原菌分离鉴定.经实验室检测,分离出10株菌株;经序列分析,鉴定出5种病原菌,分别为大肠杆菌(3株)、粪肠球菌(1株)、产气肠杆菌(2株)、产酸克雷伯氏菌(1株)、铜绿假单胞菌(3株).结果表明,该地区犬子宫蓄脓病例感染的致病菌种类较多,但以肠杆菌科细菌为主.本研究为临床犬子宫蓄脓的防治提供了参考.

猪链球菌病为急性败血性链球菌病,是由猪链球菌引起的感染性强、病死率高的一种热性传染病.猪链球菌是一种需氧或兼性厌氧革兰阳性菌,也是一种人兽共患病病原[1].猪链球菌有着极高的致病性,除了易感动物猪外,牛、羊和人等哺乳类动物以及犬、猫、马等动物也能感染此菌[2-3].其中羊感染此菌可通过消化道、皮肤损伤、脐带以及与带菌野猪接触等渠道感染,病菌可存在于泥土、灰尘、潮湿环境或者侵扰的草丛当中,由此增加羊感染此菌的机率.

我国牛病毒性腹泻病(Bovine viral diarrhea,BVD)的流行比较复杂,其病原BVDV(BVDV-1和BVDV-2)不仅仅局限于已知易感动物牛群感染,其他动物种群中感染BVDV-1和BVDV-2的现象也值得注意,如猪群中BVDV感染很大程度上混淆了猪瘟等病原的监测,从而加剧病程发展.牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)可致持续感染(Persistent infection,PI),这一特性导致该病的净化面临巨大困难,对整个养殖场的健康发展形成了严峻威胁.BVDV抗原变异速率非常快,目前BVDV-1已有22个亚型,BVDV-2有4个亚型,鉴于病原在自然界的适应和演进特性,对该病的防控措施迟后其病原的变异速度.因此,定期摸清BVDV-1和BVDV-2在我国的流行现状是实施疫病净化的第一步和关键步骤,进一步借鉴国外BVD净化成功经验,综合考虑我国国情,采取适宜的防控策略,逐步净化该病原感染,有助于促进国内养殖业的健康发展.

为了研究感染羊引起肺炎的溶血性曼氏杆菌的分子特征,分别从2只山羊肺部分离细菌,在血琼脂平板上分离纯化后,经培养、革兰染色镜检、生化试验、16S rDNA序列鉴定,结合临床症状鉴定这2株细菌为溶血性曼氏杆菌,分别命名为NH1、NH2.采用PCR方法,对2株溶血性曼氏杆菌进行血清型1型、2型和6型的鉴定,结果2株细菌均为血清型2型.采用多位点序列分型法对2株溶血性曼氏杆菌的7个管家基因扩增并测序,结果等位基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf的序号分别为1、1、3、1、1、1和4,2株分离菌序列型一致,均是ST46.通过纸片扩散试验检测细菌对抗菌药物的敏感性,MH1对链霉素耐药,对多西环素和妥布霉素中介,对其他13种药物均敏感;MH2对链霉素中介,对其他15种药物均敏感.

群体感应(quorum sensing,QS)是细菌中以种群规模进行特定交流的方式,通过这一机制,细菌以多细胞形式发挥不同生物学功能.群体感应参与对致病菌毒力因子表达、与宿主互作、抗生素耐药性及细菌素合成等方面的调控,与细菌生理特性密切相关.大肠杆菌是广泛存在于自然界中的一类菌株,致病性大肠杆菌可导致人与动物严重腹泻或肠道外疾病.群体感应与大肠杆菌密切相关,现将大肠杆菌群体感应系统分为5类,对其最新研究进展进行综述,为进一步探索大肠杆菌致病机制打下基础.