试验旨在研究西藏自治区日喀则市羊痘的免疫效果情况,于2020年10月和2021年4月在日喀则市5个县(区)的主要种羊场采集血清样本1472份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对样品进行羊痘抗体检测,使用R软件对检测结果进行统计学分析.结果显示,日喀则市羊痘总体阳性率为28.53％(420/1472).山羊阳性率为54.15％,绵羊阳性率为24.39％.2岁或2岁以下的阳性率为21.21％,3～6岁阳性率为33.09％,6岁或6岁以上的阳性率为28.14％.母羊阳性率为29.53％,公羊的阳性率为27.55％.研究表明,日喀则市羊痘免疫抗体阳性率为较低,感染风险较高.山羊的免疫效果优于绵羊,3～6岁的种羊免疫效果优于其他年龄的羊.

为了诊断西藏自治区日喀则市某牧场养殖藏羊的死亡病因,本试验无菌采集病死羊的心脏、肝脏、肺脏和肾脏病变组织进行细菌分离纯化,染色镜检和生化鉴定,16S rDNA序列分析,并对分离菌株进行药敏试验.结果显示,分离菌株革兰染色镜检呈葡萄串状或单个短链成对排列,可分解糖类,MR-VP结果为阳性,16S rDNA测序结果与GenBank上登录的其他金黄色葡萄球菌16S rDNA基因序列的同源性达98％以上,证明所分离菌株为金黄色葡萄球菌;药敏试验结果显示,分离菌株对部分喹诺酮类和头孢类抗生素、庆大霉素、复方新诺明、万古霉素和氯霉素高度敏感,对头孢他啶和多西环素呈中介耐药,而对氨苄西林、多黏菌素B、四环素、新霉素、卡那霉素、青霉素、克林霉素和红霉素共8种抗菌药呈耐药.本试验为日喀则地区羊源金黄色葡萄球菌的用药和治疗提供了参考依据.

为了解藏东地区藏猪胸膜肺炎放线杆菌的感染状况并分析其风险因素,试验从林芝、昌都两市103个藏猪养殖场(户)随机采集588份藏猪血清,应用ELISA法进行血清抗体检测,同时开展风险因素问卷调查,通过SPSS 23.0软件进行统计学分析.结果表明:藏东地区猪胸膜肺炎放线杆菌群体阳性率为84.47％(87/103),个体阳性率为46.26％(272/588),其中,昌都市阳性率为70.86％(214/302),林芝市阳性率为20.28％(58/286),不同地区、年龄的藏猪阳性率差异极显著(P<0.01),不同养殖模式、不同性别的藏猪之间,阳性率差异不显著(P>0.05).研究结果对藏东地区藏猪传染性胸膜肺炎的防控具有指导意义.

禽流感(Avian influence,AI)和新城疫(Newcastle disease,ND)是现代禽类养殖业中影响最大的两种疫病.其中禽流感分为高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(LPAI),而HPAI和ND是全球范围内最重要的禽类烈性传染病[1],且HPAI被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病,我国将HPAI和ND列为一类疫病.同时,禽流感也可以感染人,可造成严重的公共卫生安全问题.ND具有很高的发病率和病死率,是危害养禽业的一种主要传染病,OIE将其列为A类疫病.笔者从两种疫病的病原学、流行病学、病理学、临床病变等方面进行阐述,针对拉萨市养禽业现状提出有效防控措施的建议.

为掌握西藏林芝地区、昌都地区藏猪非洲猪瘟的感染状况,在林芝和昌都地区随机采集588份藏猪血清,采用ELISA法检测血清抗体,并进行统计学分析.结果表明:猪非洲猪瘟抗体阳性率为0％.

从西藏健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌,并筛选出耐受性最好的菌株,并进行形态学观察、生化试验、PCR扩增、电泳检测、16s rRNA序列测定、构建进化树并进行同源性分析,对通过鉴定的枯草芽孢杆菌进行耐肠液、耐胆盐、耐高温等耐受性试验.结果显示:分离出疑似枯草芽孢杆菌4株,革兰氏染色为阳性;芽孢染色液染色菌体为蓝色,芽孢不着色.菌体呈椭圆到柱状,芽孢位于菌体中央或次极端.16s rRNA测序有4株枯草芽孢杆菌,与标准株序列同源性高达99.6％,分别命名为Yak-KC1,Yak-KC5,Yak-KC6,Yak-KC7,该4株菌对肠液、胆盐、高温均具有一定的耐受性,Yak-KC7的耐受性最佳,具有进一步开发为益生菌的潜能.

为了解西藏当雄县牦牛巴氏杆菌病流行现状,2019—2020年在牦牛养殖较为集中的5个乡镇,采集存栏2000头以上的2个养殖场以及存栏30头以上的56个牧户未免疫牦牛血清1124份,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)进行牛巴氏杆菌血清抗体检测,并使用R软件对不同年龄、性别、饲养方式牦牛的检测结果进行统计分析.结果显示:当雄县牦牛巴氏杆菌个体阳性率为11.57％(130/1124),群体阳性率为89.66％(52/58);养殖场牦牛个体阳性率(12.96％)与牧户(10.92％)无统计学差异(P>0.05);公牦牛个体阳性率(10.07％)与母牦牛(12.45％)无统计学差异(P>0.05);3岁以下牦牛个体阳性率(5.08％)与6岁以上牦牛(22.81％)有统计学差异(P<0.01,OR=5.52).结果表明,巴氏杆菌病在该县牦牛群中流行普遍,无养殖模式和性别差异,但老龄牦牛感染率较高.结果提示,当雄县需要加强牦牛饲养管理和巴氏杆菌疫苗免疫,及时淘汰老龄牦牛.

通过探究一株来源于健康牦牛粪便的粪肠球菌S-5的安全性及生物学特性,以获得具有治疗犊牦牛春季腹泻病的益生菌群.文章对菌株S-5的革兰氏染色镜检试验、哥伦比亚血平板试验、生化测定试验、耐受性试验、体外抑菌试验、16S rDNA测序鉴定试验,以及动物回归试验的结果进行分析,并验证其安全性及益生性.结果显示,S-5号菌株为无芽孢、无荚膜、无溶血性的阳性球菌,生化测定试验显示其能分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖等,产酸不产气,不能分解甘露醇、棉子糖,在硫化氢、硝酸盐、吲哚试验中呈阴性,且血凝试验中不发生凝血反应,耐受性试验显示S-5菌株对牛胆盐浓度为0.03～0.15 g/100 mL时和胰蛋白酶浓度为0.5％～1.3％,pH为4.3～6.5时,耐受性极佳,体外抑菌试验证明S-5菌株对大肠杆菌O111、O78有抑制作用,16S rDNA测序鉴定S-5菌株为粪肠球菌,动物回归试验显示S-5菌株对大肠杆菌O111、O78所致的犊牦牛腹泻病有治疗作用且无毒副作用.结果说明本试验将首次获得一株对大肠杆菌所致犊牦牛春季腹泻病具有治疗效果的西藏牦牛源粪肠球菌S-5,亦符合《微生态制剂的质量鉴别与选择、检测指标和标准》.

为掌握西藏那曲地区牦牛呼吸道疾病综合征 5 种细菌病原的感染情况,对 2018 年—2019 年采集的572份牦牛鼻拭子运用 qPCR技术检测牛支原体(Mb)、多杀性巴氏杆菌(Pm)、溶血曼氏杆菌(Mh)、睡眠嗜组织菌(Hs)、化脓隐秘杆菌(Tp)5 种病原.结果显示,Mb、Pm、Mh、Hs 和 Tp 检出率分别为 18.18%(104/572)、11.89%(68/572)、6.99%(40/572)、7.17%(41/572)和 5.77%(33/572).2019 年 6 月 Mb、Pm和Tp样品阳性率显著高于 2018年 11 月样品;不同性别中 5 种病原阳性率差异不显著;不同年龄段中 Mh组间阳性率差异显著;不同饲养模式下 Mb、Pm、Mh和Tp组间阳性率差异显著.混合感染可以存在这 5 种病原之间,二重感染阳性率较高的为牛支原体/多杀性巴氏杆菌 4.55%(26/572),三重感染阳性率较高的为牛支原体/多杀性巴氏杆菌/溶血曼氏杆菌 1.57%(9/572),四重感染最高的为牛支原体/多杀性巴氏杆菌/溶血曼氏杆菌/睡眠嗜组织菌0.52%(3/572),且存在同时在一例样品中检出 5 种病原.结果表明,西藏那曲地区牛呼吸道疾病综合征细菌病原牛支原体和多杀性巴氏杆菌占优,且存在两种以上病原混合感染.

双歧杆菌是益生菌乳酸杆菌中的一种,因其对糖类的代谢途径有两种,被称为双歧途径,即双歧杆菌.”肠道生理”主要指的是胃肠道(GI)的生理作用.双歧杆菌的主要功能是通过增强其黏附肠粘膜的比例来改善胃肠道肠黏膜通透性、抑制溃疡性肠结炎;并且起到调节上皮屏障功能、以及抑制其它微生物病原体黏附肠道来影响肠道菌群的比例;个别菌属的双歧杆菌还可以调节肠道的免疫系统来维持宿主肠道的健康状态.本文通过对国内外相关文献的查阅,就双歧杆菌对肠道生理的调节机制及作用进行整理.

为筛选敏感、特异的住肉孢子虫(Sarcocystis spp.)PCR检测方法,对以住肉孢子虫18S rRNA、28S rRNA和线粒体细胞色素C氧化酶I基因(cox 1)的部分片段为靶基因设计的3套引物建立的PCR方法进行敏感性和特异性试验,并对田间采集的100份牛源和猪源肌肉样品进行检测.结果显示,以18S rRNA和28S rRNA为靶基因的PCR检测方法的敏感性相似,DNA最小检出量均为1×10-2 ng/μL;而以cox 1为靶基因的PCR检测方法敏感性相对较低,DNA的最低检出量为1 ng/μL.对7种不同寄生虫DNA进行特异性试验,结果以cox 1基因为靶基因的PCR方法特异性较好,仅能够扩增出枯氏住肉孢子虫(Sarcocystis cruzi)DNA;以18S rRNA为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫和微小隐孢子虫也有相似扩增条带;以28S rRNA为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫、微小隐孢子虫和欧猥迭宫绦虫DNA也能扩增出杂带,但大小不符.利用3种方法对100份牦牛和猪肉样品进行扩增,发现以18S rRNA、28S rRNA和cox 1为靶基因的PCR法的阳性率分别为36.00％(36/100)、43.00％(43/100)和38.00％(38/100).结果表明,以cox 1为靶基因的PCR法有良好的特异性,适合用于田间动物肌肉样品中住肉孢子虫的检测,为开展动物住肉孢子虫病分子流行病学及防控研究提供了依据.

益生枯草芽孢杆菌可以替代部分抗生素,安全无污染,在临床上具备治疗、预防细菌性肠道疾病的功效.为研究牦牛源枯草芽孢杆菌对大肠埃希氏菌是否具有益生作用,试验采用体外抑菌试验、药敏试验、大肠埃希氏菌攻毒和制作石蜡切片观察肠道组织变化的方法,探究其益生作用.结果 表明,在4株牦牛源枯草芽孢杆菌中,Yak-KC7的抑菌效果最佳,抑菌直径达到(25±1)mm;其次是Yak-KC1、Yak-KC5、Yak-KC6,抑菌直径分别达到(17±1)、(22±2)、(20 ±2) mm.从病理切片得出,试验组肠道组织较对照组大幅改善.因此,该菌具有治疗大肠埃希氏菌疾病的作用,有作为益生菌株的潜能,为西藏地区益生菌种提供了参考.

为了解西藏那曲牦牛莫拉杆菌的感染及耐药情况,本研究无菌采集具有体温升高、眼睛红肿、持续性流泪、眼角黄色脓液、失明等临床症状牦牛的28份鼻拭子和30份眼拭子样品,经细菌的分离纯化、革兰氏染色、生化试验鉴定结果初步表明,本研究从牦牛鼻拭子样品中里分离出了2株莫拉杆菌.并经16S rRNA的PCR扩增及其序列分析结果显示,该基因序列与GenBank登录的其它莫拉杆菌相应基因序列的同源性为97％～ 100％;该基因进化树结果显示,分离株与莫拉杆菌(DQ153089.1和NR 043583.2)聚为一支,进一步表明本研究分离的2株细菌均为莫拉杆菌,患病牦牛的红眼病是由该菌感染引起.药敏试验结果显示该菌对环丙沙星、氧氟沙星、红霉素、新霉素、丁胺卡那及诺氟沙星6种抗生素高度敏感,而对临床上常用的青霉素、卡那霉素、庆大霉素、复方新诺明和多西环素5种抗生素均耐药.本研究为那曲及其他牧区、半农半牧区的牦牛传染性角膜结膜炎的用药提供了参考依据.

传染性角膜结膜炎是一种常见的急性接触性传染病,该病在牦牛群体中流行广泛,严重影响高原畜牧业产能,造成较大经济损失.本文从传染病研究角度总结了牦牛传染性角膜结膜炎的研究进展,旨在为高原地区牦牛传染性角膜结膜炎的防治提供参考.

为了解西藏拉萨市家禽禽流感抗体水平,2017年8月随机选择免疫过H5禽流感疫苗的8个规模养殖场、2个散养户、3个活禽交易市场,共13个群体,采集1041份家禽血清样品进行H5、H7、H9亚型禽流感HI抗体检测.结果显示:H5亚型禽流感免疫抗体合格率为45.73％,H7、H9亚型抗体阳性率分别为21.13％、52.64％;养殖场、散养户和活禽交易市场的不同亚型抗体水平存在较大差异,规模化养殖场的H7亚型抗体阳性率最高(29.92％),活禽市场的H5、H9亚型阳性率最高(78.16％、79.31％),散养户的所有亚型抗体阳性率均最低.结果表明,拉萨市H5亚型禽流感疫苗免疫效果较差,特别是散养户,疫病发生风险较高,H7、H9亚型疑似自然感染率较高,应进一步查明原因,及时采取相应的措施,防止疫情发生.

鸡源沙门氏菌作为重要的食源性病原菌,其血清型分布和致病性研究对于维护公共卫生安全具有重要意义.本研究分别在西藏拉萨市养鸡密集的城关区、曲水县、达孜县、墨竹工卡县、堆龙德庆县5个地区,选择12个养鸡场,采集疑似发病鸡样品121份,最终分离鉴定出104株沙门氏菌.血清学鉴定结果显示,这104株沙门氏菌分属于4个血清群,其中A群(O2) 13株、C1群(O7) 29株、C2群(O8)9株、D群(O9) 53株;优势血清群为D群(51％),其次为C1群(27％).PCR扩增结果显示,这104株沙门氏菌和标准阳性对照均扩增出invA基因片断,表明均为致病性沙门氏菌.动物致病性试验结果显示,7日龄雏鸡接种后感染率可达100％.上述结果表明,拉萨市鸡源沙门氏菌流行较为普遍,且均有致病性,会对当地禽产品卫生安全带来威胁,因此西藏地区需要加强鸡源沙门氏菌的控制.

为了解拉萨市H9亚型禽流感和新城疫的流行现状,2017～2018年,在拉萨市7个规模养殖场和8个活禽交易市场进行随机采样,对所采集的1192份棉拭子进行H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒分离与分型鉴定.结果显示:H9亚型禽流感病毒阳性率为0.84％(95％CI:0.4,1.5),新城疫病毒阳性率为3.27％(95％CI:2.4,4.4).其中活禽交易市场的新城疫病毒的阳性率(7.04％)高于养殖场(0.58％)(P<0.01).结果表明,拉萨市H9亚型禽流感和新城疫流行率不高,但应加强活禽交易市场的清洗、消毒工作,以及完善养殖场防疫、检疫程序,防治禽流感及新城疫的流行.

本研究对西藏日喀则市岗巴县某羊场疑似患有溶血性曼氏杆菌的病羊内脏组织样品进行病原分离,通过形态学鉴定、动物致病性试验和分子生物学鉴定.结果 表明,所分离的菌株符合溶血性曼氏杆菌的基本特征,通过细菌16srRNA测序和结果比对,确定所分离的细菌为溶血性曼氏杆菌.本研究对探讨该羊场发病死亡原因和当地疫病流行情况研究提供了一定的科学依据.

为了解拉萨市禽流感流行情况,2017年11月-2018年3月,在拉萨市6个养殖场和11个活禽交易市场,随机采集1 394份棉试子进行禽流感病毒分离和分型鉴定.结果显示:H9亚型禽流感病毒阳性率为2.87％,未检出H3、H5、H6、H7等其他亚型病毒;活禽市场H9亚型阳性率(4.64％)显著高于养殖场阳性率(0.35％,P＜0.01).结果表明,拉萨市高致病性禽流感流行风险较小,低致病性禽流感流行以H9亚型为主,且流行率不高,但应进一步加强养殖环节的防疫、检疫,以及活禽市场的清洗、消毒等工作,防止禽流感传入和流行.

为了解拉萨市鸡沙门氏菌病的流行情况,探讨主要发病原因,2015年4月至2016年9月,对拉萨市5个县(区)12个集约化养鸡场进行了流行病学调查.结果显示:所采集的1203份样品中,共检测出沙门氏菌589株,阳性率达48.96%,说明拉萨市鸡沙门氏菌感染较为普遍;在所检测的样品中,种鸡、种蛋检出率分别为41.00%和37.00%,说明种鸡沙门氏菌带菌现象较为严重;病鸡样品检出率为70.54%,其中成年鸡为57.63%、鸡舍环境样本阳性率为16.67%,饲料阳性率为11.60%,说明这些都是造成沙门氏菌水平传播的主要风险因素.