目的:研究芍药苷对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞株LX-2活化及自噬的影响,初步探讨芍药苷抗肝纤维化的作用机制.方法:采用不同浓度芍药苷分别作用于LX-2及TGF-β1诱导的LX-2细胞,用MTT法检测芍药苷对细胞活力、细胞增殖的影响,选出最合适的芍药苷干预浓度;采用流式细胞学实验及MTT法检测芍药苷对细胞凋亡及增殖的影响;蛋白免疫印迹法检测芍药苷对细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin 1、Atg5、趋化因子CXC配体2(CXCL12)、趋化因子受体4(CXCR4)、β-catenin蛋白水平的变化;ELISA法检测芍药苷对细胞炎症因子TNF-α、CXCL12、IL-1β、IL-6的影响.结果:芍药苷能抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞的活性及生存率(P<0.05).芍药苷能促进LX-2细胞的凋亡,抑制LX-2细胞的增殖;与对照组相比,TGF-β1诱导的LX-2细胞α-SMA、LC3-Ⅰ/Ⅱ、Beclin 1、Atg5、CXCL12、CXCR4、β-catenin蛋白水平及TNF-α、CXCL12、IL-1β、IL-6水平明显增加(P<0.05),而芍药苷预处理能逆转上述效应(P<0.05).TGF-β1能促进LX-2细胞炎症因子TNF-α、CXCL12、IL-1β、IL-6的表达(P<0.05),而芍药苷预处理能抑制上述炎症因子的表达水平(P<0.05).结论:芍药苷能抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞活化及自噬水平.

文章考证鳖甲历代演变过程,为其临床应用及新药开发提供参考.通过检索网络数据平台及实地查阅文献等途径对古籍记载的鳖甲别名、基原、产地、品质、性能、采收炮制、功效主治、使用注意等方面进行系统梳理及分析.经考证可知,鳖甲别名多由鳖的别称或俗名加之背甲特点得来.基原上,中华鳖的背甲是唯一来源.鳖甲道地产区在邻长江水系的两湖地区.品质上,古代多以肋数评价鳖甲品质,现不建议将肋数作为评价标准.古籍记载其性味多为咸平.炮制上,净制鳖甲需注意不用"煮脱者",炮制辅料中醋占主导.基于考证结果,建议应用涉及鳖甲时选取中华鳖为基原,依功效更其性能为咸微寒,净制鳖甲不用"煮脱者".

目的:分析鳖龙软肝片联合恩替卡韦对乙型肝炎肝硬化患者肝癌发病率的影响,评价临床疗效.方法:采用回顾性分析法,纳入乙型肝炎肝硬化患者295例,经过1:1倾向评分匹配后,根据用药情况分为联合用药组和恩替卡韦组各71例,观察期为从首次诊断为乙型肝炎肝硬化到确诊原发性肝癌的时间,或从肝硬化首次诊断到5年随访结束,统计观察期内两组肝癌发病例数、肝癌年累积发病率及各节点的肝癌发病率.结果:①联合用药组在观察期内的肝癌总发病率低于恩替卡韦组(P=0.033),1年、3年、5年的肝癌累积发病率低于恩替卡韦组(P=0.001);②联合用药组鳖龙软肝片的连续服用时间为1年、2年、3年、4年、5年时肝癌发病率为12.5％、11.1％、11.1％、8.3％、6.1％,连续用药时间越长,肝癌发病率越低(P=0.026).结论:①鳖龙软肝片联合恩替卡韦在降低肝癌发病率方面优于单纯恩替卡韦治疗;②在相同基线特征下,随着鳖龙软肝片服用时间的延长,乙型肝炎肝硬化患者的癌变率呈降低趋势.

Objective:To explore the key targets and mechanism of Bielong Ruangan decoction in the treatment of liver cancer based on network pharmacology and molecular docking.Methods:Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP) database, PubChem database and PharmMapper database were used to search and screen the chemical components and related targets of Bielong Ruangan decoction and the targets of liver cancer diseases. The network diagram of " Bielong Ruangan decoction-traditional Chinese medicine-active ingredient-predicted target-disease" was constructed; Protein-protein interaction (PPI) network were analyzed through String database; gene ontology (GO) enrichment analysis was performed through WebGestalt database; Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) enrichment analysis was carried out through KEGG Orthology Based Annotation System (KOBAS) database; Molecular docking of the active components and core target proteins of Bielong Ruangan decoction was carried out by using PyMOL, Auto DockVina and other software.Results:Bielong Ruangan decoction had 67 active components, 154 liver cancer targets and 244 pathways. According to the analysis of network pharmacology, Bielong Ruangan decoction may play an anti-cancer role through key targets such as epidermal growth factor receptor (EGFR), mitogen activated protein kinase 1 (MAPK1), estrogen receptor 1 (ESR1), MAPK8, serine threonine protein kinase 1 (AKT1), MAPK14, cysteine protease 3 (CASP3), cyclin-dependent kinase 2 (CDK2), bone morphogenetic protein 2 (BMP2), aldose reductase (AKR1B1) and other key targets. KEGG enrichment analysis showed that the treatment of liver cancer by Bielong Ruangan decoction involved the regulation of vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling pathway, tumor necrosis factor (TNF) signaling pathway, thyroid hormone signaling pathway, T cell receptor signaling pathway and other pathways. The results of molecular docking showed that the binding energy of all compounds to protein was less than -5.6 kcal/mol, indicating that each compound and each protein could bind well.Conclusions:Bielong Ruangan decoction participates in the treatment of liver cancer through " multi-component, multi-target and multi-channel" ways, and plays an anti-cancer role mainly by regulating the proliferation and invasion of tumor cells and tumor inflammatory microenvironment.

极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD,OMIM 201475)是一种是由于极长链酰基辅酶A脱氢酶(VLCAD)的编码基因ACADVL(OMIM609575)先天缺陷导致长链脂肪酸氧化障碍的一种常染色体隐性遗传病,是发病率居第二位的先天性脂肪酸氧化障碍性疾病[1].VLCAD是线粒体内脂肪酸β氧化中的第一步关键酶,催化含14～18个碳的脂酰基辅酶A脱氢[2],其缺陷导致脂肪酸β氧化过程受阻、供能障碍及长链酰基肉碱蓄积,从而对心肌、肝脏、骨骼肌等产生毒性作用.由于VLCADD发病率低,临床表现存在异质性,常规实验室检查诊断较困难,常容易误诊及漏诊.湖南中医药大学第一附属医院2021年8月收治1例VLCADD患者,现将其临床资料及相关文献回顾性总结如下.

患者,男性,58岁,主因"腹痛、身目尿黄伴乏力1月余,恶心呕吐、纳差半月余"于2020年8月17日入院.1个月前患者无明显诱因出现持续性上腹痛,进食后明显加重,无恶心、呕吐,无畏寒、发热等其他不适,当地医院胃镜:1.胃潴留;2.慢性浅表性胃炎;3 .十二指肠炎;4 .Barrett食管.予"阿莫西林克拉维酸钾胶囊2片2次/d"口服;服用2d后上腹痛明显缓解,但开始出现身目尿黄、乏力、全身瘙痒,当地医院查肝功能:ALT 117 .6 U/L ,AST 66 U/L ,Alb 39 .2 g/L ,TBil 124 .7 μmol/L , DBil 74 .7 μmol/L.腹部B超:瓷化胆囊,胆总管上段管壁欠光滑.患者停用阿莫西林克拉维酸钾,辗转多家医院治疗,病毒性肝炎全套、自免肝全套、输血四项、铜蓝蛋白、结缔组织病全套、C12、甲状腺功能三项、肿瘤标志物均未见异常;上腹部MRI;1.考虑胆囊结石并胆囊炎.2.脾脏多发血管瘤.3.右肾错构瘤.4.肝囊肿.予以护肝、退黄、抗感染等对症支持治疗,并于8月3日行ERCP+ ENBD术治疗,患者自觉症状无好转,反复复查肝功能仍明显异常,故于8月17日入我院.入院症见:患者纳差,睡眠差,小便黄,大便黄,偶为陶土色,4～5次/d,水样便,量不多,未见黏液脓血改变,体质量减轻20余斤.

目的:基于网络药理学从"多成分-多靶点-多通路"的角度探讨鳖龙软肝汤(BLRGD)抗肝纤维化-肝硬化-肝癌(HF-LC-PLC)的物质基础与作用机制.方法:通过TCMSP数据库及PubChem数据库筛选BLRGD中药的化学成分及其对应的作用靶点,通过UniProt数据库将得到的所有靶点进行校正.利用GeneCards数据库以"Hepatic Fibrosis、Cirrhosis、Liver Cancer"为检索词查询疾病靶点,通过Cytoscape3.7.1软件对Drug-Disease进行可视化网络分析的展示,利用KOBAS在线数据库对上述靶点进行基因本体(GO)分析与KEGG通路分析,利用STRING平台和Cytoscape3.7.1软件绘制蛋白互作(PPI)网络图,分别通过OmicShare平台和Cy-toscape 3.7.1软件对GO和KEGG富集分析结果进行可视化.结果:通过筛选共得到BLRGD的36个有效活性成分,116个靶点基因,HF-LC-PLC的靶点基因共3063个,两者共同的靶点基因64个.通过化合物-靶点网络和PPI网络互作筛选出与HF-LC-PLC相关度较大的核心成分是paeoniflorgenone(芍药苷),albiflorin(芍药内酯苷),hederagenin(常春藤皂苷元),bisdemethoxycurcumin(双去甲氧基姜黄素)等,核心靶点是IL6、MAPK8、CCND1、RELA、ICAM1等,核心通路包括Metabolic pathways、TNF、Pathways in cancer等.结论:BLRGD治疗HF-LC-PLC是一个"多成分-多靶点-多通路"的复杂过程,为进一步研究BLRGD抗HF-LC-PLC的物质基础及作用机制提供了理论依据.

目的:观察芪参汤对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者的临床疗效及对肠道菌群稳态的影响.方法:30例NASH患者随机分为治疗组(15例)和安慰剂组(15例),其中治疗组给予芪参汤治疗,安慰剂组给予芪参汤模拟剂治疗,疗程4周.分别观察2组患者治疗前后生化及纤维化指标的变化.另选取15例健康受试者作为对照,收集粪便样本通过16S rRNA检测各组肠道菌群的多样性和丰度.结果:与组内治疗前比较,芪参汤组治疗后AST、ALT、GGT、TC、TG、HA、LN、PⅢNP、CⅣ、LSM和CAP明显降低,HDL明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),2组治疗后组间比较,芪参汤组均明显优于安慰剂组,差异均有统计学意义(P＜0.05).相关性分析结果显示,Phascolarctobacterium、Lactobacillus、Bifidobacterium、Akkermansia的丰度分别与LN、HA、PⅢNP、CIV、CAP、LSM和GGT水平呈现显著负相关,而Fusobacterium、Coprococcus、Bilophila和Prevotella的丰度分别与LN、HA、PⅢNP、CIV、CAP、LSM和GGT水平呈现显著正相关.此外,芪参汤组治疗后OTU、Chaol和Shannon指数与同组治疗前及健康受试者比较均明显增加,Simpon指数明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).同时,与同组治疗前比较,芪参汤能够显著增加Clostridium、Roseburia、Eubacterium、Phascolarctobacteri-um、Lactobacillus、Parabacteroides、Pseudomonas、Bifidobacterium、Corynebacterium和Akkermansia菌属丰度,降低Faecalibacterium、Peptostreptococcus、Erysipelatoclostridium、Flavobacterium、Bilophila和Escherichia菌属丰度,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:芪参汤能通过增加NASH肠道菌群多样性和稳态,从而改善肝功能、血脂异常和纤维化水平,达到治疗NASH的作用.

目的 观察芪参汤对肝纤维化大鼠肝组织辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的影响,探讨其抗肝纤维化作用机制.方法 40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、芪参汤组及秋水仙碱组,每组10只.采用四氯化碳腹腔注射法制备肝纤维化大鼠模型.造模期间芪参汤组及秋水仙碱组分别给予芪参汤(2 g/mL)及秋水仙碱混悬液(20 mg/L)灌胃,空白组、模型组予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续8周.全自动生化分析仪检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及总胆红素(TBil)水平;ELISA检测肝组织白细胞介素(IL)-17A和IL-10含量;免疫组化检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测肝组织Th17和Treg比例;Western blot和RT-PCR分别检测肝组织维甲酸相关孤儿受体γt(ROR-γt)、叉头状转录因子p3(Foxp3)蛋白和mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠肝纤维化评分、胶原染色面积明显增加(P<0.05),血清AST、ALT、TBil水平明显升高(P<0.05),IL-17A含量明显增加、IL-10含量明显减少(P<0.05),肝组织TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显升高(P<0.05),Th17比例增加、Treg比例减少,Th17/Treg比值明显增加(P<0.05),肝组织ROR-γt蛋白和mRNA表达明显升高,Foxp3蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,芪参汤组和秋水仙碱组肝纤维化评分、胶原染色面积明显减少(P<0.05),血清AST、ALT、TBil水平明显降低(P<0.05),IL-17A含量明显减少,IL-10含量明显增加(P<0.05),肝组织TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显降低(P<0.05),Th17比例减少,Treg比例增加,Th17/Treg比值明显降低(P<0.05),肝组织ROR-γt蛋白和mRNA表达明显降低,Foxp3蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 芪参汤可抑制大鼠肝纤维化,其作用机制可能与减少胶原纤维增生、改善大鼠肝功能、降低炎症因子水平、恢复Th17/Treg平衡有关.

目的:分析中晚期原发性肝癌患者的临床特征及死亡原因,探讨影响中晚期原发性肝癌住院患者死亡的危险因素,以期为原发性肝癌的诊治提供参考.方法:收集2015年1月至2020年1月在湖南中医药大学第一附属医院感染科死亡的56例中晚期原发性肝癌患者,对其性别、年龄、临床表现、死亡原因等临床资料进行回顾性分析,采用Cox比例风险回归模型进行单因素和多因素分析.结果:56例死亡患者中,男性患者41例(73.2％),女性患者15例(26.8％);32例患者(57.1％)有慢性乙型病毒性肝炎感染病史,50例患者(89.3％)有肝硬化,29例患者(51.8％)甲胎蛋白平>400μg/L.最常见的临床症状为腹胀(71.4％,40/56)及乏力(62.5％,35/56).全组患者中位生存时间7.7月.首要死亡原因为多脏器功能衰竭(51.8％,29/56),其次为失血性休克(33.9％,19/56).Cox回归模型分析结果显示:肿瘤治疗方式、门静脉癌栓与中晚期原发性肝癌患者的预后相关.结论:门静脉癌栓、肿瘤治疗方式是中晚期原发性肝癌的独立预后因素.临床医生应提高原发性肝癌的早期诊断率,尽可能采取多种综合治疗方式治疗早中期肝癌;对晚期原发性肝癌患者以对症支持治疗为主,积极治疗其并发症,尽可能延长患者的生存时间,提高患者的生活质量.

目的 检测肝纤维化小鼠粪便和肝组织各胆汁酸含量变化,分析芪参汤抗小鼠肝纤维化潜在机制和靶点.方法 30只C57BL/6JNifdc小鼠随机分为空白组、模型组和芪参汤组,每组10只.采用蛋氨酸-胆碱缺乏饲料喂养诱导小鼠肝纤维化模型,造模期间芪参汤组灌胃芪参汤药液(18.8 g/kg),给药体积1 mL,空白组和模型组予等体积蒸馏水,连续8周.HE染色、油红O染色和天狼猩红染色观察肝组织病理变化;全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-10、IL-6、转化生长因子-β1(TGF-β1)和CXC趋化因子配体12(CXCL12)含量;高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测小鼠粪便和肝组织22种胆汁酸含量变化.结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量、肝湿重及肝指数显著降低;肝细胞水肿、脂肪变性明显,纤维结缔组织增生;血清AST、ALT水平显著升高,IL-10含量减少,TGF-β1、CXCL12和IL-6含量增加,差异均有统计学意义(P<0.01);粪便胆酸(CA)、牛磺胆酸(TCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)、β-鼠胆酸(β-MCA)、牛磺β-鼠胆酸(Tβ-MCA)、牛磺猪胆酸(THCA)含量显著增加,猪胆酸(HCA)、猪去氧胆酸(HDCA)、牛磺猪去氧胆酸(THDCA)、ω-鼠胆酸(ω-MCA)和牛磺ω-鼠胆酸(Tω-MCA)含量明显减少,肝组织TCA和β-MCA含量显著增加,HDCA、石胆酸、ω-MCA和Tω-MCA含量显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).与模型组比较,芪参汤组小鼠体质量、肝湿重及肝指数显著升高,肝组织形态结构、肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润和肝纤维化程度有所改善;血清AST、ALT水平降低,IL-10含量增加,TGF-β1、CXCL12和IL-6含量减少,差异均有统计学意义(P<0.01);粪便TCA、CDCA、β-MCA、Tβ-MCA、α-鼠胆酸含量显著减少,HDCA、THDCA、熊去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、ω-MCA、Tω-MCA和去氢胆酸(DHCA)含量显著增加,肝组织TCA、β-MCA和Tβ-MCA含量显著减少,TUDCA、ω-MCA和Tω-MCA含量显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 芪参汤可能通过调节粪便和肝组织胆汁酸代谢,改善小鼠肝纤维化水平,调节细胞因子表达,发挥抗肝纤维化作用.

目的 探讨阿魏酸(FA)对高糖诱导损伤的内皮祖细胞(EPCs)生物学功能和超氧化物歧化酶(SOD)的影响.方法 体外分离和培养人脐带血EPCs,通过观察细胞形态、双荧光染色法及免疫荧光细胞化学染色法等技术对培养的EPCs进行鉴定.将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,分别在不同浓度梯度FA(0、1、2、4、8、16 mg/L)条件下干预培养,确定FA促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度.另将高糖诱导损伤的EPCs随机分为实验组(最佳浓度FA干预)和模型对照组(PBS干预),同时设置正常EPCs对照组(PBS干预).采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、黏附能力测定试验、Matrigel体外成管试验、划痕实验及ELISA法检测FA对细胞增殖、黏附、成血管、迁移能力及对EPCs分泌SOD的影响.结果 FA促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为8 mg/L;与正常组比较,高糖受损EPCs增殖、迁移、黏附及成管能力显著降低(P＜0.05);当用FA干预后,高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移及成血管能力显著增强(P＜0.05).ELISA检测发现,与正常组比较,高糖受损EPCs分泌SOD能力显著下降(P＜0.05),而用FA干预后,能部分逆转EPCs分泌SOD能力,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FA处理能改善高糖受损EPCs生物学功能,但对高糖受损EPCs分泌SOD作用不明显.

Objective: To study the isolation, purification, and differentiation of mesenchymal stem cells(MSCs) into nerve cells in rats in vitro. Methods: Bone marrow mononuclear cells from femur and tibia of rats were obtained sterilely with gradient centrifugation by using Percoll (1.073×103 g/L ). The low density cells including MSCs were cultivated and induced to differentiate into nerve cells with 3 different treatment protocols. Neuron-specific enolase (NSE), neurofilament (NF), glial fibrillary acidic protein (GFAP), and Nestin were detected by using immunocytochemistry method, and quantitation analysis of neuronal differentiation. Results: The MSCs were successfully cultivated primarily and secondly. All 3 treatment protocols induced MSCs to differentiate into neuron-like cells. The neuron-like cells expressed NSE, NF, and Nestin,but could not express GFAP. Conclusion: The MSCs can be cultured and passaged in vitro and induced to differentiate into non-mesenchymal cells.

Several researches explored the stem cells. Recently,Studies of stem cells indicated the existence of another kind of stem cells, besides of embryonic ones, which have the ability of self-renewing and differentiation. Generally, they were called adult stem cells. Mesenchymal stem cell (MSCs) is the kind of ones, which can be found in bone marrow. With the different differentiated conditions, MSCs can differentiate into a variety of non-mesenchymal cells, including osteoblasts, chondroblast, adipocytes, nerve cells, and so on. MSC is easier for separation, cultivation, proliferation and introduction and expression of exogenous gene compared with other stem cells. In addition, MSCs have be expected to be new target cells of cell and gene theraphy. This review focused on the possibility of improving the recovery of injured spinal cord by means of implantation of cultivated MSCs in vitro.