目的 探讨MDA-MB-231乳腺癌细胞培养上清液对人脂肪间充质干细胞(hAdMSC)迁移、增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 将MDA-MB-231细胞上清液和不含胎牛血清的RPMI-1640培养基以1∶4的体积比混匀后培养的hAdMSC为MDA-MB-231上清液组.向MDA-MB-231上清液组添加10µmol/L Reparixin(CXCR1/2抑制剂)为CXCR1/2抑制剂组;向MDA-MB-231上清液组添加10 nmol/L GSK690693(Akt抑制剂)为Akt抑制剂组.无任何刺激进行培养的hAdMSC为对照组.细胞划痕实验检测各组hAdMSC的迁移能力,CCK-8实验检测各组hAdMSC增殖情况,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞凋亡实验检测各组hAdMSC凋亡率,Western blot检测各组hAdMSC的mTOR/磷酸化mTOR(p-mTOR)和Akt/磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达.结果 与对照组相比,MDA-MB-231上清液组hAdMSC的24h和48h细胞划痕闭合面积、细胞增殖水平以及p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均增加,细胞凋亡率降低(P＜0.05);与MDA-MB-231上清液组相比,Akt抑制剂组和CXCR1/2抑制剂组hAdMSC的48h细胞划痕闭合面积、细胞增殖水平以及p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量均降低,细胞凋亡率均增加(P＜0.05).结论 MDA-MB-231乳腺癌细胞培养上清液通过激活Akt-mTOR信号通路促进hAdMSC迁移和增殖,抑制hAdMSC凋亡,其中IL-8-CXCR1/2轴发挥关键作用.

目的 探讨高糖环境下B细胞趋化因子(BCA)-1对人脂肪间充质干细胞(hAdMSC)增殖和迁移的影响及其分子机制.方法 高糖培养基培养的hAdMSC分为高糖对照组、BCA-1组(浓度分别为25、50、75μmol/L)和细胞外信号调节激酶(Erk)抑制剂组.CCK8实验检测各组hAdMSC增殖的吸光度值(A值),Transwell实验检测各组hAdMSC迁移率,Western印迹或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组hAdMSC的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝裂原活化蛋激酶(MAPK)或血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果 细胞高糖环境下,25、50、75μmol/L BCA-1组hAdMSC的A值逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),hAdMSC的迁移率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01);BCA-1组hAdMSC的PI3K、MAPK、VEGF蛋白含量均随着BCA-1浓度的增加而高表达,差异有统计学意义(均P<0.01);与25、50、75μmol/L BCA-1组hAdMSC分别相比,相应各Erk抑制剂组hAdMSC的A值和迁移率均明显降低(均P<0.01),各Erk抑制剂组hAdMSC的PI3K、MAPK和VEGF蛋白表达均分别低于相应的BCA-1组hAdMSC,差异有统计学意义(均P<0.05).结论 高糖环境下,BCA-1通过PI3K-Erk-MAPK信号通路,上调hAdMSC旁分泌VEGF蛋白,促进hAdMSC增殖和迁移.

目的 探讨二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌肥厚模型线粒体动力学改变及对氧化应激的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和实验组,每组10只.空白组给予等量0.9％NaCl连续皮下注射1周;模型组给予5 mg·kg-1 ISO连续皮下注射1周复制心肌肥厚模型;实验组给予2％DFMO水溶液,连续给药10 d.比较3组大鼠的心脏指数和心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.将H9 C2心肌细胞分为空白组、模型组、实验组和对照组.空白组给予磷酸盐缓冲溶液处置;模型组给予10μmol·L-1 ISO作用48 h;实验组在加入10μmol·L-1 ISO前24 h加入1 mmol·L-1 DFMO处置;对照组在加入10μmol·L-1 ISO前24 h加入0.5 mmol·L-1腐胺.用蛋白质印迹(Western blot)法检测线粒体分裂蛋白(DRP1)和线粒体融合蛋白(MFN2)蛋白的表达水平,用单管多功能检测仪测定细胞内钙离子浓度,用试剂盒测定心肌细胞线粒体超氧化物的水平.结果 动物实验:空白组、模型组和实验组的心脏指数分别为(3.58±0.59),(3.74±1.49)和(3.62±0.76)mg·g-1,GSH-Px含量分别为(183.12±29.28),(149.60±24.24)和(173.29±23.59)U·mg-1,实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).细胞实验:空白组、模型组、实验组和对照组心肌细胞的DRP1蛋白相对表达水平分别为1,2.26±0.31,1.09±0.19和2.28±0.42,MFN2蛋白相对表达水平分别为1,0.77±0.13,1.16±0.02和0.95±0.11,细胞内钙离子浓度(荧光强度)分别为(66.10±4.54),(80.90±10.18),(61.60±5.30)和(73.00±8.06)abs·unit,实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 DFMO对心肌肥厚有保护作用,其机制与抑制线粒体分裂和氧化应激有关.

目的 揭示高糖环境下P物质(SP)对人骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖、迁移及成血管内皮细胞分化的影响,为其应用于治疗糖尿病皮肤溃疡等并发症提供依据.方法 细胞高糖模型分为高糖对照组、高糖SP组和高糖蛋白激酶B(Akt)抑制剂组;正常环境培养的BMSC为正常对照组.CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell细胞小室迁移实验检测BMSC迁移数目;各组BMSC进行成血管内皮细胞分化实验,酶联免疫吸附试验检测成血管内皮细胞分化后各组BMSC的CD31蛋白含量;基质胶网眼形成实验检测成血管形成能力.Western blot检测各组BMSC的Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况.结果 与正常对照组比较,高糖对照组吸光度(A450)值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均降低;与高糖对照组比较,高糖SP组A450值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均升高;与高糖SP组相比,高糖Akt抑制剂组上述指标均降低(P<0.01).结论 高糖环境下,SP可活化Akt通路促进BMSC增殖、迁移和血管内皮细胞分化.

目的 探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)增强顺铂对人肝癌HpeG2细胞杀伤作用及与组织蛋白酶B表达水平的关系.方法 该实验于2018年3月—2019年3月于齐齐哈尔医学院中心实验室进行,CCK8检测是利用96孔板,以每孔1×104个细胞接种,Western blot是利用6孔板,以每孔1×103个细胞接种,并随机将细胞分为顺铂组、GPS组、GPS+顺铂组、E-64+GPS+顺铂组、E-64+顺铂组.每组重复实验数3次(n=3).CCK8检测各组细胞增值抑制情况,利用Western blot检测法检测GPS组、GPS+顺铂组人肝癌HpeG2细胞内组织蛋白酶B表达水平.结果 CCK8结果:人参多糖联合顺铂对人肝癌HepG2细胞的杀伤效果明显增加,与单独使用顺铂相比联合用药对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用增强[(54.27±2.11)％vs(48.28±1.26)％],差异有统计学意义(t=4.219,P<0.05).组织蛋白酶抑制剂E-64在一定程度上抑制了GPS+顺铂组对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用[(47.37±0.98)％vs(53.88±1.36)％],差异有统计学意义(t=6.727,P<0.05).Western blot结果:GPS+顺铂组cathepsin B表达上调,顺铂单独作用组cathepsin B表达下调[(1.78±0.23)vs(1.27±0.17)],差异有统计学意义(t=3.089,P<0.05).结论 人参多糖增强了顺铂对人肝癌HpeG2细胞杀伤作用,杀伤作用增强可能与上调cathepsin B表达有关.

目的 以网络药理学技术探讨趋化因子-13(CXCL-13)对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和迁移的影响.方法 在线数据库预测CXCL-13作用于BMSCs的靶点.Metascape数据库对靶点的基因本体论和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析.STRING 11.0数据库进行蛋白质相互作用分析,Cytoscape 3.8的cytoHubba 0.1插件筛选核心基因编码的蛋白质.BMSCs分为对照组、CXCL-13组和PI3K抑制剂组.分别以MTT、流式细胞术和Transwell细胞小室迁移实验检测各组BMSCs的吸光度(A)值、细胞凋亡率和细胞迁移数目情况;ELISA检测各组BMSCs上清液表皮生长因子(EGF)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白含量.Western blotting检测各组BMSCs的Akt、磷酸化Akt (p-Akt)蛋白的表达.结果 CXCL-13作用于BMSCs 21个靶点.与细胞增殖相关的生物学过程包括干细胞增殖、调节内皮细胞增殖、正向调控平滑肌细胞增殖等32条;与细胞迁移相关的生物学过程包括调节细胞迁移、阿米巴状细胞迁移、调节内皮细胞迁移等22条.KEGG通路包括癌症途径、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等40条.核心蛋白包括肿瘤蛋白P53(TP53)、表皮生长因子受体(EGFR)、90kD热休克蛋白αB1(HSP90AB1)、蛋白激酶Cα (PRKCA)、雌激素受体2(ESR2)及前列腺素E受体4(PTGER4).与其他组相比,CXCL-13组BMSCs的吸光度(A)值和细胞迁移数目均显著增高(P＜0.01,n=15),细胞凋亡率明显降低(P＜0.01,n=15);PI3K抑制剂组BMSCs的A值、细胞凋亡率和细胞迁移数目与CXCL-13组相比均呈相反变化(P＜0.01,n=15).相对于对照组,CXCL-13组BMSCs的EGF和VEGF蛋白含量显著提高(P＜0.01,n=15),Akt和p-Akt相对表达均明显升高(P＜0.01,n=9);而PI3K抑制剂组EGF和VEGF蛋白含量、Akt和p-Akt相对表达呈相反变化.结论 CXCL-13激活PI3K-Akt通路促进BMSCs旁分泌EGF和VEGF蛋白,提高BMSCs增殖和迁移,抑制BMSCs凋亡.

目的 基于网络药理学分析黄精干预认知障碍的可能机制.方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选黄精的有效化合物,通过TCMSP及SwissTargetPrediction数据库筛选有效化合物靶点.通过OMIM、GeneCards、TTD、DrugBank数据库获得认知障碍的疾病相关潜在靶点.使用Venny 2.1平台获取黄精与认知障碍疾病的共同靶点.针对共同靶点,构建蛋白质与蛋白质相互作用(PPI)网络并进行可视化分析,同时进行基因本体论功能富集分析及京都基因和基因组百科全书通路富集分析.构建黄精有效化合物与疾病靶点的Circos关系图.结果 本研究共筛选出黄精有效化合物12个及其靶点141个,与1880个疾病靶点取交集后获得66个共同靶点;黄精有效化合物与疾病靶点的Circos关系图提示5,4′-二羟基黄酮、黄芩素、薯蓣皂苷元、β-谷甾醇4种有效化合物募集到的靶点较多.黄精干预认知障碍的关键靶点为蛋白激酶B、β淀粉样前体蛋白、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、血管内皮生长因子、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)14等.黄精干预认知障碍的潜在靶点涉及多个细胞组分、分子功能和生物学过程,其中生物学过程主要包括细胞对氮化合物的反应、MAPK级联反应调控、老化、血液循环、神经元死亡等;同时涉及多条信号通路,主要包括神经活性配体-受体相互作用、5-羟色胺通路、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B信号通路、内分泌抵抗通路等.结论 黄精中的多种化合物可能通过调节多个靶点以调控MAPK级联反应调控、老化、血液循环、神经元死亡等生物学过程,以及神经活性配体-受体相互作用、5-羟色胺、磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B、内分泌抵抗等多个通路,从而发挥改善认知功能的作用.

目的:探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖和运动的影响.方法:以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基,培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组;2组均添50 nmol/L趋化因子-8(CXCL-8),分别为A549 C组和BEAS-2B C组,若同时添加100 nmol/L triciribine(Akt抑制剂)分别为A549 CT组和BEAS-2B CT组;A549组加入100 nmol/L triciribine为A549 T组.正常条件下培养的hBMSCs为对照组.ELISA检测细胞上清液中CXCL-8含量和hBMSCs裂解液Akt、P-Akt蛋白的表达.MTT实验、流式细胞仪和transwell细胞小室实验分别检测各组hBMSCs吸光度值(A490值)、细胞凋亡率和细胞迁移数目.结果:与BEAS-2B上清液相比,A549上清液中CXCL-8含量明显升高.各组hBMSCs的A490值、细胞凋亡率、细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达等均具有显著差异,尤以A549 C组hBMSCs最明显.与A549 C组相比,A549 CT组hBMSCs的A490值和细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达均降低,细胞凋亡率升高较显著.结论:A549细胞表达的CXCL-8能激活Akt通路,促进hBMSCs增殖和运动.

目的 验证A549细胞对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖、凋亡的影响及其机制.方法 提取A549肺癌细胞和人正常肺上皮BEAS-2B细胞上清液,按1:4比例稀释为条件培养基(CM)培养hBMSCs为A549-CM组和BEAS-2B-CM组;正常培养的hBMSCs为对照组.利用MTT实验和Annexin V-PI细胞凋亡实验分别检测各组hBMSCs的增殖吸光度值(A值)和细胞凋亡率;ELISA实验分别检测各上清液中IL-8蛋白含量以及各组hBMSCs中Akt、p-Akt蛋白表达.结果 与对照组(0.97±0.19)和BEAS-2B-CM组(1.01±0.09)相比,A549-CM组hBMSCs的A值(1.79±0.13)明显升高,差异有统计学意义(F=125.930,P<0.01);A549-CM组细胞凋亡率均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);A549-CM组Akt、p-Akt蛋白表达均增高,差异有统计学意义(P<0.01).A549细胞上清液IL-8蛋白含量(18.16±2.23)μg/mL明显高于BEAS-2B-CM组上清液(10.07±1.55)μg/mL,差异有统计学意义(t=14.510,P<0.01).结论 A549细胞上清液高表达IL-8蛋白能够激活hBMSCs内Akt信号通路促进hBMSCs增殖,下调hBMSCs凋亡.

Abstract Interleukin-8 (IL-8) promotes cell homing and angiogenesis, but its effects on activating human bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and promoting angiogenesis are unclear. We used bioinformatics to predict these processes. In vitro, BMSCs were stimulated in a high-glucose (HG) environment with 50 or 100 μg/ml IL-8 was used as the IL-8 group. A total of 5 μmol/l Triciribine was added to the two IL-8 groups as the Akt inhibitor group. Cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured in BMSCs conditioned medium (CM). The changes in proliferation, apoptosis, migration ability and levels of VEGF and IL-6 in HUVECs were observed in each group. Seventy processes and 26 pathways were involved in vascular development, through which IL-8 affected BMSCs. Compared with the HG control group, HUVEC proliferation absorbance value (A value), Gap closure rate, and Transwell cell migration rate in the IL-8 50 and IL-8 100 CM groups were significantly increased (P<0.01, n=30). However, HUVEC apoptosis was significantly decreased (P<0.01, n=30). Akt and phospho-Akt (P-Akt) protein contents in lysates of BMSCs treated with IL-8, as well as VEGF and IL-6 protein contents in the supernatant of BMSCs treated with IL-8, were all highly expressed (P<0.01, n=15). These analyses confirmed that IL-8 promoted the expression of 41 core proteins in BMSCs through the PI3K Akt pathway, which could promote the proliferation and migration of vascular endothelial cells. Therefore, in an HG environment, IL-8 activated the Akt signaling pathway, promoted paracrine mechanisms of BMSCs, and improved the proliferation and migration of HUVECs.

目的 探讨三维培养条件下,骨形态发生蛋白-12(BMP-12)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖和成肌腱分化的影响.方法 静电纺丝技术制备PLGA/明胶材料.hBMSCs分为6组:对照组(Con),细胞正常培养;BMP-12组,细胞中添加10 ng/mL BMP-12培养;Triciribine组,BMP-12组细胞添加5μmol/L Triciribine;材料组(Material),hBMSCs种植在PLGA/明胶材料;3D-BMP-12组,材料组中添加10 ng/mL BMP-12;3I-Triciribine组,3D-BMP-12组添加5μmol/L Triciribine.各组hBMSCs均进行成肌腱诱导分化.扫描电子显微镜检测材料结构;CCK-8法检测各组细胞增殖;Western blot检测各组Scleraxis(Scx)、Tenomodulin(TNMD)和Tenascin-R、Akt、p-Akt蛋白表达.结果 与对照组相比,材料组、BMP-12组细胞生长数目均明显升高.与材料组相比,3D-BMP-12组hBMSCs细胞数量、Scx、TNMD和Tenascin-R蛋白表达均明显升高(P＜0.01),3D-Triciribine组hBMSCs上述检测指标均分别比3D-BMP-12组显著降低(P＜0.01).3D-BMP-12组hBMSCs的Akt、p-Akt蛋白表达均显著升高,3D-Triciribine组Akt、p-Akt蛋白表达均明显降低(P＜0.01).结论 BMP-12能激活Akt信号通路,促进生物材料上hBMSCs增殖和成肌腱分化.

目的 探讨高糖环境下B淋巴细胞化学引诱物(BCA-1)对人脂肪间充质干细胞(hAdMSCs)增殖和迁移的影响及其分子机制.方法 在细胞高糖模型下,设立高糖对照组、高糖BCA-1组、高糖Erk抑制剂组;正常环境下为正常对照组.CCK8实验检测各组hAdMSCs增殖的吸光度值(A值),Transwell细胞迁移实验检测各组hAdMSCs的迁移率,酶联免疫(ELISA)方法检测各组hAdMSCs中PI3K、MAPK和VEGF蛋白的表达.结果 细胞高糖环境下,高糖BCA-1组hAdMSCs的A值、迁移率均升高,差异有高度统计学意义(P<0.01);高糖BCA-1组hAdMSCs的PI3K、MAPK、VEGF蛋白含量高表达,差异有高度统计学意义(P<0.01);与高糖BCA-1组hAdMSCs比较,高糖Erk抑制剂组hAdMSCs的A值和迁移率均明显降低,差异有高度统计学意义(P<0.01),高糖Erk抑制剂组hAdMSCs的PI3K、MAPK和VEGF蛋白表达均分别低于高糖BCA-1组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 高糖环境下,高糖BCA-1通过PI3K-Erk-MAPK信号通路,上调hAdMSCs旁分泌VEGF蛋白,促进hAdMSCs增殖和迁移.

目的 验证趋化因子-13(CXCL-13)通过激活PI3K-Akt信号通路对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)迁移的影响.方法 无任何刺激的hBMSCs为对照组;80μmol/L CXCL-13刺激hBMSCs为CXCL-13组;hBMSCs先用25 nmol/L LY294002培养40 min,再添加80μmol/L CXCL-13为PI3K抑制剂组;hBMSCs先用50 nmol/L Triciribine培养30 min,再添加80μmol/L CXCL-13为Akt抑制剂组.细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验检测四组hBMSCs划痕面积闭合率和细胞迁移率;酶联免疫吸附试验检测四组人PI3K、Akt、P-Akt蛋白的表达.结果 CXCL-13组hBMSCs划痕面积闭合率和迁移率均高于对照组,PI3K抑制剂组和Akt抑制剂组hBMSCs划痕面积闭合率和迁移率均低于CXCL-13组(P<0.05或P<0.01);CXCL-13组人PI3K、Akt、P-Akt蛋白含量均高于对照组,PI3K抑制剂组和Akt抑制剂组人PI3K、Akt、P-Akt蛋白含量低于CXCL-13组(均P<0.01).结论 CXCL-13激活PI3K-Akt信号通路促进hBMSCs迁移.

Objective To explore the possible effect of C-X-C motif chemokine ligands13 (CXCL13) on the autophagy and proliferation of human mesenchymal stem cells (hBMSCs) and the underlying mechanisms. Methods The hBMSCs were divided into control group, hypoxia group, CXCL13 treatment group, and CXCL13 combined with SB203580 group. Except the control group, the rest of cells were cultured under the established hypoxia condition of 920 mL/L N2, 30 mL/L O2 and 50 mL/L CO2. The cells of CXCL13 treatment group were stimulated with 50 ng/mL recombinant CXCL13. In the combination group, the cells were preincubated with 20 μmol /L of MAPK inhibitor SB203580 for 30 minutes and subsequently treated with 50 ng/mL recombinant CXCL13. MTT assay was used to determine the proliferation of hBMSCs. The apoptosis rate of hBMSCs was analyzed by annexin V-FITC/PI double labeling and flow cytometry. The protein levels of nuclear factor-κB (NF-κB) and beclin-1 were measured by Western blot analysis. ELISA was used to measure the content of autophagy-related protein 7 (ATG7) in cell lysis buffer. Results Compared with the hypoxia group and the combination group. The cell proliferation, beclin-1 and NF-κB protein levels increased significantly in the CXCL13 treatment group however, the apoptosis rate decreased, and the level of ATG7 increased significantly in cell lysate. Conclusion Under hypoxic condition, CXCL13 promotes autophagy and proliferation of hBMSCs through the MAPK/NF-κB signaling pathway.

目的 观察高糖环境下雌激素对间充质干细胞增殖、凋亡的影响,并分析雌激素作用的分子机制.方法 在细胞高糖环境下,20 μmol/L雌激素刺激者为雌激素组、若在雌激素组添加10 nmol/LCC-90003,则为Erk抑制剂组,无任何刺激的为高糖对照组.利用MTT检测细胞增殖情况,并利用ELISA分析各组细胞中Caspase-3、Erk、P-Erk的表达.结果 相对于正常对照组、高糖对照组和Erk抑制剂组,雌激素组间充质干细胞增殖的A值以及SOD、Erk、P-Erk蛋白表达均显著提高(P＜0.01),而Caspase-3表达则呈现降低趋势(P＜0.01);与雌激素组相比,Erk抑制剂组SOD、Erk、P-Erk蛋白显著降低(P＜0.01),Caspase-3表达升高(P＜0.01).结论 雌激素通过Erk信号通路上调超氧化物歧化酶表达而保护间充质干细胞抗高糖损伤.