958 lung tissue samples of swine influenza were collected in Guangxi from 2013 to 2014 to further study the pathogenic mechanism and prevention and control technology of influenza virus, and influenza virus isolation and biological characteristics analysis of Eurasian avian influenza (ER-H1N1) were performed. The positive rate of the 14 strains of ER-H1N1 swine influenza virus isolated was 1.46%, with 8 gene pieces all from avian sublineages, followed by recombinant Pdm/09 H1N1 fragments. Although their HA cleavage site is PSIQSR↓GLF or GIF, which has typical low-pathogenicity characteristics, the isolated virus strain grows well on the cell, and after the BALB/c mouse challenge experiment, the evidence of the isolated strain multiplying in the respiratory tract of mice is obvious, and the mice lose weight quickly, all die within a week and are accompanied by severe systemic infection. Based on changes in the amino acid residues of the A/swine/Guangxi/6/2013 (No.6) strain, it is thought that the NA protein E119G mutation is the main site where highly dangerous changes happen. D N mutations in the PB2 strains G2, g14, g21, g30, S2, 32, 7, and 8 show that these strains are gradually adapting to human sources. According to the traits of strains 30, G2, G14, and G21, NP develops 375 , which boosts pathogenicity. In summary, the ER-H1N1 subtype influenza virus is widespread in the Guangxi swine herd, and it is pathogenic to mice, with the trend of genomes derived from Pdm/09 H1N1 fragments increasing.

采集广西25个猪场的病料,对猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性组织样品进行全S基因扩增.将41株全S基因进行序列比对及遗传进化分析,41株PEDV的S基因之间核苷酸同源性为94.8％～100％,与参考毒株核苷酸同源性为89.3％～99.4％.S基因进化树图谱显示,广西当前流行的PEDV可分为2个谱系.Attenuated-DR13、CV777和该研究中的 CHGXLC055-92013、CHGXLC055-52013、CHGXGP035-72013和 CHGXGP035-82013为 Cluster1;Cluster3包括该研究另外37株毒株、韩国株 Spk1、HuN和日本株NK等参考毒株.表明广西大部分毒株S基因与欧洲株CV777、LZC等国内早期毒株存在较大的差异,进化树亲缘关系比较远;在抗原表位区域存在较大变异,当前的CV777疫苗株在防控PEDV入侵时可能不会产生良好的免疫保护效果.

目的 利用定点突变技术突变Pdm/09 H1N1流感病毒的NA基因119位点并拯救,研究其生物特性.方法 利用重叠PCR的方法进行定点突变,再应用反向遗传学体系中的pBD-NA质粒后在293T细胞中转染拯救流感病毒,通过血凝试验和RT-PCR方法鉴定病毒拯救结果,通过细胞学和攻毒试验研究该位点变异的生物学意义.结果 定点突变测序结果显示,突变的pBD-NA质粒核苷酸第336位由A突变为G,使氨基酸位点发生E(核苷酸:GAA)到G(核苷酸:GGA)的变化,而其他位置的氨基酸均未发生改变.拯救的病毒转染后的细胞悬液接种MDCK细胞连续传代3代后突变毒株(rMT)血凝效价为27,亲本毒株(rWT)为26.神经氨酸酶的二级结构预测结果显示,rMT与rWT相比,Alpha Helix分值明显下降,均值同比下降约为10.62％,经突变后的rMT Alpha Helix结构分值表现为下降趋势.用rWT和rMT病毒攻毒BABL/c小鼠后第3天的小鼠肺组织、鼻甲骨、脾和肾的病毒滴度,rMT攻毒组均比rWT攻毒组高,鼻甲组织与肺脏中的病毒滴度相比差异不显著,脾和肾的差异显著.结论 NA119位点的定点突变对病毒的复制能力没有明显影响,突变株对BABL/c小鼠的致病力有一定增强,临床症状明显,神经氨酸酶活性下降.

为了解广西壮族自治区部分地区马属动物携带梨形虫的情况及种类分布,2019-2020年在广西壮族自治区防城港、崇左、百色与河池等地区共采集162份抗凝血,抽提后运用巢式PCR方法扩增18S rRNA基因并进行测序分析,以了解种类情况.结果 显示,防城港、崇左、百色与河池等四地马属动物的马梨形虫平均感染率为26.54％,分别为40.00％、10.76％、44.82％和10.52％;涉及3个种类,分别是马泰勒焦虫、东方泰勒焦虫、瑟氏泰勒焦虫,其中马泰勒焦虫为优势种;此外还有新发人兽共患的病原体Colpodella sp.和Sarcocystis gjerdei.结果 表明,广西壮族自治区4个地区的马属动物都携带梨形虫,且感染率较高,涉及种类较为丰富,应给以足够重视.

兽医实验室中血清抗体的检测主要采用ELISA检测方法,本文结合兽医实验室的实际操作总结对日常ELISA检测中常出现的问题进行探讨,发现ELISA检测中常见问题的影响因素包括样品的处理、实验操作方法、实验仪器设备等.提示在兽医实验室检测中必须严格掌握ELISA操作方法,减少或避免因操作失误而导致的实验失败,本文可为兽医实验室同行提供帮助.

为了解广西地区新型鸭呼肠孤病毒(novel Duck reovirus,NDRV)的分子流行病学特征并揭示其遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对某鸭场送检的病料进行病原鉴定,将鉴定为阳性的样品接种于9～10日龄SPF鸡胚尿囊腔进行病毒的分离,对分离到的毒株的σC基因进行扩增、克隆和测序,并与参考毒株σC 基因序列进行比对分析,绘制系统进化树.结果表明:分离到一株NDRV毒株,命名为NDRV-GX株.该分离毒株与NDRV代表毒株高度同源,核苷酸相似性为92.5％～100％,氨基酸相似性为94.2％～100％;而与番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)及禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)分离毒株的核苷酸相似性为26.7％～37.2％,氨基酸相似性为27.8％～38.1％;与MDRV、ARV分离毒株处于进化树的不同分支,而与其他NDRV代表毒株处于同一分支.说明该分离毒株为NDRV,与NDRV代表毒株具有相近的遗传演化关系,同属于基因2型.

牛结核病是一种由牛型结核分枝杆菌引起的慢性人兽共患传染病,该病一年四季均可发生,被我国列为二类动物疫病.2020年,桂平市某奶牛场发生疑似牛结核病,经皮内变态反应检测出阳性样品16份.采集这16份皮内变态反应阳性牛的抗凝血样采用ELISA方法进行牛结核病γ-干扰素检测,结果诊断出8头牛结核病阳性奶牛.感染奶牛由桂平市动物疫病预防控制中心进行扑杀处理.据此建议,养殖场应该做好检疫和生物安全措施,防止该病的发生,在监测环节中可先用皮内变态反应检疫牛群,对于阳性牛再结合γ-干扰素ELISA方法进行综合判断,将更有利于牛结核病的检测和净化.

2018年和2019年广西区动物疫病预防控制中心分别对广西南宁、贵港、防城港、柳州、河池、来宾、百色和桂林8个市进行马传染性贫血的抽样调查.重点监测养马场、马术队、马属俱乐部等的马匹及骡等马属动物.两年共采集马血清5050 份、骡血清842 份,经马传染性贫血琼脂凝胶免疫扩散试验检测均为阴性.结果表明,马传染性贫血在以上8个市区发病感染率为0.

为了解广西地区口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)、布鲁氏菌病和小反刍兽疫(PPR)等重大动物疫病的免疫动态、疫情流行风险,按照国家动物疫病定点监测实施方案相关要求,2016—2018年运用ELISA和实时荧光定量PCR方法,对玉林市和百色市20个定点监测场点的猪、牛、羊开展病原学监测和抗体监测.病原监测结果显示:2016—2018年,未在牛羊群中检出FMD、PPR病原;2016年和2017年CSF病原检出率均为0.38％;3年内均有PRRS病原检出,检出率介于1.89％～6.32％.抗体检测结果显示:2016—2018年,猪O型FMD、CSF、PRRS和PR-gB抗体阳性率均在70％以上,A型FMD抗体阳性率逐年上升,NSP抗体和PR-gE抗体阳性率呈波动状变化;牛O型FMD抗体阳性率分别为94.78％、18.26％、71.11％,亚洲I型分别为76.52％、25.22％、27.78％,NSP抗体阳性率在22.61％～41.74％之间波动;仅2016年检出1份牛布鲁氏菌抗体阳性;3年间,羊O型、亚洲I型FMD和PPR免疫抗体阳性率都很低,未达到70％,且呈下降趋势,NSP抗体阳性率在0.95％～7.62％之间波动,未检出羊布鲁氏菌抗体.结果表明,广西玉林市和百色市的猪群O型FMD、CSF、PRRS、PR免疫效果较好,但牛羊群FMD和PPR免疫效果较差,猪群中仍有CSF、PRRS、PR等疫病流行,牛羊群中存在FMD流行的风险,但牛羊布鲁氏菌病得到有效控制.结果提示,应继续加强上述疫病的免疫和监测,针对免疫效果较差、病原流行率偏高的疫病,要重点做好防控和净化.

为了解广西牛、羊群感染梨形虫情况,以及种类分布,从广西南宁、柳州、百色、河池、贺州等地区牛、羊养殖场采集抗凝血638份,抽提血液DNA组,运用套式PCR方法对梨形虫的18S rRNA进行扩增,并抽取一部分阳性样品进行测序,构建系统发育树.结果显示,5个地区梨形虫平均感染为24.76％,其中牛平均感染率为34.30％,羊平均感染为20.19％.南宁、河池、百色等地区牛平均感染率分别为40.00％、43.24％和23.86％;南宁、柳州、河池、百色、贺州等地区羊平均感染率为0、55.34％、11.48％、4.24％和23.40％.序列对比后涉及的种类有双芽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、东方泰勒虫、吕氏泰勒虫,其中东方泰勒虫、吕氏泰勒虫是优势种.获得的序列与系统发育树中所有参考的种类进化树均在同一个分支上.结果表明,广西5个地区牛、羊梨形虫感染率较高,涉及5个种类,在日常监测和防治牛、羊寄生虫病中应引起足够重视.

目的 对广西犬只尤其是宠物犬中携带H9N2亚型流感病毒进行全基因组序列特征分析以及小鼠的致病性研究,为流感病毒疫情的防控提供科学依据.方法 采用RT-PCR的方法扩增、测序全基因组,DNAStar和MEGA6.0软件分析氨基酸同源性和进化树,通过小鼠感染实验探究其致病性.结果 13株H9N2毒株8个基因节段来源于5个不同谱系的毒株,属于新基因型,氨基酸同源性与广西分离株A/equine/Guangxi/3/2011≥99.0％,6个内部基因与2013年自人流感病毒分离株H7N9亲缘关系密切.毒株HA的裂解位点均为RSSR↓ GLF,表明低致病力.氨基酸位点HA226、NA119、NP375和PB2的701位等有变化,其中HA226位为亮氨酸L,具有与人SAα2,6-Gal结合的特性.BALB/c小鼠感染健康犬只中分离的H9N2病毒未在体内复制,而源自感冒犬只的毒株Ca/GX/8和Ca/GX/10能够在体内复制,临床症状明显但不致死.病毒经小鼠体内传代后致病力增强,推测是PB2的611位和PA623位氨基酸改变导致.结论 从广西各地犬只中获得的13株H9N2亚型流感病毒株经分析发现虽源于禽源,但具备和人源受体特异性结合的能力,且内部基因遗传进化关系复杂,对哺乳动物及人类存在较大威胁,亟需加强防控.

目的 对一株分离自广西兴安的猪源A(2009/H1N1)流感病毒进行遗传演化分析及致病性研究,为流感疫情防控提供科学依据.方法 通过SPF鸡胚进行流感病毒分离,对8个基因进行RT-PCR扩增、测序及进化分析;以6周龄雌性BALB/c小鼠为感染模型进行病毒滴定,分析临床数据评估病毒致病性.结果 分离的甲型H1N1病毒株A/swine/Guangxi/18/2013(H1N1) HA、NS和NP基因属于古典型H1N1,NA和M基因源于类禽型H1N1,PA和PB2基因归属禽源,PB1基因来自人源H3N2.HA裂解位点序列为PSIQSR↓ GLF,具有低致病性特征.以50μl 106 TCID50感染小鼠后其体重发生明显变化,最高体重平均变化率为86.98％,死亡率为12.5％;感染第3d测定肺、鼻甲病毒滴度(Log10 TCID50/ml)分别为5.25±0.28和3.89±0.47.结论 A/swine/Guangxi/18/2013(H1N1)为2009/H1N1流感病毒,能感染小鼠而造成体重下降并产生明显的临床症状.该病毒能在小鼠肺与鼻甲中进行复制,具有低致病性特征.

标准化是指在不同领域的经济、科学及管理等事务中的对现实的或潜在的问题通过建立、颁布和实施一系列制度、标准而达到统一性、重复性使用的规则的社会活动.建设标准化是为了改进执行规程和过程、促进技术合作、保证经济效益和社会效益.标准化有利于企业产品的稳定和提高产品、工程和服务的质量,促进企业走质量效益型发展道路,提高企业人员素质,营造企业文化,增强企业的竞争力.生猪屠宰标准化创建会促进企业品牌意识,有利于保护人体健康,保障人身和财产安全,有利于维护消费者的权益.

某竹鼠养殖场出现竹鼠不采食、拉稀等症状,逐渐消瘦死亡.经实验室诊断为感染气单胞杆菌,肌注氧氟沙星(1 mg/kg)治疗3d,病情有所控制.

[目的]明确广西猪源H9N2亚型流感病毒的遗传特征及分子生物学特性(抗原性、耐药性和致病性),为广西猪源H9N2亚型流感病毒的防控提供科学依据.[方法]以分离自广西百色地区的2株猪源H9N2亚型流感病毒(SW/GX/P2/2011株和SW/GX/P3/2011株)为研究对象,运用RT-PCR扩增其全基因组的8个基因片段(HA、NA、NP、M、NS、PB1、PB2和PA基因),经克隆测序后进行核苷酸序列及氨基酸位点分析.[结果]2株广西猪源H9N2亚型流感病毒的核苷酸序列开放阅读框(ORF)分别是PB2:2280 bp、PB1:2274 bp、PA:2151 bp、HA:1683 bp、NP:1497 bp、NA:1410 bp、M:982 bp和NS:838 bp.2株广西猪源H9N2亚型流感病毒全基因组仅M基因核苷酸序列与猪源H9N2亚型流感病毒的相似性较高,而HA、NA、NP、NS、PA、PB2和PB1基因核苷酸序列均与禽源H9N2亚型流感病毒的相似性较高,在基因型分类上属于G57基因型,为我国广泛流行的H9N2亚型基因型.2株广西猪源H9N2亚型流感病毒的HA蛋白发生R180Q、T213A、D216E、M224L、N285S和V287T突变,NA蛋白抗原决定簇S331V、W403S和Q431K也发生突变;NA蛋白在N2亚型的耐药性关键位点119E、151D、292R、276E和294N位点未发生突变,但在NA蛋白抗原区存在S331V、K367E和Q432K突变,且M2氨基酸位点发生S31N突变.2株广西猪源H9N2亚型流感病毒HA蛋白连接HA1和HA2的氨基酸均为RSSR↓GLF;HA蛋白存在1个因P315S突变而新增的潜在糖基化位点(NCS);NA蛋白未缺失NA潜在糖基化位点,也未出现NA蛋白颈部杆状结构63～65 aa缺失现象,在NA潜在糖基化位点中69、86、146、200和234 aa处非常保守,但发生W402S突变.[结论]从广西百色分离获得的2株猪源H9N2亚型流感病毒(SW/GX/P2/2011株和SW/GX/P3/2011株)虽为低致病力毒株,但在流感病毒基因重组过程中发挥重要作用,且其致病性有增强趋势,已对金刚烷胺类药物产生耐药性.因此,应加强广西地区哺乳动物H9N2亚型流感病毒的监控,并警惕其跨种间传播.

从试剂成本、人工成本、奶牛产奶量等方面,对采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法检测奶牛场牛结核病对经济效益的影响进行对比.结果 表明:在测试期(11 d)内,采用牛结核病γ-干扰素ELISA方法较运用皮内变态反应方法,每头奶牛产生的经济效益高374.0元(按广西当前鲜奶收购价计算).对奶牛场进行牛结核病检测时,选择γ-干扰素ELISA方法更利于保障经济效益的最大化.

某竹鼠养殖场零星竹鼠出现不采食、拉稀等症状,并日渐消瘦至死亡.经实验室诊断为感染奇异变形杆菌,对患病竹鼠连续3d注射1 mg/kg头孢噻肟,病情有所控制.

为了解广西地区规模种猪场接种口蹄疫O型和猪瘟疫苗的免疫情况以及更好地指导规模种猪场的生产实践工作,广西壮族自治区动物疫病预防控制中心在2016～2018年期间运用ELISA抗体检测试剂盒检测方法,对4200份广西地区各规模种猪场送检的免疫猪只血清样品进行口蹄疫O型和猪瘟免疫抗体水平检测.结果显示:广西规模场口蹄疫O型免疫抗体合格率分别为84.07％,86.00％,92.37％;猪瘟免疫抗体合格率分别为97.36％,99.08％,95.38％,免疫抗体平均合格率均达到农业农村部对猪群的群体抗体免疫效价70％以上的要求.广西规模猪场口蹄疫O型免疫抗体水平在2016～2018年呈持续上升趋势,这说明通过抗体水平持续跟踪监测、不断优化免疫程序、调整疫苗种类,广西规模猪场的口蹄疫得到了良好的控制.而广西规模猪场猪瘟免疫抗体合格率在2017年后有明显下降,这可能与2017年猪瘟退出强制免疫接种有关,但在各年份免疫抗体平均合格率均保持在95％以上,说明广西规模种猪场对猪群的猪瘟免疫管控到位.

为了了解广西地区竹鼠细小病毒的分子生物学特性与遗传变异情况,通过PCR、序列比对分析等方法,对采集到的某竹鼠场腹泻病料进行病原学检查.结果表明,用设计的引物A1/A2从竹鼠血清、内脏中检测到2株竹鼠细小病毒,将其分别命名为1-XQ、3-ZQ.用软件分析,1-XQ、3-ZQ核苷酸同源性为99.9％;与另外2株广西竹鼠细小病毒分离株的核苷酸同源性分别为96.8％～97.5％和96.9％～97.6％;与蝙蝠细小病毒的同源性较高,为98.9％～99.0％;与老鼠细小病毒的同源性为87.3％～87.6％;与牛、鹅、番鸭以及人类等其他种类细小病毒核苷酸同源性较低,为31.8％～41.6％.说明1-XQ、3-ZQ与广西竹鼠分离毒株、中国分离到的蝙蝠毒株亲缘关系最近,属于同一分支.

[目的]了解广西H9 N2亚型猪源流感病毒的分子流行病学特征并揭示其遗传变化规律,为有效防控猪流感提供参考依据.[方法]运用PCR方法扩增广西2株H9N2亚型猪源流感病毒(A/swine/Guangxi/P2/2011和A/swine/Guangxi/P3/2011)的HA基因,并进行克隆测序及序列比对分析,绘制遗传进化树.[结果]2株H9N2亚型猪流感分离株的HA基因全长1701 bp,开放阅读框(ORF)全长1683 bp,编码560个氨基酸;与参考毒株核苷酸的同源性在83.7％～98.3％,推导氨基酸同源性在86.6％～98.2％.遗传进化树分析结果显示,2株分离株与A/Duck/HongKong/Y280/97病毒同属欧亚谱系的Y280亚系,其HA基因的裂解位点序列均为RSSR↓GLF,具有低致病性流感病毒的分子生物学特征;共有8个糖基化位点,其中6个位于HA1区,2个位于HA2区;HA受体结合位点均具有人流感病毒和猪流感病毒特征.[结论]分离获得的广西2株H9N2亚型猪源流感病毒A/Swine/Guangxi/P2/2011和A/Swine/Guangxi/P3/2011,其HA基因属于欧亚普系的Y280亚系,均具备典型的低致病性和与人流感受体结合特征.