为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并开展了特异性及敏感性试验.结果显示:VP Tlh和AH aerA基因扩增条带大小分别为 500、760 bp;反应体系中Tlh与aerA基因引物最优浓度分别为 7.5、10.0 nmol/L,反应程序中最佳退火温度为 56.8℃;该方法对 VP、AH 的最低可检出细菌浓度均为1.2×103 CFU/mL;对地衣芽孢杆菌、微小杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡阳芽孢杆菌、普通变形杆菌、维氏气单胞菌、布氏柠檬酸杆菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、简氏气单胞菌等其他非目标菌均无交叉反应,仅对VP和AH呈特异性阳性扩增.综上,本研究建立了一种可快速鉴别诊断VP、AH的双重PCR检测方法,其特异性强、灵敏度高,可为VP、AH等细菌性病原引发的水生动物疫病的快速诊断、监测及有效防控提供技术支持.

为了建立一种能快速鉴别猪日本脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的准确、高效的多重常规PCR检测方法,针对JEV、PRRSV、PPV、PRV基因保守区域合成特异性引物,优化后获得最优反应条件,对该方法特异性、敏感性、重复性进行了测定,并应用该方法对临床样品进行初步应用.结果显示,该方法对JEV、PRRSV、PPV、PRV可进行特异性扩增,对混合阳性质粒检测下限达2×106 copies/μL,对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒等相关病毒均无扩增,且重复性良好.用该方法检测51份2021年采集的广西区内组织样品,检出JEV、PRRSV、PPV、PRV阳性率分别为7.84％、50.98％、5.88％、23.53％,且存在多重混合感染的情况.所建立的多重PCR方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,可应用于临床常见猪繁殖障碍性病毒病的快速诊断和监测预警,为猪繁殖障碍性病毒病提供了诊断技术支持.

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据.试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经诱导表达获得重组N蛋白,纯化后经Western blot方法检测其反应原性,免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法).结果显示:重组N蛋白在IPTG终浓度为1.0mmol/L,37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量,该重组蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达;Western blot结果显示,纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性.制备的多克隆抗体的效价可达1:64 000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性.提示:PDCoV N蛋白抗原性好,可作为诊断试剂盒的候选抗原.

Abstract To exploring the effects of probiotics on growth performance, immune function, blood biochemical indicators and cecal flora of broilers, 5 native experimental probiotics (Bacillus coagulans, Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis and Enterococcus faecalis) were isolated and purified. Broilers Fufeng and Sanhuang were divided: 5 single experimental probiotic groups, 1 mixed experimental probiotic group (Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Enterococcus faecalis), commercial probiotics group and negative control group. Each group had 10 replicates of each type of broilers. The experimental probiotics were added to broiler’s diet during experimental period. The growth performance was measured on 21d, 42d and 77d while the immune function, blood biochemical indexes and cecal flora were measured on 77d. The growth performance results showed that experimental probiotics could effectively increase the FCR and BWG (P <0.05); Thymus indexes (P <0.05), spleen indexes and bursa indexes were increased; The levels of IgA, IgG and IL-2 were significantly increased (P <0.05); The contents of total protein (P <0.05) and albumin increased while the total cholesterol, triglycerides (P <0.05), urea nitrogen and blood glucose (P <0.05) were decreased; The population of LAB increased (P <0.05) while E.coli decreased (P <0.05) in caecal. These results indicated that different experimental probiotics had different degree of effects on experimental broilers, but their effects were similar. And the combination of several types of experimental probiotics had a more stable beneficial effects which indicated that the isolated experimental probiotics can be used as broiler feed additives to improve broiler s immunity and health in Guangxi.

2020年10月份—2021年2月份,广西某养鸽场鸽群陆续出现乳鸽及种鸽死亡、鸽胚孵化率降低、部分种鸽有神经症状等情况,为了查找病因、确定诊治方案、降低经济损失,通过病史及用药史询问了解鸽群基本情况,采用临床检查、RT-PCR、血凝抑制试验、显微镜镜检及细菌分离鉴定等方法对病鸽进行综合诊断,并采用药敏试验选择有效药物,根据综合诊断及试验结果,对鸽场患病鸽群进行针对性防治并提出鸽场合理化防控建议.结果表明:该鸽场患病鸽确诊感染鸽Ⅰ型副黏病毒(pi-geon Paramyxo virus Ⅰ,PPMV-Ⅰ),并发感染大肠杆菌、沙门氏菌和毛滴虫,分离菌株的混合菌液对亚胺培南、头孢替坦、多黏菌素B、米诺环素、美罗培南、链霉素、阿米卡星高敏.通过对鸽群进行新城疫疫苗紧急免疫,对发病鸽群进行敏感药物系统治疗并辅以鸽舍消毒和杀菌,鸽群恢复正常,鸽场疫情得到有效控制.说明该鸽场鸽群感染了 PPMV-Ⅰ、大肠杆菌、沙门氏菌和毛滴虫,提示鸽场需提高生物安全意识,做好各类病原的防控措施及免疫程序.

为了优化人工饲养大壁虎(Gekko gecko)的膳食结构及养殖程序,研究了蝗虫(Locus-ta migratoria manilensis)、黄粉虫(Tenebrio molitor)、土鳖虫(Eupolyphaga sinensis)及大麦虫(Zophobas morio)4种昆虫饲料对大壁虎生长速度的影响,并通过16S rDNA高通量测序技术比对了大壁虎胃肠道微生物菌群差异及冬眠期与捕食期的大壁虎胃肠道微生物菌群差异.结果表明:饲喂不同昆虫饲料对大壁虎的增重效果不同.单一昆虫饲料组中,蝗虫组对大壁虎的增重效果最佳.饲喂混合昆虫饲料对大壁虎的增重效果优于单一昆虫饲料组.对各组肠道菌群的分析结果显示,Bacteroides菌属为最主要的肠道优势菌群,与大壁虎生长存在一定的关联.冬眠期与捕食期大壁虎肠道菌群结构高度相似,差异最显著的菌群为放线菌门(Actinobacteria),表明冬眠期大壁虎患放线菌病的概率会明显增高,需注意防范.

为建立快速、准确的猪丁型冠状病毒(PDCoV)抗体ELISA检测方法,本研究以重组蛋白N作为包被抗原,建立了 PDCoV间接ELISA抗体检测方法.结果显示,经条件筛选,确定了该ELISA最佳反应条件:重组蛋白每孔包被0.2 μg;待检血清1:80稀释,孵育60 min;酶标二抗1:4 000稀释,反应30 min;底物显色10min.待检血清样品S/P值＞0.200时判定为阳性,S/P值＜0.173时判定为阴性,S/P值介于0.173和0.200之间则判为可疑.特异性试验结果表明,该检测方法不与HCV、FMDV、PRRSV、PRV、TGEV和PEDV的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.79％～4.75％,批间变异系数在1.92％～6.60％之间,表明重复性良好;敏感性试验结果显示,该方法可检测到血清最大稀释度为1:320.符合率试验结果显示,本方法与中和试验检测结果符合度高,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为86.36％、96.43％和92.00％.利用本研究建立的ELISA方法对456份采自广西地区不同阶段猪群的血清样品进行检测,结果显示,总体样品阳性率为40.40％,不同阶段猪群抗体阳性率有较大区别,后备母猪的阳性率可高达100％,保育猪阳性率最低仅为3.90％.

As a putative model of Fasciola gigantica infection, detailed data in Kunming (KM) mice infected with F. gigantica are lacking. In this study, KM mice were orally infected with 15 metacercaria for 8 weeks. Macroscopic and microscopic changes, serum biochemistry, cytokine responses, and changes in parasite-specific immunoglobulin G (IgG) antibody levels were monitored at 1, 3, 5, 7, and 8 weeks post-infection (wpi), respectively. The serum levels of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) increased after infection, while that of albumin (ALB) decreased, which was positively correlated with the degree of liver damage. Between 5 and 7 wpi, the mice showed symptoms of anemia and weight loss, possibly caused by the decrease of alkaline phosphatase (ALP). Moreover, the changing tendencies of the levels of globulin (GLB) and parasite-specific IgG antibody were similar, suggesting a potential correlation between GLB production and adaptive immune response in the host. Coordinated variations in interferon gamma (IFN-γ) and interleukin 4 (IL-4) indicated a mixed T helper 1 (Th1)/Th2 cellular immune response. Furthermore, the serum IgG antibody increased after infection and peaked at 5 wpi, and it was positively correlated with the average parasite burdens. The worms collected from mice were approximately 1 cm in length at 8 wpi, their digestive and reproductive systems were well developed, and no eggs were found in the uterus. To the best of our knowledge, this is the first report describing detailed histological, biochemical, and immunological indices in KM mice infected with F. gigantica , which provides basic information on KM mice against infection with F. gigantica.

为了解广西猪场伪狂犬病毒(PRV)感染和免疫状况,2017年1月—2020年12月,对部分猪场随机采样送检的血清样品,应用ELISA方法开展PRV血清抗体检测,并对检测结果进行不同年份、不同季节、不同地区、不同生长阶段猪群的统计分析.结果显示:从时间分布上看,2018年PRV gE抗体场阳性率(57.71％)和个体阳性率(24.75％)均最高,此后呈逐年下降趋势,其中个体阳性率下降明显(P<0.05),2020年下降至6.14％;各年间的PRV gB抗体场合格率差异不显著(P>0.05),均在90％以上,而2019年的个体阳性率(88.71％)最低,与其他年份差异显著(P<0.05).冬季PRV gE和gB抗体个体阳性率最低,分别为14.96％和89.35％,与其他季节差异明显(P<0.05);冬季gE抗体场阳性率(42.97％)最低,与春季、秋季差异不显著(P>0.05),但显著低于夏季(P<0.05),而gB抗体场合格率一年四季差异不显著(P>0.05),均在95％以上.从空间分布上看,广西14个地市猪场均存在不同程度的PRV野毒感染,其中玉林市最严重,场阳性率和个体阳性率分别为69.51％和35.86％,而钦州市最轻,分别为16.67％和4.07％;PRV gB抗体个体合格率普遍较高,均在84％以上.从不同生长阶段猪群上看,后备母猪、育肥猪PRV gE和gB抗体个体阳性率均显著低于其他生长阶段猪群(P<0.05),其中gE抗体个体阳性率在13％以下,而gB抗体个体阳性率不足80％.结果表明,近年广西规模猪场PRV野毒感染率较高,而疫苗免疫并不能完全阻止野毒株感染.建议通过PRV净化和提高规模猪场生物安全水平等措施来控制其流行.本研究为制定合理的猪伪狂犬病防控与净化策略提供了依据.

为了解近年来广西玉林市规模猪场主要病毒性疫病的流行动态和免疫保护水平,分析疫情流行趋势和暴发风险,对2016—2019年采集自玉林市规模猪场284个场次的6954份血清样本,以及113个场次的1539份临床健康猪组织样本、249个场次自主送检的536份病死猪组织样本,进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)抗体和抗原检测,并对结果进行时间和区间分析.结果显示:2016—2019年,规模化猪场CSFV、PCV2、PRV-gB场群平均抗体阳性率以及个体平均抗体阳性率均在70％以上;PRRSV抗体阳性率总体偏低,但2019年抗体阳性率超过90％.北流市CSFV场群及个体抗体阳性率最低,与其他地区有差异(P<0.05);北流市、福绵区、玉州区的PRRSV场群抗体阳性率未超过70％,低于其他地区(P<0.05);各地区间PCV2抗体阳性率无统计学差异(P>0.05);福绵区PRV-gB抗体阳性率(<70％)与其他地区相比最低(P<0.05);在健康屠宰猪群及病死猪群组织样品中均检出上述4种病原,其中PRRSV、PCV2病原阳性检出率较高.结果表明,玉林市规模化猪场上述4种疫病的免疫抗体保护水平总体较高,但部分地区抗体水平偏低,且均存在猪群带毒现象,尤其是PRRSV、PCV2,存在疫病暴发风险.结果提示,各县(市、区)要根据本地养殖及疫病监测情况,制定科学合理的免疫计划,加强综合防控与监测,防止上述猪群疫病的发生与流行.本研究调查了广西玉林市猪群主要病毒性疫病的免疫保护水平及其病原流行特点,为该地区此类疫病防控提供了数据支持.

2018年5月,广西某县某猪场突然有70多头35日龄猪发病,病猪症状为消瘦、腹泻、气喘、腹式呼吸,其中20多头猪病死.病死猪剖检病变为淋巴结肿大、出血;肺充血、出血,与胸膜粘连;肝充血;脾有梗死点;肾充血,表面有散在的出血点;膀胱黏膜有散在的出血点.应用抗生素对病猪进行治疗无效.该猪场将其中5头病死猪每头分别采取淋巴结、肺、肝、脾、肾等病料送实验室检测.

为了查清引起母猪流产的原因,从送检流产胎儿的内脏组织中分离培养细菌,对分离菌株进行革兰氏染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rDNA基因序列测定、同源性分析及系统进化树构建.结果表明,分离菌株为革兰氏阳性球菌,其生长特性、菌落特征、生化试验鉴定结果基本符合《常见细菌系统鉴定手册》中溶血葡萄球菌的生化特性;但在血琼脂培养基上并未出现溶血现象.药敏试验结果表明,分离菌株仅对新生霉素、利福平和米诺环素敏感,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物严重耐药.分离菌株16S rDNA基因与12株不同来源的溶血葡萄球菌同源性在99.8％～99.9％之间,与溶血葡萄球菌MER TA39菌株(KT719446.1)遗传进化距离最相近.小鼠致病性试验表明,分离菌株能导致小鼠出现行动迟缓、扎堆和被毛燥乱等临床症状,并能从小鼠体内分离出相同形态特征和菌体特征的菌株.表明从猪流产胎儿体内分离到的菌株是存在多重耐药性的γ-溶血葡萄球菌.

为掌握广西地区导致猪群腹泻的主要病毒性病原的流行态势,为养殖场猪病毒性腹泻的综合防控提供依据,用实时荧光RT-PCR检测方法,对2017年1月—2021年6月广西14个地市489个猪场1206份临床腹泻样品进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)等病原检测,并分析其阳性检出率在不同年份、季节、地区、年龄段猪群之间的差异以及病原混合感染情况.结果显示,2017—2021年,PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV样品阳性检出率分别为49.67％、7.63％、4.56％和0.33％,场阳性检出率分别为53.37％、8.18％、8.18％和0.61％;病毒性腹泻病原有一定的季节性流行特征,多表现为冬、春季流行加重;PEDV、PDCoV普遍流行,PoRV局部流行,TGEV散发流行;4种病原对不同年龄段腹泻猪群的感染率存在差异,其中对哺乳仔猪危害最为严重;猪群以单一感染为主,主要为PEDV单一感染,阳性检出率为47.93％,混合感染均为二重感染且感染率较低.结果表明,导致广西地区猪群腹泻的主要病毒性病原主要为PEDV、PDCoV和PoRV,其中PEDV为最主要病原,其他病原也呈流行加重趋势,需进一步加强病原监测和疫病综合防控.

试验研究精准饲养对生长育肥猪生长性能和血液指标的影响.试验共120头生长育肥猪,分为4组,每组3个重复,每个重复10头猪.1、2组按三阶段模式饲喂,3、4组采用精准饲养模式,试验期136 d.结果 显示,精准饲养组体重、背膘、平均日增重均极显著提高(P＜0.01),料重比极显著降低(P＜0.01),血清尿素氮含量显著降低(P＜0.05).4组育肥猪的碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于1组(P＜0.05).各组间育肥猪总蛋白、磷、甘油三酯、血糖、免疫球蛋白G (IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量差异不显著(P＞0.05).每千克增重成本分别降低0.256、0.487、0.681元.研究表明,精准饲养可以改善生长育肥猪的生长性能,提高饲料转化率,降低生产成本.

试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果.试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 d后,其抗体阳性率就达70％,二免后抗体效价可达8log2～9log2,抗体合格率高达100％,抗体保护力持久;O型-A型二价灭活苗需2次以上免疫,才能产生较好的抗体保护力度.政府招标购买的疫苗均能产生较好的免疫效果,O型灭活苗免疫效果优于O型-A型二价灭活苗;建议口蹄疫免疫实行二次免疫,间隔28～30 d,必要时进行三免.

固相萃取技术(Solid-Phase Extraction,SPE),是20世纪70年代发展起来的一种样品预处理技术,目前在食品检测、粮油检测、农药及兽药残留检测领域中得以广泛应用.笔者在应用这项技术进行动物产品质量安全检测工作3年多的时间里,发现并总结出一些关于SPE操作的技巧和常见的问题及其解决办法与思路.

磺胺类抗菌药物(SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称,是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物.磺胺类药物是现代医学中常用的一类抗菌药物,具有抗菌谱广、性质稳定、吸收较迅速、疗效强、价格便宜等特点[1]. 磺胺类药物可以防治蜂病,降低蜜蜂死亡率,能够提高蜂蜜产能[2].但磺胺类药物在动物体内代谢缓慢,长期摄入含磺胺类药物的动物性食品后,药物会在人体内蓄积[2],就会对人体产生损害,导致机体对抗生素产生耐药性[4].

柳州市重防办每年都会根据政府的要求对辖区各县和城区进行重大动物疫病防控情况进行考核验收. 2018年1 月同以往一样对全市2017 年重防工作进行了常规考核验收工作.该工作采取听取被考核单位汇报、查阅资料、实地检查等方式进行.现将考核情况及存在问题简述如下.

为了对比观察链球菌弱毒苗使用前后罗非鱼肠道免疫相关细胞超微结构的变化,探讨无乳链球菌弱毒苗对罗非鱼黏膜免疫的影响,试验采用体重为(100±10)g,体长为(15 ±2)cm的健康罗非鱼共30尾,随机分为对照组和试验组,每组15尾,试验组投喂浓度为1.0×109 cfu/mL的口服型无乳链球菌GX035弱毒苗,对照组投喂等量未添加疫苗的饲料,免疫后15 d,对前肠、中肠、后肠的超微结构进行常规透射电镜观察.结果表明:与对照组相比,试验组各肠段杯状细胞内黏液分泌泡明显增多,呈分泌旺盛状态;巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞等增多,超微结构有变化,呈现功能活跃状态.说明口服无乳链球菌弱毒疫苗可以提高罗非鱼肠道黏膜免疫.

广西壮族自治区地处亚热带,以喀斯特地形为主,天然草地面积占全区土地总面积的36.8％[1].近年来,全区大力发展饲养本地小型草食兽——黑山羊,现已初见成效.众所周知,蠕虫病危害黑山羊的生长发育,降低经济效益,因此了解黑山羊蠕虫病的流行种类是合理防治该病的基础.广西大学动物科学技术学院预防兽医教研室将兽医寄生虫学的实验课程进行了调整,以本地黑山羊为蠕虫学完全解剖法的试验对象,以期能在因地制宜授课的同时获得详尽的虫种感染情况.2010-2013年期间,连续4年均在黑山羊的小肠中发现大量小型吸虫,检出率高,感染强度大,经形态学与分子生物学方法鉴定,定种为鹿槽盘吸虫,现将结果报道如下.