旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据.试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经诱导表达获得重组N蛋白,纯化后经Western blot方法检测其反应原性,免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法).结果显示:重组N蛋白在IPTG终浓度为1.0mmol/L,37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量,该重组蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达;Western blot结果显示,纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性.制备的多克隆抗体的效价可达1:64 000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性.提示:PDCoV N蛋白抗原性好,可作为诊断试剂盒的候选抗原.

青头鸭是两广地区对本地公麻鸭饲养日龄达到120天以上后,以头及颈上部羽毛呈孔雀绿色,背和腰部羽毛呈棕褐色,胸部羽毛呈棕黑色,腹部羽毛呈灰白色,翅膀内侧为芦花羽,尾羽毛呈黑绿色并向上卷曲为特征的一种土鸭的俗称.成熟后的青头鸭体重一般有2.5千克～3.0千克.

Abstract To exploring the effects of probiotics on growth performance, immune function, blood biochemical indicators and cecal flora of broilers, 5 native experimental probiotics (Bacillus coagulans, Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis and Enterococcus faecalis) were isolated and purified. Broilers Fufeng and Sanhuang were divided: 5 single experimental probiotic groups, 1 mixed experimental probiotic group (Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis, Enterococcus faecalis), commercial probiotics group and negative control group. Each group had 10 replicates of each type of broilers. The experimental probiotics were added to broiler’s diet during experimental period. The growth performance was measured on 21d, 42d and 77d while the immune function, blood biochemical indexes and cecal flora were measured on 77d. The growth performance results showed that experimental probiotics could effectively increase the FCR and BWG (P <0.05); Thymus indexes (P <0.05), spleen indexes and bursa indexes were increased; The levels of IgA, IgG and IL-2 were significantly increased (P <0.05); The contents of total protein (P <0.05) and albumin increased while the total cholesterol, triglycerides (P <0.05), urea nitrogen and blood glucose (P <0.05) were decreased; The population of LAB increased (P <0.05) while E.coli decreased (P <0.05) in caecal. These results indicated that different experimental probiotics had different degree of effects on experimental broilers, but their effects were similar. And the combination of several types of experimental probiotics had a more stable beneficial effects which indicated that the isolated experimental probiotics can be used as broiler feed additives to improve broiler s immunity and health in Guangxi.

2020年10月份—2021年2月份,广西某养鸽场鸽群陆续出现乳鸽及种鸽死亡、鸽胚孵化率降低、部分种鸽有神经症状等情况,为了查找病因、确定诊治方案、降低经济损失,通过病史及用药史询问了解鸽群基本情况,采用临床检查、RT-PCR、血凝抑制试验、显微镜镜检及细菌分离鉴定等方法对病鸽进行综合诊断,并采用药敏试验选择有效药物,根据综合诊断及试验结果,对鸽场患病鸽群进行针对性防治并提出鸽场合理化防控建议.结果表明:该鸽场患病鸽确诊感染鸽Ⅰ型副黏病毒(pi-geon Paramyxo virus Ⅰ,PPMV-Ⅰ),并发感染大肠杆菌、沙门氏菌和毛滴虫,分离菌株的混合菌液对亚胺培南、头孢替坦、多黏菌素B、米诺环素、美罗培南、链霉素、阿米卡星高敏.通过对鸽群进行新城疫疫苗紧急免疫,对发病鸽群进行敏感药物系统治疗并辅以鸽舍消毒和杀菌,鸽群恢复正常,鸽场疫情得到有效控制.说明该鸽场鸽群感染了 PPMV-Ⅰ、大肠杆菌、沙门氏菌和毛滴虫,提示鸽场需提高生物安全意识,做好各类病原的防控措施及免疫程序.

为建立快速、准确的猪丁型冠状病毒(PDCoV)抗体ELISA检测方法,本研究以重组蛋白N作为包被抗原,建立了 PDCoV间接ELISA抗体检测方法.结果显示,经条件筛选,确定了该ELISA最佳反应条件:重组蛋白每孔包被0.2 μg;待检血清1:80稀释,孵育60 min;酶标二抗1:4 000稀释,反应30 min;底物显色10min.待检血清样品S/P值＞0.200时判定为阳性,S/P值＜0.173时判定为阴性,S/P值介于0.173和0.200之间则判为可疑.特异性试验结果表明,该检测方法不与HCV、FMDV、PRRSV、PRV、TGEV和PEDV的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.79％～4.75％,批间变异系数在1.92％～6.60％之间,表明重复性良好;敏感性试验结果显示,该方法可检测到血清最大稀释度为1:320.符合率试验结果显示,本方法与中和试验检测结果符合度高,阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为86.36％、96.43％和92.00％.利用本研究建立的ELISA方法对456份采自广西地区不同阶段猪群的血清样品进行检测,结果显示,总体样品阳性率为40.40％,不同阶段猪群抗体阳性率有较大区别,后备母猪的阳性率可高达100％,保育猪阳性率最低仅为3.90％.

为了解广西猪场伪狂犬病毒(PRV)感染和免疫状况,2017年1月—2020年12月,对部分猪场随机采样送检的血清样品,应用ELISA方法开展PRV血清抗体检测,并对检测结果进行不同年份、不同季节、不同地区、不同生长阶段猪群的统计分析.结果显示:从时间分布上看,2018年PRV gE抗体场阳性率(57.71％)和个体阳性率(24.75％)均最高,此后呈逐年下降趋势,其中个体阳性率下降明显(P<0.05),2020年下降至6.14％;各年间的PRV gB抗体场合格率差异不显著(P>0.05),均在90％以上,而2019年的个体阳性率(88.71％)最低,与其他年份差异显著(P<0.05).冬季PRV gE和gB抗体个体阳性率最低,分别为14.96％和89.35％,与其他季节差异明显(P<0.05);冬季gE抗体场阳性率(42.97％)最低,与春季、秋季差异不显著(P>0.05),但显著低于夏季(P<0.05),而gB抗体场合格率一年四季差异不显著(P>0.05),均在95％以上.从空间分布上看,广西14个地市猪场均存在不同程度的PRV野毒感染,其中玉林市最严重,场阳性率和个体阳性率分别为69.51％和35.86％,而钦州市最轻,分别为16.67％和4.07％;PRV gB抗体个体合格率普遍较高,均在84％以上.从不同生长阶段猪群上看,后备母猪、育肥猪PRV gE和gB抗体个体阳性率均显著低于其他生长阶段猪群(P<0.05),其中gE抗体个体阳性率在13％以下,而gB抗体个体阳性率不足80％.结果表明,近年广西规模猪场PRV野毒感染率较高,而疫苗免疫并不能完全阻止野毒株感染.建议通过PRV净化和提高规模猪场生物安全水平等措施来控制其流行.本研究为制定合理的猪伪狂犬病防控与净化策略提供了依据.

试验旨在确定贞苓增免散在临床推荐剂量下对罗非鱼的安全性,研究罗非鱼使用剂量安全范围并综合评价药物的疗效,为临床合理用药提供重要依据与指导.试验分别设置空白组(基础饲粮)、1倍剂量组(含贞苓增免散0.4％)、3倍剂量组(含贞苓增免散1.2％)、5倍剂量组(含贞苓增免散2.0％)和10倍剂量组(含贞苓增免散4.0％)共5个组.连续饲喂30d,分别在第15和30天检测罗非鱼的临床体征、血液生理生化指标、器官指数,并进行组织病理学观察.结果 表明,各剂量组罗非鱼活动、摄食、体色、排泄等均良好,与空白组罗非鱼没有明显区别.0～15 d,增重率和特定生长率在1倍剂量组均最高,且均显著或极显著高于空白组(P＜0.05;P＜0.01),但其随着贞苓增免散剂量增加而减少;15～30 d贞苓增免散各剂量组增重率均极显著高于空白组(P＜0.01).各剂量组罗非鱼的血液生理生化指标中部分指标与空白组相比有显著差异,但均在正常范围内.0～15 d时各剂量组和15～30 d时1倍剂量组的罗非鱼脾脏指数均显著高于空白组(P＜0.05).显微镜下观察各组罗非鱼肝脏和脾脏组织切片,均未发现药物引起的细胞毒性变化.以上结果说明贞苓增免散在10倍推荐剂量及以下连续饲喂罗非鱼30 d具有较好的安全性,将其作为饲料添加剂能提高罗非鱼生长性能、增强免疫力,对推动罗非鱼养殖快速高效发展具有重要意义.

2018年5月,广西某县某猪场突然有70多头35日龄猪发病,病猪症状为消瘦、腹泻、气喘、腹式呼吸,其中20多头猪病死.病死猪剖检病变为淋巴结肿大、出血;肺充血、出血,与胸膜粘连;肝充血;脾有梗死点;肾充血,表面有散在的出血点;膀胱黏膜有散在的出血点.应用抗生素对病猪进行治疗无效.该猪场将其中5头病死猪每头分别采取淋巴结、肺、肝、脾、肾等病料送实验室检测.

为进一步了解近年广西猪场蚊媒携带乙型脑炎病毒(JEV)情况,采用套式RT-PCR(RT-nPCR)检测方法,于2016年—2019年间对猪乙型脑炎(JE)确诊阳性病例的部分猪场进行蚊子携带JEV情况初步检测调查.对抽选16个有JE阳性病例的猪场捕捉的蚊子进行JEV检测,结果均为阳性.表明广西猪JE确诊阳性病例猪场的蚊子携带JEV的几率很高.

为掌握广西地区导致猪群腹泻的主要病毒性病原的流行态势,为养殖场猪病毒性腹泻的综合防控提供依据,用实时荧光RT-PCR检测方法,对2017年1月—2021年6月广西14个地市489个猪场1206份临床腹泻样品进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)等病原检测,并分析其阳性检出率在不同年份、季节、地区、年龄段猪群之间的差异以及病原混合感染情况.结果显示,2017—2021年,PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV样品阳性检出率分别为49.67％、7.63％、4.56％和0.33％,场阳性检出率分别为53.37％、8.18％、8.18％和0.61％;病毒性腹泻病原有一定的季节性流行特征,多表现为冬、春季流行加重;PEDV、PDCoV普遍流行,PoRV局部流行,TGEV散发流行;4种病原对不同年龄段腹泻猪群的感染率存在差异,其中对哺乳仔猪危害最为严重;猪群以单一感染为主,主要为PEDV单一感染,阳性检出率为47.93％,混合感染均为二重感染且感染率较低.结果表明,导致广西地区猪群腹泻的主要病毒性病原主要为PEDV、PDCoV和PoRV,其中PEDV为最主要病原,其他病原也呈流行加重趋势,需进一步加强病原监测和疫病综合防控.

为了解广西猪群猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,以PCV3阳性DNA为模板,利用PCR的方法分2段扩增PCV3全基因序列并进行拼接,获得10株PCV3全基因组序列,全长均为2 000 bp.10株广西PCV3全基因组序列之间的核苷酸同源性为98.6％～ 99.8％.与国内其他毒株的同源性为97.9％ ～ 99.8％;与国外其他毒株的同源性为98.8％～99.7％.10株广西PCV3 Cap基因的大小均为645 bp,编码214 aa.PCV3 Cap基因比较保守,10株广西PCV3 Cap基因与参考株相比,仅存在散在的突变位点.基于PCV3全基因和Cap基因构建的遗传进化树显示,两者结果基本相同,10株广西PCV3处于3a和3b两个亚群.本试验表明,广西地区猪群中流行的PCV3至少存在2个亚群,不同亚群PCV3毒株的致病性差异还有待进一步的研究.

猪副伤寒即猪沙门氏菌病,其病原沙门氏菌在自然界中广泛分布,目前发现其血清型有千余种,对猪危害较大的是猪霍乱沙门氏菌、 鼠伤寒沙门氏菌和猪伤寒沙门氏菌. 猪副伤寒是一种引起断奶仔猪顽固性下痢、 伴有卡他性或干酪性肺炎及慢性纤维素性坏死性肠炎等为特征的传染病[1-2]. 该病如果治疗不及时或混合感染其他疾病,死亡率较高,给养猪户造成较大经济损失.

为了解广西壮族自治区规模猪场主要病毒性腹泻疫病的流行情况,本研究采用RT-PCR方法,对2013～2018年广西壮族自治区14个地级市送检的1547份腹泻类样品进行猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)和猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)4种猪的主要病毒性腹泻疫病的病原阳性率、季节影响因素和混合感染情况进行调查与分析.检测结果显示,2013～2018年,病毒平均样品阳性率从高到低依次为PEDV(54.94％)、PDCoV(4.52％)、PoRV(4.40％)和TGEV(0.00％),其中PEDV的样品阳性率、地区阳性率和秋冬季节阳性率均为最高.4种病毒均存在不同程度的单一感染或混合感染,其中单独感染以PEDV为主,其次是PDCoV和PoRV,TGEV单一感染率最低;混合感染中以PEDV+PDCoV和PEDV+PoRV双重感染为主,三重感染较少发生.结果表明,2013～2018年PEDV阳性检出率最高,已经成为引发广西规模猪场流行性腹泻的最主要病原,并且常与PoRV和PDCoV发生混合感染,是当前广西猪病毒性腹泻类疫病的防控重点.

为了解广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行和变异情况,试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对2016-2018年广西14个地区规模化猪场的1 564份主要脏器进行了PRRSV检测,选取部分阳性样品进行ORF5基因的扩增并进行序列分析.结果 表明:共检测出PRRSV阳性样品467份,阳性率为29.9％.在广西14个地区规模化猪场送检的样品中均能检测到PRRSV.从年份上看,2016年的PRRSV阳性率最高,为43.9％;2017年为26.9％;2018年最低,为23.7％.获得的25条PRRSV ORF5基因序列中有1株与NADC30株同源性较高,1株与GM2株同源性较高,其余23株均与高致病性PRRSV同源性较高.在25株PRRSV中有21株与TJM、JXA1、HuN等高致病毒株亲缘关系较近,并位于同1个分支;2株处于经典株和变异株之间,分别形成2个分支;1株与NADC30株亲缘关系较近,位于同1个分支;1株与GM2株亲缘关系较近,位于同1个分支.PRRSV ORF5基因编码氨基酸序列分析结果表明,25个毒株均为毒力较强的野毒株.说明广西地区仍以高致病性PRRSV为主要流行毒株,但2018年新发现类NADC30毒株和类GM2毒株的流行.

2018年11月广西一存栏1000头母猪的规模化猪场出现多头怀孕后期母猪流产现象,并将2窝流产胎儿送实验室进行检测.为了解引起母猪流产的病因,实验室采用细菌分离培养方法进行细菌分离鉴定;采用PCR/RT-PCR检测的方法检测猪瘟病毒(CSFV)、 猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪乙脑病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和PCV3.结果在流产胎儿内脏组织中未分离到细菌;2窝流产胎儿内脏组织中均检测到PCV3,而其他病原均为阴性,表明PCV3感染可能是引起本次母猪流产的主要原因.

试验旨在了解广西猪主要病毒性繁殖障碍疫病的发生态势,为预防和控制此类疫病提供科学依据.采用RT-PCR/PCR方法对2014年3月至2018年2月采自广西的349份流产胎儿样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)及猪乙型脑炎病毒(JEV)6种主要病毒性繁殖障碍疫病病原的检测并分析其阳性检出率在不同年份、季节之间的差异及病原混合感染情况.结果显示,2014-2017年,6种病原的猪场阳性率从高到低依次为JEV(36.00％)、PRRSV(16.00％)、PCV2(9.00％)、PRV(7.00％)、PPV(6.00％)和CFSV(5.00％),样品阳性检出率从高到低依次为JEV(27.06％)、PRRSV(6.18％)、PRV(5.88％)、PCV2(3.82％)、CSFV(2.35％)和PPV(2.35％).季节因素对6种病毒性繁殖障碍疫病的发生有一定影响:JEV在夏季、秋季检出率较高,春季、冬季检出率较低;PRRSV一年四季检出率均较高,且无明显差异;PCV2在春季检出率较高,其次是夏季和冬季,秋季检出率较低;PRV在春季、冬季检出率较高,夏季、秋季检出率均为0;PPV在夏季检出率较高,其次是春季和秋季,冬季检出率为0;CSFV在冬季检出率最高,其次是夏季,春季和秋季检出率均为0.流产胎儿以单一感染为主,6种病毒均存在不同程度单一感染情况,单一感染率JEV最高(23.82％)、PCV2最低(0.59％);混合感染以双重感染为主,其中以2016年双重感染情况较多,且感染组合多样;三重感染情况较少、仅在2016年送检样品中发现1例,未发现四重及四重以上感染情况.调查结果表明,2014-2017年,JEV均有较高的阳性检出率,已成为广西部分猪场母猪流产最主要病毒性病原.PRRSV和PRV仍是目前引起广西猪场母猪流产的主要病毒性病原.

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种急性高度接触性肠道传染病.以呕吐、水样腹泻和脱水为特征,发病仔猪死亡率高.当前由PEDV主导的猪群腹泻是猪场重点防控的重要疫病之一,严重影响猪场经济效益及养猪业健康发展,其防控形势依然严峻.1971年英国首次报道PED,1977年比利时分离到病毒(经典代表毒株CV777).1982年中国台湾报道亚洲首例PED,其后该病在日本、韩国、中国、泰国等亚洲国家相继报道流行.2010年起,PED在中国、美国、欧洲等地再次暴发大流行,给养猪业造成严重经济损失.

In this study, the MEM containing 8%, 4%, 2% and 1% sera, respectively, were used to culture IBRS-2 cells and to proliferate Porcine parvovirus(PPV) N strain. The results showed that IBRS-2 cells were in good growth state in concentrations of 8%, 4% and 2% sera culture medium, respectively, but when the concentration of the serum was decreased to 1%, the cells were in poor attachment and growth. Meanwhile, the densities of IBRS-2 cells at 0, 24, 48 ,72 and 96 h time point in concentrations of 8%, 4% and 2% serum culture medium was not significantly different with the control. Thereby, the culture media containing 2% serum were selected for cell cultivation and virus yield, and the virus titers were determined by TCID50and hemagglutination test. The results showed that the PPV N strain average titer of PPV N strain in 2% serum was not significantly different from that in routine culture (6%～10% serum) , indicating that the system could be used for the proliferation of PPV N strain. Results show that this study successfully domesticated out the IBRS-2 cells that could grow well under low serum culture conditions (containing 2% serum), and the PPV N strains could proliferate well in the lower serum cultured IBRS - 2 cells.

Porcine circovirus type 3 (PCV3) was first described in 2016 in U.S. swine herds as a pathogenic agent for pigs. To date, PCV3 has been reported to be widely circulating in the United States, China, South Korea, Brazil, Italy, and Poland. Here, we report the genome sequence of a PCV3 strain (CH/GX/1776D/2017) isolated from Guangxi Province in southern China. The sequence data presented in this study will help us better understand the molecular characteristics and genetic diversity of PCV3 in China.

对41头健康桂科猪于7、8、9、10、11、12、13周龄采血,用ELISA方法测定血清中IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ含量,同时用ELISA试剂盒监测猪瘟抗体.结果显示,7、10、12、13周,IL-4与IL-2由极显著负相关(P<0.01)到显著正相关(P<0.05)再到极显著负相关(P<0.01).两批次猪加强免疫后猪瘟抗体水平皆比首免后第一次采样血清中的抗体水平有一定程度的提高,基本符合抗体消长规律.注射猪瘟疫苗后对Th1/Th2有直接影响,IL2+IFN-γ/IL-4+IL-10比值在约第10周龄最小,注射疫苗两周后达最大并在约第13周龄恢复到原来比值.综上结果表明,桂科猪这一新配套系猪种有良好的免疫系统和免疫功能,本试验数据可以为开发有特色的商品猪生产模式疫病防控提供科学依据.