根据马立克氏病病毒PP38基因的一段特异性保守序列设计引物,将MDV的PP38基因构建到19T载体上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,建立了针对马立克氏病病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行了评价.结果显示,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品在6.53×101～6.53×108 copies/μL范围内呈良好的线性关系,其线性相关系数R2=0.998 8,标准曲线方程为Y=-3.271X+39.297,熔解曲线呈现单峰,无非特异性扩增.且检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)和鸡传染性贫血病毒(CIAV)时结果均呈阴性,具有良好的特异性.对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20％.本研究建立的检测MDV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法可用于马立克氏病病毒的快速诊断,对马立克氏病的监测具有重要意义.

本研究旨在建立牛支原体Taqman探针实时荧光定量PCR方法,便于临床上快速检测、诊断牛支原体病.本研究根据牛支原体TU基因(登录号:CP002188.1)设计合成特异性引物及Taqman探针,并通过试验检验所建立的检测方法的特异性和灵敏性.本研究建立的实时荧光定量PCR方法标准曲线的截距为46.20,斜率为-3.24,相关系数为-0.996,提示标准品的浓度与Ct值呈线性关系.方法 性能评价显示,所建方法的组内及组间重复性变异系数均低于0.02,说明所建方法的重复性好;灵敏性试验中,目的 基因最小检出浓度为19.1 copies/μL,敏感性是常规PCR(1.91×104 copies/μL)的1000倍.试验结果表明,本研究建立的牛支原体荧光定量PCR方法,具有精确、敏感、特异等优点,可为临床上快速检测牛支原体病提供技术支撑.

旨在探讨cofilin2基因的表达在鸭病毒性肠炎病毒(DEV)增殖过程中的影响.本研究通过已获得的鸭源cofilin2全基因序列(GenBank登录号:MF434775),设计出4对shRNA序列,插入载体中,并转染到鸭胚成纤维细胞中,经FQ-PCR方法和荧光显微镜观察筛选出具有较高干扰效率的shRNA序列,用干扰效率较高的shRNA序列转染到鸭胚成纤维细胞中抑制cofilin2基因的表达,再检测cofilin2在DEV复制过程中表达情况.结果显示:4对shRNA干扰质粒经转染至鸭胚成纤维细胞后,经荧光显微镜观察,构建的4对shRNA干扰质粒均成功转染并得到表达;4对干扰质粒沉默率分别为4.96％±0.78％、41.12％±2.94％、17.55％±2.07％、54.02％±1.73％,以cofilin2-86的沉默效率最高;cofilin2-86转染到鸭胚成纤维细胞,经DEV感染不同时间,其DEV核酸表达量明显下降.综上所述,靶向cofilin2基因RNA干扰在DEV复制和增殖过程发挥重要作用.

为了解鸡源缓慢葡萄球菌的耐药性及其致病性,本试验对发病麻黄鸡进行细菌分离培养、革兰染色镜检、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验、耐药基因检测和动物回归试验.细菌分离结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面凸起、边缘整齐的白色菌落;革兰染色镜检呈葡萄串状球菌.生化试验结果显示,分离菌尿素、蔗糖、精氨酸水解酶、木糖等反应阳性,木糖醇、麦芽糖等反应阴性.系统进化树分析显示,分离菌与缓慢葡萄球菌处于同一分支;药敏试验结果显示,分离菌对羧苄西林、头孢呋辛、红霉素等21种抗菌药耐药,对头孢氨苄、痢特灵、丁胺卡那等5种抗菌药中度敏感,对头孢哌酮和头孢唑啉敏感.耐药基因检测结果显示,分离菌能检测出的耐药基因包括大环内酯类erm B、ermC,β-内酰胺类blaVIM、blaTEM,四环素类tet B,磺胺类sul1.动物回归试验结果显示,分离菌对小鼠和雏鸡致病能力不强.本试验成功分离到1株鸡源缓慢葡萄球菌,为该类菌的研究补充资料.

为了解安顺市商品代规模蛋鸡场J亚群禽白血病(AL-J)感染情况和血清学流行率,本试验采用横断面研究,从贵州省安顺市7个区(县)的42个规模蛋鸡场共采集了 2 520份蛋鸡血清样品,采用ELISA方法检测J亚群禽白血病抗体.结果显示,42个规模蛋鸡场血清学个体表观流行率(AP)为10.7％(95％CI:7.6％-13.8％),真实流行率(TP)为10.5％(95％CI:7.4％-13.7％),群体表观流行率(H4P)为57.1％,真实流行率(HTP)为57.1％.经调查,阳性场主要是由于引进的雏鸡随母体携带了禽白血病病毒,且在养殖后期场内存在水平传播的可能性.鉴于安顺市有一半左右的规模蛋鸡场存在J亚群禽白血病感染,因此加强商品代蛋鸡场引种和生物安全管理对预防该病具有重要意义.

为了解禽腺病毒血清4型(FAdV-4)地方流行毒株的分子进化情况,基于实验室分离的2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株,分别对2株FAdV-4毒株进行PCR分段扩增,扩增产物克隆至载体,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后筛选出重组质粒进行测序,将测序结果依次拼接得到病毒的全基因组,获得FAdV-4贵州株的全基因序列,并对其进行序列和遗传进化分析.结果显示,通过PCR分段扩增成功获得了2株FAdV-4贵州株(GZ-BJ株和GZ-QL株)的全基因序列,长度分别为43 352、43 723 bp,FAdV-4 GZ-BJ株全基因序列长度比FAdV-4 GZ-QL株短371 bp,少6个ORF(22K、putative 9.1 ku、u-exon、ORF17、ORF28、ORF42),二者的氨基酸同源性为57.1％.2株FAdV-4贵州株同国内外不同地区FAdV-4毒株核苷酸同源性在88.7％?100％,与FAdV-4经典毒株ON1比对,2株FAdV-4贵州株和国内FAdV-4分离株均缺失ORF19、ORF27、ORF30.系统进化树分析显示,2株FAdV-4贵州株GZ-BJ株和GZ-QL株仍属于Ⅰ群C种FAdV.研究结果表明,2株贵州株FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4 GZ-QL株较国内外FAdV-4毒株均存在进化与突变,且FAdV-4 GZ-BJ株变化较大,但尚未改变其血清型,这为探索FAdV-4致病机理的分子机制研究提供依据.

将100只健康30日龄雏鸭随机分为试验组(Ⅰ组,50只)和对照组(Ⅱ组,50只),进行鸭肠炎病毒(duck enteri-tis viral,DEV)检测.试验组每只雏鸭腿部肌肉注射0.2 mL(1 000 LD50),Ⅱ组注射无菌生理盐水0.2 mL,分别于感染后12,24,36,48,72,84,96 h无菌采集各组织样本(肌肉、胸腺、十二指肠、法氏囊、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑),利用荧光定量PCR和ELISA检测方法确定Ⅱ组未发生感染、Ⅰ组成功感染后,所有样品-80℃保存备用.同时,对各时段各组织中JAK2、STAT3和SOCS1基因的转录水平与蛋白质表达量进行检测,并对十二指肠进行转录水平和蛋白表达水平验证.结果显示,与Ⅱ组相比,JAK2、STAT3和SOCS1基因在DEV感染鸭机体组织中转录水平差异显著(P＜0.05).JAK2和STAT3蛋白表达水平低于Ⅱ组,差异显著(P＜0.05),而SOCS1蛋白表达量水平高于Ⅱ组,差异显著(P＜0.05);取十二指肠组织进行转录组测序和Western blot验证,结果与荧光定量PCR和ELISA检测结果一致.结果表明,感染DEV对雏鸭各组织JAK-STAT信号通路相关基因JAK2、STAT3和SOCS1基因的转录水平均有不同程度的影响.感染DEV对鸭机体组织JAK-STAT信号通路SOCS1基因的影响是在蛋白水平的上调,而非转录水平,同时SOCS1基因对JAK2、STAT3基因的抑制作用也是在蛋白水平.

为评估贵州省兽医系统实验室检测能力,2020年组织开展了全省市、县级兽医实验室检测能力比对工作,共有9个市(州)级和37个县(市、区)级的46个动物疫病预防控制机构兽医实验室参加,分别开展口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测、禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、禽流感病毒H7亚型抗体检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、小反刍兽疫抗体检测,每个实验室参与完成3～4个检测比对项目.结果:有8个市(州)级、26个县(市、区)级兽医实验室所有比对项目的检测结果完全正确,市、县级实验室正确率分别为88.89％、70.27％;口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测、禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、禽流感病毒H7亚型抗体检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、小反刍兽疫抗体检测项目结果正确率分别为96.30％、100％、97.62％、89.64％、100％、100％.结果表明:贵州省兽医系统实验室检测能力总体良好;部分县级实验室检测能力较弱,需要在基础设施设备、人才队伍等多方面加强建设.

[目的]分析不同品种羊Toll样受体(TLRs)基因转录水平的差异性,为揭示TLRs基因转录水平与羊疫病间的关联性提供参考依据.[方法]选取贵州省主要饲养的贵州黑山羊、贵州白山羊、黔北麻羊、波尔山羊和湖羊为研究对象,根据GenBank已公布的TLRs基因序列设计荧光定量PCR特异性扩增引物及TaqMan探针引物,利用TaqMan探针荧光定量PCR检测不同品种羊血液和肺脏中TLR1～TLR10基因转录水平差异.[结果]TLR1～TLR10基因在不同品种羊血液和肺脏中均有转录表达.不同品种羊血液和肺脏中的TLRs基因转录水平均存在差异性,在波尔山羊血液中TLR2、TLR4和TLR5基因转录水平均极显著低于其他4种羊(P<0.01,下同),TLR7和TLR8基因转录水平则极显著低于除黑山羊外的其他3种羊;在白山羊血液中TLR4、TLR7、TLR8和TLR9基因转录水平极显著高于其他4种羊;在湖羊肺脏中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平极显著低于其他4种羊,而在黔北麻羊肺脏中TLR5和TLR8基因转录水平极显著高于其他4种羊.此外,在5种羊血液中TLR2、TLR4、TLR7和TLR8基因转录水平均极显著高于其他TLRs基因转录水平;羊肺脏中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平相对较高,在贵州白山羊、贵州黑山羊和波尔山羊均表现为极显著高于其他TLRs基因转录水平.[结论]不同品种羊血液和肺脏中TLRs基因转录水平具有差异性,以TLR2、TLR3、TLR4、TLR5和TLR8基因转录水平相对较高,提示TLRs在不同品种羊机体中发挥着清除病原体及维持机体稳态的作用,而TLRs基因转录水平差异可能是造成不同品种羊对疫病易感差异的原因之一.

为探究NF-κB信号通路对鸭肠炎病毒(DEV)增殖的影响,本实验分别以不同终浓度的NF-κB信号通路激活剂LPS(2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL)和抑制剂SN50(25.0μg/mL、50.0μg/mL、75.0μg/mL)处理鸭胚成纤维(DEF)细胞后,采用CCK8法分析LPS或SN50对DEF细胞活性影响;利用不同浓度的LPS或SN50预处理DEF细胞4 h后,再于12 h～120 h后收获细胞和上清液(未感染DEV);上述经LPS或SN50预处理细胞4 h后接种DEV(MOI 0.01),12 h～120 h后(每间隔12 h)分别收获细胞及上清液,采用荧光定量PCR方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞中NF-κB1基因和DEV NP基因的转录水平;采用ELISA方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞上清液中NF-κB信号通路关键因子(IL-1β、IL-6和MyD88)的表达水平.结果显示:不同浓度的LPS和SN50处理对DEF细胞均无明显毒性作用.荧光定量PCR结果显示,经不同浓度LPS预处理,均能有效提高DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平,其中4.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平最高;而在LPS预处理再感染DEV后,4.0μg/mL LPS和6.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平整体上调(p<0.05),2.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平整体下调(p<0.05);不同浓度的SN50预处理后,未感染和感染DEV的DEF细胞中,均以50.0μg/mL SN50处理的细胞中NF-κB1基因的转录水平下调效果最好(p<0.05).LPS预处理DEF细胞后感染DEV,12h～84 h DEV NP基因的转录水平均受到明显抑制(p<0.01),84 h后2.0μg/mL和6.0μg/mL LPS均会促进DEV NP基因的转录水平;而经SN50预处理DEF细胞后感染DEV,细胞中DEV NP基因的转录水平均显著下降(p<0.01).ELISA结果显示,经LPS预处理后,不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-6表达量整体稍呈下降趋势(p>0.05),而IL-1β和MyD88的表达则呈无规律变化;经SN50预处理后不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-1β、IL-6和MyD88的表达均无规律变化.以上研究结果表明,不同浓度LPS均可促进正常DEF细胞中NF-κB1基因的转录,而DEV则可以阻断低浓度LPS(2.0μg/mL)的这种促进作用.不感染或感染DEV,SN50均于高浓度(50μg/mL和75μg/mL)时才能有效降低NF-κB1基因的转录水平;不同浓度的LPS或SN50均对NF-κB通路关键因子的表达基本无影响;LPS在DEV感染后期才能促进其增殖,而SN50则可以有效抑制DEV的增殖.本研究为阐明NF-κB信号通路与DEV之间的相互作用关系奠定了实验基础..

贵州省某鸡场2019年11月以来,蛋鸡产蛋率不断下降,零星出现死亡,该实验室通过流行病学调查、临床症状和解剖观察、细菌培养鉴定和病毒PCR检测等方法,对该鸡场送检鸡只进行了实验室诊断与病原的分离鉴定.解剖主要病理变化:肝脏肿大,质地变脆,并伴有出血点,脾脏肿大,法氏囊透明化且内充满乳白色液体,盲肠端充气肿胀.细菌分离得到1株形态整体呈蜡滴状,为不透明有溶血环的白色菌落,经细菌菌落形态、革兰氏染色镜检、生化鉴定和16S rDNA PCR,鉴定为蜡样芽孢杆菌.病毒PCR检测未扩增出相应目的条带.可见,此次引起蛋鸡产蛋率降低及死亡的病原为蜡样芽孢杆菌,研究结果对蛋鸡产蛋率下降及死亡提供了新的数据支持.

为查明贵州省龙里县某养殖场猪发病的原因,采集5头病死猪病料进行细菌分离培养鉴定,并进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、弓形虫的核酸检测.结果:5头病死猪病料均未分离出细菌;3头病死猪组织样品的猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸检测为阳性;5头病死猪组织样品的猪圆环病毒2型核酸检测为阳性;2头病死猪组织样品的弓形虫核酸检测为阳性;所有样品的猪伪狂犬病毒核酸检测均为阴性.结论:猪场病例存在猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒2型、弓形虫混合感染,需要加强猪群的免疫防控和净化.

为探究绵羊肺炎支原体(Mo)致不同品种羊感染及病原核酸载量的差异,本研究利用Mo贵州威宁(GZ-WN)株分别感染5个品种羊,感染后死亡或迫杀后观察各组织的剖检病变,经荧光定量PCR检测各组织Mo的核酸载量,统计分析相同品种羊不同组织中Mo的核酸载量及不同品种羊相同组织中的核酸载量.结果显示,Mo可引起5个品种羊感染,死亡率呈现白山羊、黑山羊>麻羊>波尔山羊>湖羊;Mo感染可引起5个品种羊的肺脏、气管和胸腔出现不同程度的剖检病变,黑山羊肺脏粘连与白山羊气管黏液病变较其他品种羊严重;白山羊胸腔积液较其它品种羊严重,黑山羊次之;5个品种羊的心脏、肝脏、脾脏及肾脏均无肉眼可见病变.相同品种羊不同组织中Mo核酸载量的统计分析结果显示,相同品种羊的不同组织Mo核酸载量不同,各品种羊气管中的Mo核酸载量相对最高,极显著高于其他组织的核酸载量(p<0.01);其次是肺脏,而脾脏和肾脏中的Mo载量较低.不同品种羊相同组织中的Mo核酸载量统计结果显示,5个品种羊气管中Mo核酸载量最多的是波尔山羊,最少的是白山羊,且极显著低于其他品种羊(p<0.01);黑山羊肺脏中Mo核酸载量显著高于其他品种羊(p<0.05),湖羊Mo载量最少;心脏组织中,黑山羊Mo的核酸载量显著高于除麻羊以外的其他品种羊(p<0.05),载量最少的是白山羊;肝脏组织中,Mo核酸载量最多的是麻羊,显著高于除湖羊以外的其他品种羊(p<0.05),而白山羊最少;脾脏组织中,Mo核酸载量最多的是湖羊,显著高于其他品种羊(p<0.05),最少的是麻羊.肾脏组织中,Mo核酸载量最多的是湖羊,显著高于除波尔山羊外的其他品种羊(p<0.05),最少的是麻羊.上述结果表明,Mo感染相同品种羊存在组织病变和组织核酸载量的差异,且感染羊脏器组织Mo的核酸载量与组织病变程度和临床表现呈正相关;不同品种羊感染Mo后相同组织的Mo核酸载量也不同.Mo人工感染不同品种羊组织病变与核酸载量的差异研究国内外至今无相关报道,本研究为探究Mo对不同品种羊感染差异性机制提供参考依据.

为了解近年来贵州省羊群布鲁氏菌病流行情况和发展趋势,2016—2018年根据贵州省动物疫病监测与流行病学调查计划中的采样方案,采集全省9个市(州)和3个直管县3 346个场次227 539份未免疫羊血清样品,采用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)进行布鲁氏菌检测,并就不同年份、不同类型养殖模式的个体阳性率和群体阳性率进行统计分析.结果显示:3年共检出布鲁氏菌阳性样品5 679份,个体总阳性率为2.50％(5 679/227 539),群体总阳性率为9.06％(303/3 346);2016—2018年个体阳性率从3.19％下降至1.81％,群体阳性率从11.22％下降至4.46％,均呈逐年下降趋势,表明贵州省布鲁氏菌病防控工作取得了一定成效,羊群布鲁氏菌病感染得到一定程度的控制;从不同类别场点来看,散养户群体阳性率(12.81％)＞种畜场(7.53％)＞商品代饲养场户(6.76％),说明散养户是布病传播的重要风险点,应加强重点控制;商品代饲养场户个体阳性率偏高,种畜场阳性率无明显下降,说明此类场点的布病风险也不容忽视,需要进一步加强饲养管理和生物安全管理,加快推进布病净化.本研究为贵州省羊群重大动物疫病的预警预防提供了参考.

为了解牛支原体(Mycoplasma bovis)贵州株表面膜蛋白p81基因的生物信息学特征,对2株贵州分离株p81基因进行克隆测序,应用DNAStar 7.1、Mega 5.0、Protparam、Protscale、IEBD等软件进行序列分析.结果 显示,2株M.bovis贵州分离株培养物DNA样本均能PCR扩增出2 187 bp的特异性条带,序列编码728个氨基酸,该分离株与标准株PG45进化关系最为接近,说明牛支原体p81基因具有良好的保守性.p81蛋白共存在5个N糖基化位点,59个丝氨酸、29个苏氨酸及11个酪氨酸可能被磷酸化.p81蛋白B细胞抗原表位分析显示该蛋白具有良好的抗原性.研究结果表明,p81蛋白具有作为亚单位疫苗和诊断试剂靶标蛋白的优势.

为了解牛支原体(M.bovis)贵州株GZ1、GZ2 TU基因的生物信息学特征,试验对牛支原体贵州株TU基因进行克隆测序和序列分析,应用DNAStar软件对TU基因推导氨基酸序列蛋白亲水性、表面可及性、骨架柔韧性及抗原指数进行预测和分析.结果 表明:TU基因克隆测序基因片段长度为1 009 bp,与预期相符.TU基因序列分析显示,牛支原体GZ1株与PG45标准株同源性为99.1％,与GZ2株同源性为99.0％.基因变异性显示,参考牛支原体标准株PG45,GZ1株在第55,134,191,257,389,512,674位发生了突变,在第178,951,962位发生了缺失,GZ2株仅在273位发生了突变.进化树分析显示,GZ1株与国内分离株属同一分支,进化关系近.GZ1株与GZ2、PG45株属不同分支,并且与国外的分离株进化关系较远.TU基因B细胞抗原表位预测结果显示,该蛋白亲水性、表面可及性、骨架区柔韧性都较好,抗原指数高,且分布相对均匀.该蛋白整体区域抗原优势明显,具有良好的抗原性.说明牛支原体TU基因相对保守,各地区分离株存在一定的进化关系.

为掌握贵州省马鼻疽疫情,2018年在全省开展马鼻疽紧急流行病学调查,共排查旅游景区(点)4个、养马场3个、牲畜交易市场4个,排查马属动物15.124万匹次;对其中536匹马进行鼻疽菌素点眼试验,结果均为阴性.调查结果表明,贵州省尚无马鼻疽感染疫情,鉴于贵州邻近省(市)发生马鼻疽疫情,全省在以后的工作中需加强马鼻疽防控及监测工作.

为研究枯草芽胞杆菌、酵母菌和乳酸菌三者组合的复合益生菌对早期断奶仔猪生长性能和体液免疫水平的影响,选取"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪40头,分为对照组、试验A组、试验B组和试验C组,每组10头,试验A组、试验B组和试验C组与基础饲粮按质量比分别添加1.0‰、2.0‰和3.0‰复合益生菌,对照组不添加复合益生菌,以评价复合益生菌对早期断奶仔猪生长性能、免疫器官指数、血液生理指标和血清生化指标的影响.结果表明,试验B组和试验C组末重极显著高于试验A组和对照组(P<0.01),试验C组平均日增重极显著高于试验A组、试验B组和对照组(P<0.01),对照组和试验B组腹泻率极显著高于试验A组和试验C组(P<0.01);在免疫器官指数上,试验B组、试验C组和对照组腹股沟淋巴结指数显著高于试验A组(P<0.05),试验A组、试验B组脾脏指数显著高于试验C组(P<0.05),试验各组肾脏指数均显著高于对照组(P<0.05),试验A组胸腺指数显著高于试验B组和试验C组(P<0.05);在生理水平上,试验组仔猪血液中,中间粒细胞比率、粒细胞比率、中间细胞数量、粒细胞数量、红细胞数量、血红蛋白、红细胞平均体积以及血小板数量低于对照组,且大部分指标表现为差异显著(P<0.05),淋巴细胞比率高于对照组,但差异不显著(P>0.05);在生化水平上,试验B组和试验C组谷草转氨酶含量显著高于对照组和试验A组(P<0.05).试验结果表明,枯草芽胞杆菌、酵母菌、乳酸菌三者组合的复合益生菌与基础饲粮混合可提高早期断奶仔猪生长性能和体液免疫功能.

为储备禽腺病毒病疫情防控技术,应用DNAStar软件分析GenBank中Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)全基因序列,选取Hexon基因的保守区域设计合成1对PCR引物和1条TaqMan探针,建立FAdV-4 FQ-PCR检测方法,得到相应的标准曲线,并应用该方法对临床病例和人工感染动物进行FAdV-4核酸检测.结果 表明,建立的FAdV-4 FQ-PCR方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性.

为证实鸡心包积液-肝炎综合征(hydropericardium hepatitissyndrome,HHS)在贵州省的流行、病原遗传变异和基因分型情况,对贵州首个疑似HHS病例进行实验室检测,并基于Hexon基因进行病原基因分型.结果显示:病例组织材料中PCR扩增获得约295 bp特异性Hexon基因片段;基于Hexon基因分型显示,本病例病原与国内外报道的禽腺病毒Ⅰ群血清4型(FAdV-4)同源性高达100％,与禽腺病毒Ⅰ群代表株CELO株(U46933)同源性达到64.5％;系统进化分析显示,FAdV-4贵州流行株与禽腺病毒Ⅰ群代表株CELO株和FAdV-4国内外流行株均处于同一进化分支,而与禽腺病毒Ⅱ群和禽腺病毒Ⅲ群处于不同进化分支.结果表明:本病例确为贵州省首次报道HHS病例,病原基因分型为禽腺病毒Ⅰ群血清4型,研究结果为贵州省HHS防控提供参考.